Nature.com غا كىرگىنىڭىزگە رەھمەت. سىز ئىشلىتىۋاتقان تور كۆرگۈچ نۇسخىسىدا CSS نى قوللاش چەكلىك. ئەڭ ياخشى تەجرىبە ئۈچۈن، يېڭىلانغان تور كۆرگۈچ ئىشلىتىشىڭىزنى (ياكى Internet Explorer دا ماسلىشىشچانلىق ھالىتىنى ئېتىۋېتىشىڭىزنى) تەۋسىيە قىلىمىز. بۇ ئارىلىقتا، داۋاملىق قوللاشنى كاپالەتلەندۈرۈش ئۈچۈن، تور بېكەتنى ئۇسلۇب ۋە JavaScriptسىز كۆرسىتىمىز.
ئومۇرتقىلىق ھايۋانلاردىن پەرقلىق ھالدا، ھاشاراتلاردا ئەرلەرگە مايىل جىنسىي ستېروئىد ھورمۇنلىرى كەمچىل دەپ قارىلىدۇ. Anopheles gambiae دا، ئېكدىزون ستېروئىدى 20-گىدروكسىئېكدىزون (20E) ئاياللار تەرىپىدىن سىنتېزلانغاندا تۇخۇمنىڭ تەرەققىياتىنى كونترول قىلىش ۋە ئەرلەر تەرىپىدىن جىنسىي يول بىلەن يۆتكەلگەندە جۈپلىشىشكە قارشى تۇرۇش مەزگىلىنى پەيدا قىلىش ئۈچۈن تەرەققىي قىلغاندەك قىلىدۇ3. تۇخۇمنىڭ تەرەققىياتى ۋە جۈپلىشىش مۇھىم كۆپىيىش خۇسۇسىيىتى بولغاچقا، ئايال Anopheles پاشىلىرىنىڭ بۇ ھورمۇن سىگناللىرىنى قانداق بىرلەشتۈرىدىغانلىقىنى چۈشىنىش يېڭى بەزگەك كونترول قىلىش پروگراممىلىرىنى لايىھىلەشنى ئاسانلاشتۇرالايدۇ. بۇ يەردە، بىز بۇ كۆپىيىش فۇنكسىيەلىرىنىڭ ئېكدىزوننى ئاكتىپلاشتۇرىدىغان/ئىجابىيسىزلاندۇرىدىغان ئېنزىملارنىڭ مۇرەككەپ تورى ئارقىلىق ئايرىم جىنسىي ستېروئىدلار تەرىپىدىن تەڭشىلىنىدىغانلىقىنى ئاشكارىلىدۇق. بىز ئەرلەرگە خاس ئوكسىدلانغان ئېكدىزون، 3-دېھىدرو-20E (3D20E) نى بايقىدۇق، ئۇ جىنسىي يول بىلەن يۆتكەلگەندىن كېيىن ئاياللارنىڭ جىنسىي قوبۇل قىلىش ئىقتىدارىنى توسۇش ۋە فوسفورسىزلىنىش ئارقىلىق ئاكتىپلاشتۇرۇش ئارقىلىق ئاتا-ئانىلارنى قوغدايدۇ. ئالاھىدە تەكىتلەپ ئۆتۈشكە تېگىشلىكى، 3D20E يۆتكەلمىسى يەنە پلازمودىيۇم يۇقۇملىنىشى جەريانىدا تۇخۇمنىڭ تەرەققىياتىنى ساقلايدىغان كۆپىيىش گېنلىرىنىڭ ئىپادىلىنىشىنى قوزغىتىپ، يۇقۇملانغان ئاياللارنىڭ ساغلاملىقىغا كاپالەتلىك قىلدى. ئاياللاردىن ئېلىنغان 20E ... جىنسىي ئىنكاس قوزغىمايدۇ، ئەمما 20E نى چەكلەيدىغان كىنازالار چەكلەنگەندىن كېيىن جۈپلىشىدىغانلارنىڭ تۇخۇم تۇغۇشىغا يول قويىدۇ. بۇ ئەرگە خاس ھاشارات ستېروئىد ھورمۇنىنىڭ ئېنىقلىنىشى ۋە ئۇنىڭ ئاياللارنىڭ جىنسىي قوبۇل قىلىشچانلىقى، تۇغۇشچانلىقى ۋە پلازمودىيۇم بىلەن بولغان ئۆزئارا تەسىرىنى تەڭشەشتىكى رولى، بەزگەك تارقىغۇچى پاشىلارنىڭ كۆپىيىش مۇۋەپپەقىيىتىنى تۆۋەنلىتىش ئېھتىماللىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.
ئانوفېلېس پاشىلىرىنىڭ كەڭ كۆلەمدە ھاشاراتلارغا قارشى تۇرۇش كۈچى سەۋەبىدىن، بەزگەك كېسىلىگە گىرىپتار بولۇش ۋە ئۆلۈش ئەھۋالى يەنە كۆپىيىۋاتىدۇ4. بۇ پاشىلار ئىنسانلارنىڭ بەزگەك پارازىتلىرىنىڭ بىردىنبىر تارقىلىش ۋاسىتىسى. بۇ پاشىلارنىڭ جۈپلىشىش بىئولوگىيىسى يېڭى بەزگەكنى كونترول قىلىش تەدبىرلىرى ئۈچۈن ئالاھىدە جەلپ قىلارلىق نىشان بولۇپ، چۈنكى ئۇرغىچىلىرى پەقەت بىرلا قېتىم جۈپلىشىدۇ5؛ بۇ يەككە جۈپلىشىش ۋەقەسىنى مىكروبسىز قىلىش دالادىكى پاشىلارنىڭ سانىنى ئازايتىشتا زور پوتېنسىيالغا ئىگە.
ئاياللار ئەرلەردىن يۇقىرى تىترلىق ستېروئىد گورمونلىرىنى قوبۇل قىلغاندىن كېيىن جىنسىي جەھەتتىن ئىقتىدارسىز بولۇپ قالىدۇ. تەتقىقاتلار شۇنى كۆرسەتتىكى، كېيىنكى جۈپلىشىشتىكى قىيىنچىلىقنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدىغان ئامىل 20-گىدروكسىئېكدىزون (20E) بولۇپ، بۇ ستېروئىد گورمون لىچىنكا باسقۇچىدىكى ئېرىتىش دەۋرىنى تەڭشىگۈچى دەپ قارىلىدۇ. ئەرلەرنىڭ 20E نى بىرىكتۈرۈش ۋە يۆتكەش ئىقتىدارى ئافرىقىدا تارقالغان ۋە Anopheles gambiae قاتارلىق ئەڭ خەتەرلىك بەزگەك ۋېكتورلىرىنى ئۆز ئىچىگە ئالغان Cellia7 تۈرىنىڭ بىر قىسمى بولغان Anopheles تۈرىدە تەرەققىي قىلغان. بۇ ئالاھىدە دىققەتكە سازاۋەر، چۈنكى بۇ تۈرلەردە ئاياللار ھەر قېتىم قان يېيىشتىن كېيىن 20E ئىشلەپچىقىرىدۇ، 20E تۇخۇم چىقىرىش دەۋرىنى قوزغىتىدۇ (8-پايدىلىنىشقا قاراڭ). قانداقلا بولمىسۇن، ئاياللارنىڭ ئىككى خىل ئېكدىزون مەنبەسىدىن (ئەرلەرنىڭ يۆتكىلىشى ۋە قان يېيىشنى قوزغىتىش) سىگناللارنى قانداق بىرلەشتۈرۈش ئۇسۇلى ھەققىدە ئاز نەرسە مەلۇم، ئۇلار ئۆزلىرىنىڭ جۈپلىشىش ئىقتىدارىغا تەسىر كۆرسەتمەيدۇ. ئەمەلىيەتتە، ئەگەر ئاياللار ئىشلەپچىقارغان 20E جىنسىي چىدامسىزلىقنى قوزغىسا، بۇ پاك بېقىلغان ئاياللاردا تۇغماسلىقنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ، بۇ بۇ پاشىلاردا ناھايىتى كۆپ ئۇچرايدىغان قىلمىش.
بۇنىڭ مۇمكىن بولغان چۈشەندۈرۈشى شۇكى، A. gambiae ئەرلىرى ئۆزگەرتىلگەن ئەرگە خاس ئېكدىزوننى يۆتكىيەلەيدۇ، بۇ ئېكدىزون ئاياللارنىڭ كۆپىيىش يولىدىكى سىگنال كاسكادىنى قوزغىتىپ، جۈپلىشىشنىڭ مۇقىمسىزلىقىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ. قانداقلا بولمىسۇن، ئومۇرتقىلىق ھايۋانلاردا ئېستروگېن ۋە ئاندروگېن قاتارلىق كۆپ خىل ستېروئىد ھورمۇنلىرى بولسىمۇ (9-پايدىلىنىشتا باھالانغان)، بىزنىڭ بىلىشىمىزچە، ھاشاراتلاردا ئاندروگېنغا مايىل ستېروئىدلار بايقالمىغان.
بىز جىنسىي جەھەتتىن يېتىلگەن A. gambiae نىڭ ئەرلەر قوشۇمچە بېزىدىكى (MAG) ستېروئىد ھورمۇنلىرىنىڭ رېپېرتورانىنى ئېنىقلاشقا كىرىشتۇق، بۇنىڭدا ئۆزگەرتىشكە بولىدىغان ستېروئىدلارنى ئىزدىدۇق. ئىلگىرى ئىشلىتىلگەن ئانچە ئېنىق بولمىغان ئۇسۇلنىڭ ئورنىغا، يۇقىرى ئۈنۈملۈك سۇيۇقلۇق خروماتوگرافىيەسى ۋە تاندېم ماسسا سپېكترومېتىرىيەسى (HPLC-MS/MS) ئارقىلىق، بۇ توقۇلمىدا ئېكدىزون (E) ۋە 20E بايقاپ، ئىلگىرىكى نەتىجىنى جەزملەشتۈردۇق. قانداقلا بولمىسۇن، ئەۋرىشكە ئوكسىدلانغان فوسفورلانغان ستېروئىدلار ئاساسلىق ئورۇندا تۇراتتى، بۇ 3-دېھىدرو-20E-22-فوسفات (3D20E22P) فورمۇلاسىغا ماس كېلىدۇ12 (1-رەسىم). باشقا شەكىللەر 3-دېھىدرو-20E (3D20E) ۋە 20E-22-فوسفات (20E22P) نى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ. 3D20E22P نىڭ HPLC-MS/MS سىگنال كۈچلۈكلۈكى ئۇنىڭ فوسفورسىزلانغان شەكلى 3D20E دىن ئىككى دەرىجە يۇقىرى، E ۋە 20E دىن ئۈچ دەرىجە يۇقىرى ئىدى (1-رەسىم). گەرچە باشقا قىسىملىرىدا... بەدەن ۋە تۆۋەنكى كۆپىيىش يولى (LRT؛ كېڭەيتىلگەن سانلىق مەلۇمات 1a-رەسىم). بىز يەنە يېڭىدىن تاقىلىپ قالغان (<1 كۈنلۈك) ئەر ۋە ئاياللاردىكى ئېكدىستېروئىدلارنى تەھلىل قىلدۇق ۋە پەقەت MAG دا 3D20E ۋە 3D20E22P نى بايقىدۇق؛ ھەر ئىككى جىنىستا E، 20E ۋە 20E22P بار ئىدى (كېڭەيتىلگەن سانلىق مەلۇمات 1b-رەسىم). بۇ سانلىق مەلۇماتلار A. gambiae نىڭ چوڭ ئەرلەر MAG دا ئاياللار تەرىپىدىن سىنتېزلانمايدىغان يۇقىرى تىترلىق ئۆزگەرتىش گورمونلىرىنى ئىشلەپچىقىرىدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.
MAG ۋە ئايال LRT (ئۈستۈنكىلەر، ئۇرۇق خالتىسى ۋە پاروۋارىينى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ) 4 كۈنلۈك (4 كۈنلۈك) قىزلىق ئەر ۋە قىزلىق ۋە جۈپلەشكەن ئايال (0.5، 3 ۋە 12 hpm) دىن ئايرىۋېلىندى. بۇ توقۇلمىلاردىكى ئېكدىزون HPLC-MS/MS ئارقىلىق ئانالىز قىلىندى (ئوتتۇرىچە ± sem؛ جۈپلەشمىگەن t-سىناق، ئىككى تەرەپلىك، يالغان بايقاش نىسبىتى (FDR) تۈزىتىلدى؛ NS، مۇھىم ئەمەس؛ *P < 0.05، **P < 0.01. 3D20E: 3 سائەت 0.5 سائەتكە قارشى، P = 0.035؛ 12 سائەت 3 سائەتكە قارشى، P = 0.0015؛ 12 سائەت 0.5 سائەتكە قارشى، P = 0.030. 3D20E22P: 3 سائەت 0.5 سائەتكە قارشى، P = 0.25؛ 12 سائەت 3 سائەتكە قارشى، P = 0.0032؛ 12 سائەت 0.5 سائەتكە سېلىشتۇرغاندا، P = 0.015). سانلىق مەلۇماتلار ئۈچ خىل بىئولوگىيىلىك تەكرارلىنىشتىن ئېلىنغان. قىزىقىدىغان ھەر بىر ئېكدىزوننىڭ چوققا رايونى ھېسابلىنىپ، پاشىلارنىڭ سانى بىلەن نورماللاشتۇرۇلدى. ئېكدىزون تۆۋەندىكىدەك رەڭ بىلەن ئىپادىلىنىدۇ: E، يېشىل؛ 20E، ئاپېلسىن؛ 20E22P، بىنەپشە؛ 3D20E، كۆك؛ 3D20E22P، ھالرەڭ. قىستۇرما رەسىم y ئوقىدىكى كۆلەمنى ئاشۇرۇپ، ئېكدىزوننىڭ تۆۋەن سەۋىيىسىنى كۆرسىتىدۇ.
3D20E22P ۋە 3D20E نىڭ جۈپلىشىش جەريانىدا يۆتكىلىپ كېلىدىغان-كەلمەيدىغانلىقىنى تەكشۈرۈش ئۈچۈن، بىز جۈپلەشكەندىن كېيىنكى ھەر خىل ۋاقىت نۇقتىلىرىدا ئايال LRT لارنى ئايرىدۇق. گەرچە قىزلاردا ئېكدىزون بايقالمىغان بولسىمۇ، بىز جۈپلەشكەندىن كېيىن دەرھال (جۈپلەشكەندىن كېيىنكى 0.5 سائەت، hpm) LRT دا كۆپ مىقداردا 3D20E22P نىڭ بارلىقىنى، ۋاقىتنىڭ ئۆتۈشىگە ئەگىشىپ تۆۋەنلىگەنلىكىنى، 3D20E سەۋىيەسىنىڭ بولسا كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە ئاشقانلىقىنى كۆردۇق (1-رەسىم). خىمىيىلىك ئۇسۇلدا بىرىكتۈرۈلگەن 3D20E نى ئۆلچەم قىلىپ ئىشلىتىپ، بىز جۈپلەشكەن LRT دىكى بۇ ستېروئىد ھورمۇنىنىڭ سەۋىيەسىنىڭ 20E دىن كەم دېگەندە 100 ھەسسە يۇقىرى ئىكەنلىكىنى بايقىدۇق (كېڭەيتىلگەن سانلىق مەلۇمات جەدۋىلى 1). شۇڭا، 3D20E22P جۈپلىشىش جەريانىدا ئايال LRT غا يۆتكىلىدىغان ئاساسلىق ئەر ئېكدىزون بولۇپ، ئۇنىڭ فوسفورسىزلانغان شەكلى 3D20E جۈپلەشكەندىن كېيىن قىسقا ۋاقىت ئىچىدە ئىنتايىن كۆپىيىدۇ. بۇ، كېيىنكى ئېكدىزوننىڭ ئاياللار جۈپلەشكەندىن كېيىنكى بىئولوگىيەدە مۇھىم رول ئوينايدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.
يېڭى RNA تەرتىپلەش (RNA-seq) سانلىق مەلۇمات توپلىمىنى ھاسىل قىلغاندىن كېيىن (2a-رەسىم)، خاسلاشتۇرۇلغان بىئوئىنفورماتىكا تۇرۇبا يولى ئارقىلىق، بىز ئېكدىزون كىنازا (EcK)، ئېكدىزون ئوكسىدازا (EO) ۋە 20E ئۆزگەرتىلگەن فوسفاتازا گېنىنى كودلايدىغان ئېكدىزوننى ئىزدىدۇق. EPP) كۆپىيىش توقۇلمىلىرىدا ئىپادىلىنىدۇ. بىز بىر نامزات EPP گېنى ۋە ئىككى مۇمكىن بولغان EcK گېنى (EcK1 ۋە EcK2) نى بايقىدۇق، ئەمما ياخشى نامزات EO گېنىنى تاپالمىدۇق. ئالاھىدە تىلغا ئېلىشقا ئەرزىيدىغىنى، گامبىيە MAG لىرىدا يەككە EPP گېنى يۇقىرى سەۋىيىدە (98.9-پېرسەنتىل) ئىپادىلەنگەن، ئەمما ئايال LRT لاردا ئىپادىلەنمىگەن (2b-رەسىم)، بۇ بىزنىڭ ئۈمىدىمىزگە زىت، چۈنكى بۇ ئايال توقۇلمىسىدا 3D20E22P نىڭ فوسفورسىزلىنىشى يۈز بەرگەن. شۇڭا، بىز ئەر EPP نىڭ جۈپلىشىش جەريانىدا يۆتكىلىشى مۇمكىن دەپ قارايمىز. ھەقىقەتەن، بىز جۈپلىشىشتىن كېيىن ئايال ئاقسىلىنى يوشۇرۇش ئۈچۈن تىرىك جانلىقلارغا مۇقىم ئىزوتوپ بەلگىسىنى ئىشلەتتۇق، بۇ ئېنزىم ئايالنىڭ دىرىيۇمىدا MS تەرىپىدىن بايقالغان (رەسىم 1). 2c ۋە قوشۇمچە جەدۋەل 1). MAG ۋە جۈپلەشكەن (ئەمما پاك ئەمەس) ئاياللار LRT دا EPP نىڭ بارلىقى ئالاھىدە ئانتىتېلا ئارقىلىق جەزملەشتۈرۈلدى (رەسىم 2d).
a، ھەر بىر جىنىسنىڭ كۆپىيىش توقۇلمىلىرىدىن EcK، EO ۋە EPP نى كودلايدىغان گېنلارنى ئىزدەش ئۈچۈن خاسلاشتۇرۇلغان بىئوئىنفورماتىكا تۇرۇبا يولى. ئوقلارنىڭ يېنىدىكى سانلار ھەر بىر باسقۇچتىكى ئەر ۋە ئايال نامزاتلارنىڭ سانىنى كۆرسىتىدۇ. بۇ ئانالىز ئەرلەردە ئىپادىلىنىدىغان بىر EPP گېنى (EPP) ۋە بىر EcK گېنى (EcK1) نى، ھەمدە ھەر ئىككى جىنىستا ئىپادىلىنىدىغان، ئەمما نامزات EO گېنىنى چىقارمايدىغان بىر EcK گېنى (EcK2) نى ئېنىقلىدى. b، قىزلىق (V) ۋە جۈپلىشىش (M) Anopheles gambiae ۋە Anopheles albicans توقۇلمىلىرىدىكى نامزات گېن ئىپادىسىنى سېلىشتۇرۇش ئىسسىقلىق خەرىتىسى. Spca، ئۇرۇقلاندۇرۇش؛ MAGs، ئەرلەردىكى قوشۇمچە بەزلەر. بەدەننىڭ باشقا قىسىملىرى، جۈملىدىن ئىككى جىنىستىكى كۆكرەك، قانات، پۇت، مايلىق بەدەن ۋە ئىچكى ئەزالار، ئاياللاردا تۇخۇمدان قاتارلىقلار. EcK2 گامبىيەنىڭ MAG ۋە دىئاترىيىسىدە يۇقىرى ئىپادىلىنىدۇ، EPP بولسا پەقەت MAG.c دا بايقالغان. ئەرلەرنىڭ ئېياكۇلاتوم گۇرۇپپىسىنىڭ ئايال دىئاترىيىسىگە 3، 12 ۋە 24 ئات كۈچىدە يۆتكىلىشىنىڭ پروتېئومىيىلىك ئانالىزى، بۇ 67 خىل ئەڭ مول ئاقسىلنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. ئاياللار بارلىق ئاقسىللارنى بەلگە قويۇش (ۋە ماسكا قويۇش) ئۈچۈن 15N قوشۇلغان يېمەك-ئىچمەك بىلەن بېقىلدى. بەلگە قويۇلمىغان ئەرلەر بەلگە قويۇلغان ئاياللار بىلەن جۈپلەشتۈرۈلدى، ئايال LRT لار پروتېئومىيىلىك ئانالىز ئۈچۈن 3، 12 ۋە 24 ئات كۈچىدە پارچىلاندى (ئېياكۇلاتومىيىلىك ئاقسىللارنىڭ تولۇق تىزىملىكى ئۈچۈن 1-قوشۇمچە جەدۋەلگە قاراڭ). بۇ توقۇلمىلارنىڭ پروتېئومىيىلىك ئانالىزى ئارقىلىق قىز ئەرلەرنىڭ MAG دا EPP، Eck1 ۋە EcK2 بايقالدى. d، جۈپلەشتۈرۈلگەن ئاياللارنىڭ MAG ۋە LRT دا EPP غەربىي بلوت ئارقىلىق بايقالدى، ئەمما قىز ئاياللار ياكى ئەرلەر ياكى ئاياللارنىڭ قالغان قىسمىدا بايقالمىدى. بەدەن. پەردىلەر بىرلا ۋاقىتتا ئانتى-ئاكتىن (يۈكلەش كونترولى) ۋە ئانتى-EPP ئانتىتېلاسى بىلەن تەكشۈرۈلدى. بارلىق ئەرلەر قىز. گېل مەنبەسى سانلىق مەلۇماتلىرى ئۈچۈن قوشۇمچە 1-رەسىمگە قاراڭ. غەربچە بلوت تەكشۈرۈش ئىككى قېتىم ئېلىپ بېرىلدى، نەتىجىلىرى ئوخشاش بولدى.
EPP نىڭ ئېكدىستېروئىد فوسفوفوسفاتازا پائالىيىتى MAG دىن ئايرىۋېلىنغان 3D20E22P بىلەن HPLC-MS/MS ئارقىلىق ئىنكۇباتسىيە قىلىنغاندىن كېيىن تەكشۈرۈلدى (كېڭەيتىلگەن سانلىق مەلۇمات رەسىم 2a). بۇنىڭدىن باشقا، بىز RNA ئارقىلىق ئارىلىشىش (RNAi) ئارقىلىق EPP نى جىمجىتلىغاندا، بۇ ئەرلەرنىڭ كۆپىيىش توقۇلمىلىرىدا فوسفوسفاتازا پائالىيىتىنىڭ كۈچلۈك تۆۋەنلىگەنلىكىنى بايقىدۇق (رەسىم 3a)، ھەمدە EPP ئارقىلىق جىمجىتلانغان ئەرلەر بىلەن جۈپلەشكەن ئاياللاردا قىسمەن گېن جىمجىتلانغان بولسىمۇ، فوسفو ...
a، قوش زەنجىرلىك EPP RNA (dsEPP) ياكى قوش زەنجىرلىك GFP RNA (dsGFP) كونترول ماددىسى ئارقىلىق EPP نىڭ جىمجىتلىقى سەۋەبىدىن MAG دىكى فوسفاتازا پائالىيىتىنىڭ تۆۋەنلىشى. ھەر بىر تەكرارلىنىشتا يىگىرمە MAG كۆلچىكى ئىشلىتىلدى (P = 0.0046، جۈپلەشكەن t-سىناق، ئىككى تەرەپلىك)، ئايرىم نۇقتىلار بىلەن ئىپادىلەندى. b، EPP جىمجىتلىقى بىلەن جۈپلەشكەن ئاياللاردا 3 ئات كۈچى/مىنۇتتا فوسفورسىزلانغان 3D20E نىڭ نىسبىتى كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە تۆۋەن بولدى (P = 0.0043، جۈپلەشمىگەن t-سىناق، ئىككى تەرەپلىك)، ھالبۇكى 20E سەۋىيەسىگە تەسىر كۆرسىتىلمىدى (P = 0.063، جۈپلەشمىگەن). t-سىناق، ئىككى تەرەپلىك). سانلىق مەلۇماتلار ھەر بىرى 13، 16 ۋە 19 چىشى ھايۋاندىن تەركىب تاپقان ئۈچ توپتىن ئېلىنغان ئوتتۇرىچە ± sem سۈپىتىدە كۆرسىتىلدى. c، EPP جىمجىت ئەر ھايۋانلار بىلەن جۈپلەشكەن چىشى ھايۋانلارنىڭ قايتا جۈپلىشىش نىسبىتى كۆرۈنەرلىك يۇقىرى بولدى (P = 0.0002، فىشېرنىڭ ئېنىق سىنىقى، ئىككى تەرەپلىك). چىشى ھايۋانلار ئالدى بىلەن جۈپلىشىش ھالىتىنى كاپالەتلەندۈرۈش ئۈچۈن جۈپلىشىشكە مەجبۇرلاندى؛ 2 كۈندىن كېيىن، ئۇلار باشقا ترانسگېنلىق سپېرما توشۇغۇچى ئەرلەر بىلەن ئالاقىلىشىپ، ترانسگېننىڭ مىقدارلىق PCR تەكشۈرۈش ئارقىلىق قايتا جۈپلىشىش نىسبىتىنى باھالىدى. d، قان بىلەن بېقىلغان ئۇرغىچىلارنىڭ EPP بىلەن جىمجىتلاشتۇرۇلغان ئەركەكلەر بىلەن جۈپلىشىشىنىڭ تۇغۇش ئىقتىدارى كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە تۆۋەنلىگەن (P < 0.0001؛ مان-ۋىتنىي سىنىقى، ئىككى تەرەپلىك) ۋە تۇخۇم سانى ئازراق تۆۋەنلىگەن (P = 0.088، مان-ۋىتنىي سىنىقى، ئىككى تەرەپلىك)، تۇخۇم تۇغۇش نىسبىتىگە تەسىر يەتمىگەن (P = 0.94، فىشېرنىڭ ئېنىق سىنىقى، ئىككى تەرەپلىك). بارلىق تاختىلاردا، n بىئولوگىيىلىك جەھەتتىن مۇستەقىل پاشا ئەۋرىشكىسىنىڭ سانىنى كۆرسىتىدۇ. NS، مۇھىم ئەمەس.*P < 0.05، **P < 0.01، ***P < 0.001، ****P < 0.001.
ئاندىن، بىز ئېكدىزوننىڭ فوسفورسىزلىنىشىنىڭ ئاياللاردا جۈپلىشىشكە قارشى تۇرۇش كۈچىنى ئاشۇرۇشتا مۇھىم ياكى ئەمەسلىكىنى باھالىدۇق. ئالاھىدە تەكىتلەپ ئۆتىدىغىنى شۇكى، EPP كەمچىل ئەرلەر بىلەن جۈپلەشكەن ئاياللار قوشۇمچە (ترانسگېنلىق) ئەرلەرگە دۇچ كەلگەندە، كونترول گۇرۇپپىسىدىكى ئاياللارغا قارىغاندا (10.4%) كۆپ قېتىم جۈپلەشكەن (44.9%) (3c-رەسىم). بىز يەنە تۇغۇش ئىقتىدارىنىڭ كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە تۆۋەنلىگەنلىكىنى (3d-رەسىم، سول تەرەپ) ۋە بۇ ئاياللار قويغان تۇخۇم سانىنىڭ ئازراق تۆۋەنلىگەنلىكىنى (3d-رەسىم، ئوتتۇرىدا) كۆزەتتۇق، ئاياللار قويغان تۇخۇم نىسبىتى (جۈپلىشىش ئارقىلىق ئاياللاردا پەيدا بولغان يەنە بىر ئىنكاس) تەسىرگە ئۇچرىمىدى (3d-رەسىم، ئوڭ تەرەپ). 3D20E22P ئۈچۈن EPP نىڭ كۆزىتىلگەن ئالاھىدىلىكىنى نەزەرگە ئالساق، بۇ نەتىجىلەر جۈپلىشىش جەريانىدا يۆتكەلگەن EPP تەرىپىدىن 3D20E نىڭ ئاكتىپلىنىشى ئاياللارنىڭ كېيىنكى جۈپلىشىشنى قوبۇل قىلىشىنى توختىتىشتا مۇھىم رول ئوينايدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ، بۇ قىلمىش ئىلگىرى 20E نىڭ جىنسىي يۆتكىلىشى بىلەن مۇناسىۋەتلىك ئىدى. شۇڭلاشقا، بۇ ئەرلەرگە خاس گورمون ئاياللارنىڭ تۇغۇش ئىقتىدارىغىمۇ كۈچلۈك تەسىر كۆرسىتىدۇ.
ئاندىن، بىز خىمىيىلىك ئۇسۇلدا بىرىكتۈرۈلگەن 3D20E (4a-c-رەسىم) ۋە بازاردا سېتىلىۋاتقان 20E نى ئىشلىتىپ، جىنسىي جەھەتتىن يېتىلگەن قىزلارغا ئوكۇل قىلىش تەجرىبىسىدە 20E ۋە 3D20E نىڭ ئاكتىپلىقىنى سېلىشتۇردۇق. بىز 3D20E نىڭ ھەر ئىككى خىل قويۇقلۇقتا (4d-رەسىم) ئاياللار جۈپلىشىشكە بولغان سەزگۈرلۈكىنى ئۆچۈرۈشتە 20E دىن كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە ئۈنۈملۈك ئىكەنلىكىنى كۆزەتتۇق. دىققەت قىلىشقا ئەرزىيدىغىنى شۇكى، LRT دىكى 3D20E نىڭ فىزىئولوگىيىلىك سەۋىيەسىنىڭ يېرىمى (ئوكۇل قىلىنغاندىن كېيىن 1066 pg غا سېلىشتۇرغاندا، جۈپلەشكەندىن كېيىن 2022 pg) ئەڭ يۇقىرى قويۇقلۇقتا، يەنى جۈپلەشكەندىن كېيىن 18 pg دا ئوكۇل قىلىنغاندىن كېيىن 24 سائەت ئىچىدە، ئوكۇل قىلىنغاندىن كېيىن 20E نىڭ فىزىئولوگىيىلىك سەۋىيەسىدىن (ئوكۇل قىلىنغاندىن كېيىن 361 pg) 20 ھەسسە يۇقىرى بولغان، چىداملىق ئاياللار نىسبىتىنى كەلتۈرۈپ چىقاردى. كېڭەيتىلگەن سانلىق مەلۇمات جەدۋىلى 1). بۇ نەتىجە 20E نىڭ جىنسىي يول ئارقىلىق يۆتكىلىشى جۈپلىشىشنىڭ ئەسلىگە كېلىش مەزگىلىنى كەلتۈرۈپ چىقارمايدۇ دېگەن قاراشقا ماس كېلىدۇ، شۇنداقلا 3D20E نىڭ ئاتا-ئانا بىلەن بالا مۇناسىۋىتىنى كاپالەتلەندۈرۈشتىكى ئاساسلىق ئامىل ئىكەنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. 3D20E يەنە پاك ئاياللاردا تۇخۇم تۇغۇش سىنىقىدا 20E دىن كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە ئاكتىپ بولغان (4e-رەسىم)، بۇ قىسمەن EPP جىمجىتلاشتۇرۇلغاندىن كېيىن كۆزىتىلگەن نورمال تۇخۇم تۇغۇش سۈرئىتىنىڭ جۈپلىشىش ئارقىلىق پەيدا بولغان ئايال ئامىللار تەرىپىدىن يەنىلا پەيدا قىلىنغان قالدۇق 3D20E پائالىيىتىنىڭ مەۋجۇتلۇقىدىن كېلىپ چىققانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.
(a,b) 20E دىن خىمىيىلىك ئۇسۇلدا بىرىكتۈرۈلگەن 3D20E (a) ئىنتايىن يۇقىرى ئايلاندۇرۇش/ئۈنۈملۈك بىلەن (سانلىق مەلۇمات ئۈچ مۇستەقىل بىرىكتۈرۈش رېئاكسىيەسىدىن ئېرىشكەن ئوتتۇرىچە ± sem سۈپىتىدە كۆرسىتىلدى) (b).c، ماسسا سپېكتىرى (ئاستىكى يېرىم) جۈپلەشكەن ئايال LRT (ئۈستۈنكى يېرىم).d دىكى ئېكدىزون بىلەن پۈتۈنلەي ماس كېلىدۇ، 20E (0.63 µg, P = 0.02; 0.21 µg, P < 0.0001; فىشېرنىڭ ئېنىق سىنىقى، ئىككى تەرەپلىك) ۋە %10 ئېتانول (0.63 µg, P < 0.0001; 0.21 µg, P < 0.0001; فىشېرنىڭ ئېنىق سىنىقى، ئىككى تەرەپلىك) بىلەن سېلىشتۇرغاندا، 20E پەقەت يۇقىرى مىقداردا (0.63 µg, P = 0.0002; 0.21 µg, P = 0.54; فىشېرنىڭ ئېنىق سىنىقى، ئىككى تەرەپلىك).e بىلەن سېلىشتۇرغاندا، 20E كونترول گۇرۇپپىسىدىكىدىن كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە يۇقىرى بولغان. 3D20E ئوكۇلى قىزلىق ئاياللاردا %10 ئېتانول كونترول گۇرۇپپىسىغا قارىغاندا تۇخۇم تۇغۇش نىسبىتىنىڭ كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە يۇقىرى بولۇشىنى كەلتۈرۈپ چىقاردى (0.21 µg, P < 0.0001; 0.13 µg, P = 0.0003; فىشېرنىڭ ئېنىق سىنىقى، ئىككى تەرەپلىك)، كونترول گۇرۇپپىسىغا سېلىشتۇرغاندا 20E پەقەت يۇقىرى مىقداردا (0.21 µg, P = 0.022; 0.13 µg, P = 0.0823; فىشېرنىڭ ئېنىق سىنىقى، ئىككى تەرەپلىك). 3D20E يۇقىرى مىقداردا (0.21 µg, P = 0.0019; 0.13 µg, P = 0.075; فىشېرنىڭ ئېنىق سىنىقى، ئىككى تەرەپلىك) 20E غا قارىغاندا تۇخۇم تۇغۇش نىسبىتىنىڭ كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە يۇقىرى بولۇشىنى كەلتۈرۈپ چىقاردى. بارلىق تاختىلاردا، n بىئولوگىيىلىك جەھەتتىن مۇستەقىل پاشا ئەۋرىشكىسىنىڭ سانىنى كۆرسىتىدۇ. NS، مۇھىم ئەمەس.*P < 0.05, **P < 0.01, ***P < 0.001, ****P < 0.001. سانلىق مەلۇماتلار ئۈچ قېتىم تەكرارلانغان.
ئىلگىرىكى تەتقىقاتلاردا، بىز ستېروئىد ھورمۇنلىرىنىڭ جىنسىي يول ئارقىلىق يۆتكىلىشىنىڭ MISO (جۈپلىشىش ئارقىلىق قوزغىتىلغان ئوئوگېنېز 11) نىڭ ئىپادىلىنىشىنى قوزغىتىدىغانلىقىنى، بۇ گېن ئاياللارنىڭ كۆپىيىش گېنى بولۇپ، A. gambiae ئاياللارنى P. falciparum يۇقۇملىنىشىدىن قوغدايدۇ. بۇ ئەڭ ئۆلۈمگە ئېلىپ بارىدىغان ئىنسان بەزگەك پارازىتى 13 كەلتۈرۈپ چىقارغان ساغلاملىق چىقىملىرى. MISO نىڭ بەزگەك تارقالغان رايونلاردا Anopheles نىڭ كۆپىيىش ئىقتىدارىغا بولغان مۇھىملىقىنى كۆزدە تۇتۇپ، بىز قايسى 3D20E ياكى 20E ھورمۇنى بۇ گېننىڭ ئىپادىلىنىشىنى قوزغىتىدىغانلىقىنى ئېنىقلاشقا قارار قىلدۇق. بىز 20E ئوكۇلىنىڭ HR3 ۋە HR4 قاتارلىق بەزى يادرو ھورمۇن رېتسېپتورلىرىنى (HR) ئالاھىدە ياكى تېخىمۇ كۈچلۈك قوزغىتىدىغانلىقىنى ۋە Vg14، 15، 16 قاتارلىق ئادەتتىكى تۆۋەن ئېقىمدىكى ستېروئىد نىشانلىرىنى قوزغىتىدىغانلىقىنى بايقىدۇق، MISO نىڭ 3D20E تەرىپىدىن تېخىمۇ كۈچلۈك قوزغىتىلغانلىقىنى بايقىدۇق (كېڭەيتىلگەن سانلىق مەلۇمات رەسىم 3). شۇڭا، بۇ ئاندروگېن ستېروئىد ھورمۇنىنىڭ جىنسىي يول ئارقىلىق يۆتكىلىشى ئاياللارنى پارازىت يۇقۇملىنىشى كەلتۈرۈپ چىقىرىدىغان چىقىملاردىن قوغدايدىغان مېخانىزملارنى قوزغىتىدىغاندەك قىلىدۇ. بۇنىڭدىن باشقا، 3D20E ھەر ئىككى ئىزوفورماغا ئوخشىمايدىغان تەسىر كۆرسىتىدۇ. E رېتسېپتورى EcR نىڭ EcR نى قوزغىتىپ، EcR-A نى باستۇرۇپ، ئاياللارنىڭ تۇغۇش ئىقتىدارىغا تەسىر كۆرسىتىدىغان HPX15 قاتارلىق باشقا جۈپلىشىشنى قوزغىتىدىغان گېنلارنى تېخىمۇ كۈچلۈك قوزغىتىدۇ. بۇ EPP جىمجىت ئەرلەر بىلەن جۈپلەشكەن ئاياللاردا كۆزىتىلگەن كۆرۈنەرلىك تۇغماسلىقنى چۈشەندۈرۈپ بېرەلەيدۇ (كېڭەيتىلگەن سانلىق مەلۇمات رەسىم 3). بۇ سانلىق مەلۇماتلار جىنىسقا خاس ئىقتىدارنىڭ ئاساسى بولۇشى مۇمكىن بولغان ئىككى ئېكدىزون گورمونى تەرىپىدىن ئاكتىپلاشتۇرۇلغان تۆۋەنكى ئېقىم يوللىرىنىڭ مەۋجۇتلۇقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.
ئاندىن، بىز بىئوئىنفورماتىكا تۇرۇبا يولىمىزدا بايقالغان ئىككى EcK گېنىنىڭ ئىقتىدارىنى سىناق قىلدۇق. EcK1 ياكى EcK2 نى جىمجىتلاشتۇرۇش ئەرلەردە زور دەرىجىدە ئۆلۈمنى كەلتۈرۈپ چىقاردى (كېڭەيتىلگەن سانلىق مەلۇمات رەسىم 4a)، بۇ ئېكدىزون فوسفورلىنىشى ۋە شۇڭا ئاكتىپسىزلىنىشنىڭ ياشاش ئۈچۈن مۇھىم ئىكەنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. چۈنكى EcK2 EcK1 دىن يۇقىرى سەۋىيىدە ئىپادىلەنگەن ۋە پروتېئومىكلار تەرىپىدىن MAGs دا بايقالغان (رەسىم 2b، c ۋە قوشۇمچە جەدۋەل 2)، بىز ئۇنىڭ ئېكدىستېروئىد كىنازا پائالىيىتىنى 20E بىلەن ئىنكۇباتسىيە قىلىش ئارقىلىق جەزملەشتۈردۇق، بۇ 20E22P فوسفورلىنىشىنى كەلتۈرۈپ چىقاردى (كېڭەيتىلگەن سانلىق مەلۇمات رەسىم 2).4b). 3D20E نى سۇبسترات سۈپىتىدە ئىشلەتكەندە، بىز فوسفورلانغان مەھسۇلات 3D20E22P نى بايقىيالمىدۇق (كېڭەيتىلگەن سانلىق مەلۇمات رەسىم 4c)، بۇ 3D20E ئەمەس، بەلكى 20E نىڭ EcK2 نىڭ ئەڭ ياخشى نىشانى بولۇشى مۇمكىنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.
بىزنىڭ RNA-seq ئانالىزىمىزغا ئاساسلانغاندا، EcK2 قىزلارنىڭ LRT دا يۇقىرى ئىپادىلەنگەن بولۇپ، جۈپلەشكەندىن كېيىن ئۇ ئۆچۈرۈلگەن (2b-رەسىم). بىز بۇ سانلىق مەلۇماتلارنى جەزملەشتۈردۇق ۋە EcK2 نىڭ ئىپادىلىنىشىگە قان بىلەن ئوزۇقلىنىش تەسىر كۆرسەتمىگەنلىكىنى جەزملەشتۈردۇق (كېڭەيتىلگەن سانلىق مەلۇمات 5a-رەسىم). دەسلەپكى MS تەجرىبىلىرىمىزنى كېڭەيتىپ، بىز 20E22P نىڭ چوققىسىنىڭ 20E نىڭ چوققىسى بىلەن زىچ مۇناسىۋەتلىك ئىكەنلىكىنى جەزملەشتۈردۇق (قان بىلەن ئوزۇقلانغاندىن كېيىن 22-26 سائەت؛ كېڭەيتىلگەن سانلىق مەلۇمات 5b-رەسىم). قىزلارنىڭ EcK2 نى جىمجىتلاشتۇرۇشى قان بىلەن ئوزۇقلانغاندىن كېيىن 26 سائەت ئىچىدە 20E نىڭ 20E22P غا بولغان نىسبىتىنى 3 ھەسسە ئاشۇردى (كېڭەيتىلگەن سانلىق مەلۇمات 2c ۋە 5c-رەسىملەر)، بۇ EcK2 نىڭ ئاياللاردا 20E نى فوسفورلاشتۇرىدىغانلىقىنى جەزملەشتۈردى. ئالاھىدە تىلغا ئېلىشقا ئەرزىيدىغىنى شۇكى، EcK2 نىڭ كەمچىللىكىدىن قۇتۇلغان قىزلارنىڭ جىنسىي قوبۇل قىلىشچانلىقى تولۇق ساقلانغان (كېڭەيتىلگەن سانلىق مەلۇمات 5d، e-رەسىم)، بۇ يەنە ئاياللارنىڭ 20E ئىشلەپچىقىرىشىنىڭ جۈپلىشىشنى كەلتۈرۈپ چىقارمايدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. ئوكسىدلىنىشقا قارشى تۇرۇش مەزگىلى. قانداقلا بولمىسۇن، بۇ ئۇرغىچىلارنىڭ تۇخۇم تۇغۇش نىسبىتى كونترول گۇرۇپپىسىغا سېلىشتۇرغاندا كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە ئاشقان، قىزلارنىڭ %30 تىن كۆپرەكى تۇخۇم قويغان (كېڭەيتىلگەن سانلىق مەلۇمات رەسىم 5f). ئەگەر قان بىلەن ئوكۇل قىلىنغاندىن كېيىن قوش زەنجىرلىك Eck2 RNA (dsEcK2) ئوكۇل قىلىنسا، تۇخۇم تۇغۇش يۈز بەرمىگەن، بۇ ۋاقىتتا قان بىلەن ئوكۇل قىلىنىش سەۋەبىدىن 20E نىڭ چوققىسى تۆۋەنلىگەن. ئومۇمەن قىلىپ ئېيتقاندا، بۇ نەتىجىلەر قان سۈمۈرگەندىن كېيىن ھاسىل بولغان 20E نىڭ تۇخۇم تۇغۇشنى قوزغىتالايدىغانلىقىنى، ئەمما پەقەت تۇخۇم تۇغۇش توسۇلۇشى (EcK2 ۋە باشقا ئامىللار) جۈپلىشىش ئارقىلىق ئۆچۈرۈلگەندە ئاندىن پەيدا بولىدىغانلىقىنى قوللايدىغان مودېلنى قوللايدۇ. 20E ۋە 3D20E ئوكۇللىرىنىڭ ھېچقايسىسى قىزلاردا EcK2 نىڭ ئىپادىسىنى چەكلىمىگەن (كېڭەيتىلگەن سانلىق مەلۇمات رەسىم 5g)، بۇ باشقا ئامىللارنىڭ بۇ كىنازانىڭ چەكلىنىشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. قانداقلا بولمىسۇن، قان بىلەن ئوكۇل قىلىنغاندىن كېيىنكى 20E سەۋىيەسى جۈپلىشىشتە راھەتسىزلىك پەيدا قىلىشقا يېتەرلىك ئەمەس، بەلكى جىنسىي يول بىلەن يۇققان 3D20E نىڭ يۇقىرى تىترى سەۋەبىدىن ئۈنۈملۈك قوزغىتىلغان.
بىزنىڭ نەتىجىلىرىمىز A. gambiae نىڭ كۆپىيىش مۇۋەپپەقىيىتىنى تەڭشەش مېخانىزمى توغرىسىدا مۇھىم چۈشەنچىلەرنى بېرىدۇ. ئەرلەرنىڭ يۇقىرى تىترلىق 3D20E نى بىرىكتۈرۈش ئۈچۈن تەرەققىي قىلغان بىر مودېل بارلىققا كەلدى، بۇ مودېل ئەرلەرگە خاس ئۆزگەرتىلگەن ئېكدىزون بولۇپ، ئاياللارنى تېخىمۇ جۈپلىشىشكە سەزگۈرلۈكنى تۆۋەنلىتىش ئارقىلىق ئاتا-ئانا بولۇشنى كاپالەتلەندۈرىدۇ. شۇنىڭ بىلەن بىر ۋاقىتتا، بۇ بەزگەك ۋېكتورلىرى ئەرلەرگە خاس EPP نىڭ جىنسىي يۆتكىلىشىگە جاۋابەن ئاياللاردا 3D20E نى ئاكتىپلاشتۇرۇش ئۈچۈن ئۈنۈملۈك سىستېما تەرەققىي قىلدۇردى. بىزنىڭ بىلىشىمىزچە، بۇ ئەر ۋە ئاياللارغا خاس ستېروئىد ھورمۇن سىستېمىسىنىڭ ھاشاراتلاردا ئۆزگىچە ۋە مۇھىم رول ئوينايدىغانلىقىنىڭ تۇنجى مىسالى. ئەرلەرگە خاس ئېكدىزون فۇنكسىيەسى پەرەز قىلىنغان، ئەمما ئېنىق ئىسپاتلانمىغان. مەسىلەن، ئاساسەن رەت قىلىنغان بىر پەرەز 18، بۇ فۇنكسىيەلەرنى 20E ئالدىنقى ماددىسى E1 ئورۇندىشى مۇمكىن. Drosophila دا، موناندرىيەنىڭ كىچىك جىنسىي پېپتىدلارنىڭ جىنسىي يۆتكىلىشى ئارقىلىق قوزغىتىلىدىغانلىقى مەلۇم، 19،20 بۇ نېرۋا ھۈجەيرىلىرى ئاياللارنىڭ كۆپىيىش يولىنى مەخسۇس جىنسىي پېپتىد رېتسېپتورلىرى ئارقىلىق نېرۋا سىستېمىسى بىلەن ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسىتىدۇ 21،22. ئېنىقلاش ئۈچۈن تېخىمۇ كۆپ خىزمەت قىلىش كېرەك A. gambiae ئۇرغىچىلىرىدا 3D20E تەرىپىدىن كونترول قىلىنىدىغان تۆۋەنكى ئېقىن سىگنال كاسكادلىرى ۋە بۇ كاسكادلارنىڭ پاشىلار بىلەن Drosophila ئارىسىدا ساقلىنىشقا بولىدىغان-بولمايدىغانلىقىنى بېكىتىش.
بىزنىڭ تەتقىقاتىمىزدا بايقالغان 3D20E نىڭ ئاياللارنىڭ تۇغۇش ئىقتىدارى ۋە خۇلق-ئاتۋارىغا بولغان مۇھىم رولىنى نەزەرگە ئالغاندا، 3D20E نىڭ سىنتېزلىنىشى ۋە ئاكتىپلىشىشىغا ئېلىپ بارىدىغان يوللار كەلگۈسىدىكى پاشا كونترول قىلىش ئىستراتېگىيىسى ئۈچۈن يېڭى پۇرسەتلەرنى يارىتىپ بېرىدۇ، مەسىلەن، ستېرىل ھاشارات تېخنىكىسى ئىستراتېگىيىسىدە رىقابەت كۈچىگە ئىگە ستېرىل ئەرلەرنى ھاسىل قىلىش. ياۋايى ھايۋانلارنى قويۇپ بېرىش ياكى قىزلىق ئويۇنىدا 3D20E نى تەقلىد قىلىش ئۈچۈن ئىشلىتىلىدۇ. 3D20E نىڭ ئەرلەرگە خاس ئىقتىدارى A. gambiae ۋە باشقا Cellia تۈرلىرى ئۇرۇقىنى جۈپلىشىش ئېغىزىغا قۇيۇش ئىقتىدارىغا ئېرىشكەندە تەرەققىي قىلغان بولۇشى مۇمكىن، چۈنكى بۇ كۆپ مىقداردىكى گورمون ۋە گورمون ئاكتىپلاشتۇرغۇچى ئېنزىملارنىڭ ئۈنۈملۈك يۆتكىلىشىگە يول قويىدۇ. ئۆز نۆۋىتىدە، monandry نى يولغا قويغان 3D20E تەرەققىياتى ئاياللارغا (MISO نىڭ يۇقىرى ئىپادىلىنىشى ئارقىلىق) بەزگەك تارقىلىشى يۇقىرى رايونلاردا كۆپىيىش ئىقتىدارىنى قوللايدىغان مېخانىزم بىلەن تەمىنلەيدۇ، بۇ ۋاسىتىلىك ھالدا پلازمودىيۇمنىڭ تارقىلىشىغا تۆھپە قوشىدۇ. ئاياللار 20E نىڭ ئاياللار Anopheles پاشىلىرىدا P. falciparum نىڭ ياشىشى ۋە ئۆسۈشىگە چوڭقۇر تەسىر كۆرسىتىدىغانلىقى ئىسپاتلانغانلىقىنى نەزەرگە ئالغاندا، ئەرلەر ۋە ئاياللار ستېرىل ھورمۇنى يوللىرى ھازىر پاشا-پاراسەت ئۆزئارا تەسىرىنىڭ مۇھىم جەھەتلىرى بولۇپ قالدى.
A. gambiae G3 تۈرلىرى ئۆلچەملىك ھاشارات شارائىتىدا (26-28 سېلسىيە گرادۇس، نىسپىي نەملىك %65-80، يورۇقلۇق/قاراڭغۇ نۇر دەۋرى 12:12) بېقىلدى. لىچىنكىلارغا پاراشوك بېلىق يېمى (TetraMin تروپىك پارچىلىرى، كوي پېلېتلىرى ۋە تېترا كۆلچەك تاياقچىلىرى 7:7:2 نىسبىتىدە) بېرىلدى. چوڭ پاشىلارغا خالىغانچە %10 دېكستروزا ئېرىتمىسى ۋە ھەر ھەپتە ئىنسان قېنى بېرىلدى (قان تەركىبلىرىنى تەتقىق قىلىش). قىز پاشىلار ئۇچىنى مىكروسكوپ ئارقىلىق تەكشۈرگەندىن كېيىن، قورچاق باسقۇچىدا جىنىسلارنى ئايرىش ئارقىلىق ئېلىندى. DsRed ترانسگېنىنى ئېلىپ يۈرىدىغان ئەر پاشىلار ئىلگىرى تەسۋىرلەنگەن.
مەجبۇرىي جۈپلەشتۈرۈش تەجرىبىلىرى ئىلگىرى تەسۋىرلەنگەن قائىدىلەرگە ئاساسەن ئېلىپ بېرىلدى. تەبىئىي جۈپلەشتۈرۈش ئۈچۈن، 4 كۈنلۈك قىزلىق چىشى ...
پاشا توقۇلمىلىرى، قالغان جەسەتلەر (تەننىڭ قالغان قىسمى) ياكى پۈتۈن بەدەن %100 مېتانولغا پارچىلىنىپ، مونچاق (2 مىللىمېتىرلىق ئەينەك مارجان، 2400 ئايلىنىش سۈرئىتى، 90 سېكۇنت) بىلەن بىر خىللاشتۇرۇلدى. توقۇلمىلارنىڭ مىقدارى ۋە مېتانول مىقدارى تۆۋەندىكىدەك بولدى: بەدەننىڭ قالغان قىسمى، 1000 µl دا 50؛ MAG، 50–100 80 µl؛ ئايال LRT، 25–50 80 µl. چۆكمە ئوخشاش مىقداردىكى مېتانول بىلەن ئىككىنچى قېتىم مېتانول ئايرىۋېلىندى. ھۈجەيرە قالدۇقلىرى مەركەزدىن قاچۇرۇش ئارقىلىق ئايرىۋېلىندى. ئىككى خىل ئايرىۋېلىنغان مېتانول ئارىلاشتۇرۇلۇپ، ئازوت ئېقىمى ئاستىدا قۇرۇتۇلدى، ئاندىن تۆۋەندىكى مىقداردىكى %80 مېتانولدا سۇدا قايتا ئېرىتىلدى: بەدەننىڭ قالغان قىسمى، 50 µl؛ MAG ۋە ئايال LRT، 30 µl.
ئەۋرىشكىلەر ماسسا سپېكترومېتىرى (ID-X, Thermo Fisher) دا LC ئەسۋابى (Vanquish, Thermo Fisher) بىلەن ئۇلانغان ھالەتتە تەھلىل قىلىندى. 5 µl ئەۋرىشكە 25 سېلسىيە گرادۇستا ساقلانغان 3 µm، 100 × 4.6 mm چوڭلۇقتىكى ئىستونغا (Inspire C8, Dikma) قۇيۇلدى. LC نىڭ ھەرىكەتچان باسقۇچلىرى A (سۇ، %0.1 فورمىك كىسلاتا) ۋە B (ئاتسېتونىترىل، %0.1 فورمىك كىسلاتا) بولدى. LC گرادۇسى تۆۋەندىكىدەك بولدى: 1 مىنۇتتا %5 B، ئاندىن 11 مىنۇتتا %100 B غا كۆتۈرۈلدى. %100 لىك تېمپېراتۇرىدا 8 مىنۇتتىن كېيىن ئىستوننى %5 B دا 4 مىنۇت قايتا تەڭپۇڭلاشتۇرۇڭ. ئېقىم سۈرئىتى 0.3 ml min-1 بولدى. MS مەنبەسىدىكى ئىئونلىشىش مۇسبەت ۋە مەنپىي ھالەتتە قىزىتىلغان ئېلېكترو پۈركۈش ئىئونلىشىشى ئارقىلىق ئەمەلگە ئاشىدۇ.
ماسسا سپېكترومېتىرى m/z دائىرىسىدىكى سانلىق مەلۇماتلارنى تولۇق MS ھالىتىدە 60،000 ئېنىقلىقتا 350 دىن 680 گىچە ئۆلچەيدۇ. MS/MS سانلىق مەلۇماتلىرى [M + H]+ (بارلىق نىشانلار)، [M - H2O + H]+ (بارلىق نىشانلار) ۋە [M - H]- (فوسفورلانغان نىشانلار) ئۈستىدە ئېلىندى. MS/MS سانلىق مەلۇماتلىرى ئۆلچەم بولمىغان نىشانلارنىڭ ئېكدىزون خۇسۇسىيىتىنى جەزملەشتۈرۈش ئۈچۈن ئىشلىتىلدى. نىشانلانمىغان ئېكدىستېروئىدلارنى ئېنىقلاش ئۈچۈن، نىسپىي موللۇقى %15 تىن يۇقىرى بولغان بارلىق HPLC چوققىلىرىنىڭ MS/MS سانلىق مەلۇماتلىرى تەھلىل قىلىندى. بىر ئالاھىدە ئەۋرىشكىنىڭ (باشقا بارلىق نىشانلار) ئابسولۇت مىقدارى ياكى سۇيۇقلۇقىنى ھېسابلاش ئۈچۈن ساپ ئۆلچەملەردىن (20E, 3D20E) ياسالغان ئۆلچەملىك ئەگرى سىزىقلار ئارقىلىق مىقدارلاشتۇرۇڭ، ئۇلارنىڭ بىر ئەركەكتىكى مىقدارغا بولغان ئېكۋىۋالېنتلىقىنى ھېسابلاڭ. 3D20E ئۈچۈن، تۆۋەندىكى قوشۇلمىلارنىڭ يىغىندىسى ئارقىلىق مىقدارلاشتۇرۇش ئېلىپ بېرىلدى: [M + TFA]-, [M + COOH]-, [M + Na]+, [M + Cl]-, [M + NO3]-. سانلىق مەلۇماتلار Tracefinder (4.1 نەشرى) ئارقىلىق چىقىرىلىپ مىقدارلاشتۇرۇلدى. MS/MS سانلىق مەلۇماتلىرى Xcalibur (4.4 نەشرى) ئارقىلىق تەھلىل قىلىندى. E، 20E ۋە 3D20E نىڭ MS سپېكترى ئايرىم-ئايرىم ئۆلچەملەر بىلەن سېلىشتۇرۇلدى. 3D20E22P گىرارد رېئاگېنتى بىلەن ھاسىل قىلىش ئارقىلىق تەھلىل قىلىندى. 20E22P m/z نىسبىتى ئارقىلىق تەھلىل قىلىندى.
3D20E22P MAG دىن تازىلاندى. تازىلاش HPLC-MS/MS ئانالىزى بىلەن ئوخشاش LC شارائىتى ئاستىدا تۆت قۇتۇپلۇق ماسسا ئاساسلىق دېتېكتور (QDa, Acquity, Waters) بىلەن يۇقىرى ئۈنۈملۈك سۇيۇقلۇق خروماتوگرافى (Acquity, Waters) ئارقىلىق ئانالىز ئۆلچىمىدە ئېلىپ بېرىلدى. 3D20E22P غا ماس كېلىدىغان m/z ئىلگىرى بېكىتىلگەن ساقلاش ۋاقتىدا بايقالغاندا، كەسىر توپلاش قوزغىتىلدى. ئاندىن ئېلىنغان بىرىكمىلەرنىڭ ساپلىقى يۇقىرىدا دېيىلگەندەك HPLC-MS/MS ئارقىلىق تەكشۈرۈلدى.
ئومۇمىي RNA ئىشلەپچىقارغۇچىنىڭ كۆرسەتمىسىگە ئاساسەن TRI رېئاگېنتى (Thermo Fisher) ئارقىلىق 10-12 كۆپىيىش توقۇلمىسى ياكى بەدەننىڭ باشقا قىسىملىرىدىن (باشسىز) ئېلىندى. RNA TURBO DNase (Thermo Fisher) بىلەن بىر تەرەپ قىلىندى. cDNA ئىشلەپچىقارغۇچىنىڭ كۆرسەتمىسىگە ئاساسەن Moloney مۇرىن لېيكېمىيە ۋىرۇسىنىڭ تەتۈر ترانسكرىپتازاسى (M-MLV RT; Thermo Fisher) ئارقىلىق سىنتېز قىلىندى. تەتۈر ترانسكرىپتسىيە مىقدارى PCR (RT-qPCR; كېڭەيتىلگەن سانلىق مەلۇمات جەدۋىلى 2) ئۈچۈن دەسلەپكى ماتېرىياللار ئىلگىرى ئېلان قىلىنغان24 ياكى Primer-BLAST26 ئارقىلىق لايىھەلەنگەن بولۇپ، چوڭلۇقى 70-150 bp بولغان ۋە ئېكسون-ئېكسون تۇتاشتۇرۇش نۇقتىلىرىنى ئۆز ئىچىگە ئالغان مەھسۇلاتلارغا ياكى Primer جۈپ باشلىغۇچىلارغا ئايرىم ئېكسونلارغا ئەۋزەللىك بېرىلگەن. ئۈچتىن تۆتكىچە بىئولوگىيىلىك كۆپەيتىلگەن cDNA ئەۋرىشكىلىرى RT-qPCR ئۈچۈن سۇدا تۆت ھەسسە سۇيۇلدۇرۇلدى. مىقدارلاشتۇرۇش 1 × PowerUp SYBR يېشىل ماستېر ئارىلاشمىسى (Thermo Fisher)، باشلىغۇچىلار ۋە 5 µl سۇيۇلدۇرۇلغان cDNA نى ئۆز ئىچىگە ئالغان 15 µl تەكرارلىنىش رېئاكسىيەسىدە ئېلىپ بېرىلدى. رېئاكسىيەلەر بىر ... QuantStudio 6 Pro ھەقىقىي ۋاقىتلىق PCR سىستېمىسى (Thermo Fisher) ۋە سانلىق مەلۇماتلىرى Design and Analysis (2.4.3 نەشرى) ئارقىلىق توپلىنىپ تەھلىل قىلىندى. بۇ تەتقىقاتتا كۆرسىتىلگەندەك، نىسبىي مىقدارلار RpL19 (AGAP004422) رىبوسوم گېنىغا نورماللاشتۇرۇلدى، ئۇنىڭ ئىپادىلىنىشى قان بىلەن تەمىنلەش 27 ياكى جۈپلىشىش 3 بىلەن كۆرۈنەرلىك ئۆزگەرمىدى.
RNA سۈپىتى Agilent Bioanalyzer 2100 Bioanalyzer (Agilent) ئارقىلىق تەكشۈرۈلدى. Illumina جۈپلەشكەن ئۇچلۇق كۈتۈپخانىلار MIT ۋە Harvard نىڭ Broad ئىنستىتۇتىدا تەييارلىنىپ ئىجرا قىلىندى. تەرتىپلىك ئوقۇشلار HISAT2 (2.0.5 نەشرى) ئارقىلىق ئۆزلۈكىدىن پارامېتىرلار بىلەن A. gambiae گېنومىغا (PEST تۈرى، 4.12 نەشرى) ماسلاشتۇرۇلدى. خەرىتە سۈپىتى (MAPQ) نومۇرى <30 بولغان ئوقۇشلار Samtools (1.3.1 نەشرى) ئارقىلىق چىقىرىۋېتىلدى. گېنلارغا خەرىتە قىلىنغان ئوقۇش سانى ئۆزلۈكىدىن پارامېتىرلار بىلەن htseq-count (0.9.1 نەشرى) ئارقىلىق سانالدى. نورماللاشتۇرۇلغان ئوقۇش سانى ھېسابلىنىپ، R (4.0.3 نەشرى) دىكى DESeq2 بولىقى (1.28.1 نەشرى) ئارقىلىق پەرقلىق گېن ئىپادىسى تەھلىل قىلىندى.
ئېكدىسوننى ئۆزگەرتىدىغان گېن كاندىداتلىرى ئالدى بىلەن PSI-BLAST ئالگورىزىمى (https://ftp.ncbi.nlm.nih.gov/blast/executables/blast+/2.8.1/) ئارقىلىق A. gambiae گېنومىنى ئىزدەش ئارقىلىق ئېنىقلاندى. بۇ ئارقىلىق تۆۋەندىكى سوئال ئاقسىلى تىزىملىكىگە ئىگە پارامېتىرلار ئىشلىتىلدى: Bombyx mori (قوشۇمچە نومۇرى NP_001038956.1)، Musca domestica (قوشۇمچە نومۇرى XP_005182020.1، XP_005175332.1 ۋە XP_011294434.1) ۋە Microplitis demolitor (قوشۇمچە نومۇرى XP_008552646.1 ۋە XP_008552645.1) دىن EcK B. mori (قوشۇمچە نومۇرى NP_001036900)، Drosophila melanogaster (قوشۇمچە نومۇرى NP_651202) دىن، Apis mellifera (قوللىنىش نومۇرى XP_394838) ۋە Acyrthosiphon pisum (قوللىنىش نومۇرى XP_001947166); ۋە B. mori دىن ئېلىنغان EPP (قوللىنىش نومۇرى XP_001947166) NP_001177919.1 ۋە NP_001243996.1) ۋە D. melanogaster نىڭ EO (قوللىنىش نومۇرى NP_572986.1) (1-قەدەم). ئاندىن، گامبىيەدىكى كۆپىيىش توقۇلمىسىدىكى (ئايال LRT ياكى MAG) يۇقىرى mRNA ئىپادىسىگە (ھەر مىليون خەرىتىلەنگەن ئوقۇشقا >100 پارچى/كىلوبازا ئېكسون) ياكى >85%) ئاساسەن سۈزۈلىدۇ (2-قەدەم). ئۆزگىچەلىكنى ياخشىلاش ئۈچۈن، بىز A. albimanus نىڭ كۆپىيىش توقۇلمىسىدىمۇ ئىپادىلىنىدىغان كاندىدات ئېنزىملارنى تاللىدۇق، بۇ ئانوفېلېس تۈرىدىكى A. albimanus نىڭ كۆپىيىش توقۇلمىسىدا ئىپادىلىنىدۇ، بۇ تۈردىكى گېنلار جۈپلىشىش جەريانىدا ئېكدىزوننى بىرىكتۈرمەيدۇ ياكى يۆتكىمەيدۇ. كاندىدات گېنلار A. albimanus كۆپىيىش توقۇلمىسىدىكى تۆۋەن ئىپادىلىنىش (<100 FPKM ياكى <85-پېرسەنتىل) ئاساسىدا سۈزۈلدى (3-قەدەم). ئاخىرقى سۈزگۈچ سۈپىتىدە (4-قەدەم)، كاندىدات گېنلار تۆۋەندىكىلەرنىڭ كەم دېگەندە بىرىنى قاندۇرۇشى كېرەك: (1) پەرقلىق ئىپادىلەنگەن گېنلارنى تەھلىل قىلىشقا ئاساسەن، جۈپلەشكەندىن كېيىن كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە يۇقىرىلىشى (P < 0.05) ۋە (2) كۆپىيىش ئىقتىدارىغا ئىگە بولمىغان توقۇلمىلاردا (< 85 % ياكى <100 FPKM).
بىز پۈتۈن ئورگانىزمنىڭ ئىزوتوپ بەلگىسىنى ئېلىش ئۈچۈن ئىلگىرى تەسۋىرلەنگەن 28، 29، 30-ئۇسۇللارنى ئۆزگەرتتۇق. قىسقىسى، ياۋا تىپتىكى Saccharomyces cerevisiae type II (YSC2, Sigma) ئازوتنىڭ بىردىنبىر مەنبەسى سۈپىتىدە (wt/vol) %2 گلۇكوزا (G7528, Sigma)، %1.7 ئامىنو كىسلاتاسىز ۋە ئاممونىي سۇلفات (مەدەنىيەت مۇھىتى) ۋە %5 15N ئاممونىي سۇلفات (NLM-713، >99%، كامبرىج ئىزوتوپ تەجرىبىخانىسى) بولغان خېمىر ئازوت ئاساسى (BD Difco, DF0335) دا سىناق قىلىندى. خېمىر مەركەزدىن قاچۇرۇش ئارقىلىق قايتۇرۇۋېلىندى ۋە پاشا قۇرتلىرى قورچاق بولغۇچە خالىغانچە بېرىلدى. تۆتىنچى ياشلىق قۇرتلارنىڭ ئۆلۈشىنىڭ ئالدىنى ئېلىش ئۈچۈن بېلىق ئۇنى (ھەر 300 قۇرتقا 0.5 مىللىگرام) بىلەن تولۇقلاندى. ئاندىن پەقەت ئۇرغىچىلارلا بەلگە قويۇلمىغان ئەركەكلەر بىلەن جۈپلىشىش تەجرىبىسىدە ئىشلىتىلىپ، جۈپلىشىش جەريانىدا يۆتكەلگەن ئەركەك ئاقسىلنى تەھلىل قىلىندى.
4-6 كۈنلۈك 15N بەلگىسى قويۇلغان قىزلىق چىشىلار يېشى ماس كېلىدىغان، بەلگىسى يوق قىزلىق چىشىلار بىلەن جۈپلىشىشكە مەجبۇرلاندى. مۇۋەپپەقىيەتلىك جۈپلىشىش ئېپىفلۇئورېسسېنسىيە مىكروسكوپى ئاستىدا جۈپلىشىش تىقىمىنى بايقاش ئارقىلىق دەلىللەندى. 3، 12 ۋە 24 ئات كۈچىدە، 45-55 جۈپلەشكەن چىشىلارنىڭ ئۈجمىسى 50 µl ئاممونىي بىكاربونات بۇفېرىغا (pH 7.8) پارچىلىنىپ، بىر خىل پۇستى بىلەن بىر خىللاشتۇرۇلدى. بىر خىل پۇستى مەركەزدىن قاچۇرۇلۇپ، ئۈستۈنكى سۇيۇقلۇق 50 mM ئاممونىي بىكاربوناتتىكى 50 µl 0.1% RapiGest (186001860, Waters) بىلەن ئارىلاشتۇرۇلدى. ھەر بىر ئەۋرىشكەدىكى ئۈستۈنكى سۇيۇقلۇق ۋە دانچە قۇرۇق مۇزدا توڭلىتىلىپ، كېچىدە ۋاشىنگتون ئۇنىۋېرسىتېتىنىڭ ماككوس تەجرىبىخانىسىغا ئەۋەتىلدى، بۇ يەردە LC-MS/MS ئۈچۈن ئەۋرىشكە تەييارلاش تاماملاندى. دانچەنى 50 mM ئاممونىيدىكى 50 mL 0.1% RapiGest ئېرىتمىسىگە قايتا ئېرىتىڭ. سۇ مۇنچىسىدا بىكاربونات ۋە سونىكات. دانچە ۋە ئۈستۈنكى قەۋەتنىڭ ئاقسىل قويۇقلۇقى BCA سىنىقى ئارقىلىق ئۆلچەندى، ئەۋرىشكىلەر 5 mM دىتىئوترېئىتول (DTT; Sigma) بىلەن ئازايتىلدى، 15 mM يودوئاتسېتامىد (Sigma) بىلەن ئالكىللاندى ۋە 37 سېلسىيە گرادۇستا (1:0 50) 1 سائەت تىرىپسىنلاشتۇرۇش: تىرىپسىن: سۇبسترات نىسبىتى بىلەن ئىنۇباتسىيە قىلىندى. RapiGest 200 mM HCl قوشۇش ئارقىلىق ئېرىتىلدى، ئاندىن 37 سېلسىيە گرادۇستا 45 مىنۇت ئىنۇباتسىيە قىلىندى ۋە 4 سېلسىيە گرادۇستا 10 مىنۇت 14000 ئايلىنىش سۈرئىتىدە مەركەزدىن قاچۇرۇلدى. ئەۋرىشكىلەر قوش ھالەتلىك قاتتىق باسقۇچلۇق ئېكىستراكسىيە (Oasis MCX كارتىجلىرى، Waters) ئارقىلىق يۇيۇلدى ۋە 0.1% لىك فورمىك كىسلاتادا قايتا ئېرىتىلىپ، ئاخىرقى ئاقسىل قويۇقلۇقى 0.33 µg µl-1 بولدى. بەلگىسىز MAG ئاقسىللىرىمۇ ئوخشاش ھالدا قىزلىق تەجرىبە قىلىندى. ئەرلەر. ھەر بىر ئەۋرىشكە ئىككى ئانالىز تەكرارلىقى تەھلىل قىلىندى. ئاندىن، ھەر بىر ئەۋرىشكە 1 µg 25cm ئېرىتىلگەن كرېمنىي 75μm تۈۋرۈكى، Jupiter C12 تەتۈر باسقۇچلۇق رېشىن (Phenomenex) بىلەن تولدۇرۇلغان 4cm ئېرىتىلگەن كرېمنىي Kasil1 (PQ) فرىت تۇزاق ۋە 180 مىنۇتلۇق سۇيۇقلۇق خروماتوگرافىيەسى ئارقىلىق تەھلىل قىلىندى. ئۈلگە خاتىرىلىرى – MS/MS nanoACQUITY UPLC سىستېمىسى (Waters) بىلەن Q-Exactive HF ماسسا سپېكترومېتىرىدا (Thermo Fisher) ئىجرا قىلىندى. ھەر بىر قېتىملىق ئىجرا ئۈچۈن ھاسىل قىلىنغان سانلىق مەلۇماتقا مۇناسىۋەتلىك توپلاش سانلىق مەلۇماتلىرى Proteowizard (3.0.20287 نەشرى) ۋە Comet31 (3.2 نەشرى) ئارقىلىق Anopheles gambiae (VectorBase نەشرى 54)، Anopheles coluzzi دىن ئېلىنغان ئاقسىل تىزىملىكىنى ئۆز ئىچىگە ئالغان FASTA سانلىق مەلۇمات ئامبىرىغا قارشى mzML فورماتىغا ئايلاندۇرۇلدى. Mali-NIH (VectorBase نەشرى 54)، Saccharomyces cerevisiae (Uniprot، 2021-يىلى 3-ئاي)، A. gambiae RNA-seq ۋە مەلۇم ئىنسان بۇلغىنىشلىرىنىڭ ئۈچ رامكىلىق تەرجىمىسى ئۈستىدە ئىزدەش ئېلىپ بېرىلدى. پېپتىد خەرىتىسى بىلەن ماسلاشتۇرۇلغان FDRs Percolator32 (3.05 نەشرى) ئارقىلىق 0.01 چەك بىلەن بېكىتىلدى، پېپتىدلار Limelight33 دىكى ئاقسىلنى ئايرىش ئۇسۇلى ئارقىلىق ئاقسىلنى ئېنىقلاشقا يىغىلدى. (2.2.0 نەشرى). نىسپىي ئاقسىل موللۇقى ئىلگىرى تەسۋىرلەنگەندەك، ھەر بىر قېتىملىق يۈگۈرۈشتىكى ھەر بىر ئاقسىل ئۈچۈن ھېسابلىنىدىغان نورماللاشتۇرۇلغان سپېكتىر موللۇق ئامىلى (NSAF) ئارقىلىق مۆلچەرلەندى. ھەر بىر ئاقسىلغا نىسبەتەن NSAF ئىككى خىل بىئولوگىيىلىك تەكرارلىنىش ئەۋرىشكىسى بويىچە ئوتتۇرىچە ھېسابلاندى. 15N بەلگىسى ئايال ئاقسىلنى مۇۋەپپەقىيەتلىك يوشۇردى، گەرچە بەلگە قويۇلغان قىزلاردىن ئاز مىقداردا بەلگە قويۇلمىغان ئاقسىل بايقالسىمۇ. بىز ئايال خام ئەۋرىشكىلەردە ئەر ئاقسىلنىڭ ئازىيىشىنى (1-5 سپېكتىر) پەقەت تېخنىكىلىق يۈگۈرۈشلەردە خاتىرىلىدۇق، بۇ يەردە خام ئەۋرىشكىلەر ئەر/جۈپلىشىش ئەۋرىشكىلىرىدىن كېيىن HPLC «يۆتكىلىش» نەتىجىسىدە تەكشۈرۈلدى. بەلگە قويۇلغان قىزلاردىن «بۇلغىما» دەپ بايقالغان ۋاقىتلىق ئاقسىللار 1-قوشۇمچە جەدۋەلدە كۆرسىتىلدى.
Genscript دىكى ئىككى خىل ئانتىگېن پېپتىد، QTTDRVAPAPDQQQ (PA ئىزوتىپى ئىچىدە) ۋە MESDGTTPSGDSEQ (PA ۋە PB ئىزوتىپى ئىچىدە). بۇ ئىككى پېپتىد بىرلەشتۈرۈلۈپ، ئاندىن KLH توشۇغۇچى ئاقسىلىغا قوشۇلۇپ، يېڭى زېلاندىيە قويانلىرىغا ئوكۇل قىلىندى. تۆتىنچى قېتىم ئوكۇل قىلىنغاندىن كېيىن قويانلار قۇربانلىق قىلىندى، ھەمدە ئومۇمىي IgG يېقىنلىق تازىلاش ئارقىلىق ئايرىۋېلىندى. ئەڭ كۆپ EPP غا خاس قوياننىڭ IgG سى غەربچە بلوتلاش ئۈچۈن ئىشلىتىلدى.
غەربچە بلوتلار ئۈچۈن، MAG (n = 10، بۇ يەردە n بىئولوگىيىلىك جەھەتتىن مۇستەقىل پاشا ئەۋرىشكىسىنىڭ سانىنى كۆرسىتىدۇ) ۋە 4 كۈنلۈك قىزلىق ئەر ۋە قىزلىق ياكى مەجبۇرىي جۈپلەشكەن ئاياللاردىن (<10 جۈپلەشكەندىن كېيىن) ئېلىنغان چىشى LRT (n = 30)، ئاقسىل ئېلىش بۇفېرى (50 mM Tris، pH قىممىتى 8.0؛ 1% NP-40؛ 0.25% ناترىي دېئوكسىخولات؛ 150 mM NaCl؛ 1 mM EDTA؛ 1 × پروتېئازا چەكلىگۈچىسى كوكتېل (Roche)) ئايرىم قوشۇلدى. ئەۋرىشكىلەر پارچىلانغاندىن كېيىن دەرھال مونچاق (2 مىللىمېتىرلىق ئەينەك مارجان، 2400 ئايلىنىش/مىنۇت، 90 سېكۇنت) بىلەن بىر خىل ھالەتكە كەلتۈرۈلدى. ئېرىمەيدىغان قالدۇقلار 20000 گرامدا 4 سېلسىيە گرادۇستا مەركەزدىن قاچۇرۇش ئارقىلىق چىقىرىۋېتىلدى. ئاقسىللار Bradford سىنىقى (Bio-Rad) ئارقىلىق مىقدارلاشتۇرۇلدى. ئاندىن، 20 µg MAG ئاقسىلى، 40 µg LRT ئاقسىلى ۋە 20 µg قالغان كۆپ مىقداردىكى ئاقسىل MOPS بۇففېر ئارقىلىق %10 Bis-Tris NuPAGE بىلەن دېناتۇراتسىيە قىلىنىپ، ئايرىلدى. ئاقسىللار iBlot2 يۆتكەش سىستېمىسى (Thermo Fisher) ئارقىلىق پولىۋىنىلىدىن فلۇئورد پەردىسىگە يۆتكەلدى. پەردىلەر 1× PBS-T (PBS دا %0.1 Tween-20) دا ئىككى قېتىم يۇيۇلدى، ئاندىن Odyssey توسۇش بۇففېر (Li-Cor) دا 22 سېلسىيە گرادۇستا 1 سائەت توسۇلدى. پەردىلەر 4 سېلسىيە گرادۇستا بىر كېچە خاسلاشتۇرۇلغان قويان EPP غا قارشى پولىكلونال دەسلەپكى ئانتىتېلا (توسۇقلاش بۇففېردا 1:700) ۋە چاشقانغا قارشى ئاكتىن مونوكلونال دەسلەپكى ئانتىتېلا MAC237 (Abeam; 1:4000) بىلەن چايقالدى. پەردىلەر PBS-T بىلەن يۇيۇلدى، ئاندىن %0.01 SDS ۋە نى ئۆز ئىچىگە ئالغان توسۇش بۇففېردا ئىككىنچى دەرىجىلىك ئانتىتېلا (ئېشەككە قارشى قويان 800CW ۋە ئۆچكىگە قارشى چاشقان 680LT (Li-Cor)، ھەر ئىككىسى 1:20000) بىلەن ئىنكۇباتسىيە قىلىندى. %0.2 Tween -20 نى 22 سېلسىيە گرادۇستا 1 سائەت تۇرغۇزدۇق. پەردىلەر PBS-T بىلەن يۇيۇلۇپ، Odyssey CLx سىكانىرلاش ئۈسكۈنىسى بىلەن سۈرەتكە ئېلىندى. سۈرەتلەر Image Studio دا توپلىنىپ بىر تەرەپ قىلىندى (5.2 نەشرى). EPP-RA ئىزوفورمىسىغا (82 kDa) ماس كېلىدىغان مەلۇم بىر بەلباغ بايقالمىدى.
EPP نىڭ كودلاش رايونلىرى (گىستىدىن فوسفاتازا دومېنىنى ئۆز ئىچىگە ئالغان AGAP002463-RB ئىزوفورمىسى، NCBI ساقلانغان دومېن ئىزدەش 34) ۋە EcK2 (AGAP002181) pET-21a(+) پلازمىدىغا (Novagen Millipore Sigma) كىلونلاندى؛ پرايمېرلار كېڭەيتىلگەن سانلىق مەلۇمات جەدۋىلى 2 دە كۆرسىتىلگەن. pET-21a(+)-EcK2 قۇرۇلمىسىنىڭ C-تېرمىنالى 6xHis بەلگىسىدىن بۇرۇن سەككىز GS4 باغلىغۇچىسى (بىرگە قوشۇلۇپ) كىرگۈزۈلگەن. رېكومبىنات ئاقسىللار NEBExpress ھۈجەيرەسىز E. coli ئاقسىل بىرىكتۈرۈش رېئاكسىيەسى (يېڭى ئېنگلاند بىئولوگىيىلىك تەجرىبىخانىسى) ئارقىلىق ئىشلەپچىقىرىلغان. رېكومبىنات ئاقسىللار NEBExpress Ni ئايلانما ئىستونلىرى (يېڭى ئېنگلاند بىئولوگىيىلىك تەجرىبىخانىسى) ئارقىلىق تازىلانغان. دىھىدروفولات رېدۇكتازا (DHFR) كونترول ئاقسىلى NEBExpress ھۈجەيرەسىز E. coli ئاقسىل بىرىكتۈرۈش قورالىدىكى DNA قېلىپى ئارقىلىق ئىشلەپچىقىرىلغان. ئاقسىللار PBS دا -20 سېلسىيە گرادۇستا 3 ئايغىچە %50 گلىتسېرىن ئىچىدە ساقلانغان.
EPP ۋە توقۇلما ئېكىستراكتلىرىنىڭ فوسفاتازا پائالىيىتى 4-نىتروفېنىل فوسفات (pNPP; Sigma-Aldrich) ئارقىلىق ئۆلچەندى. رېئاكسىيە بۇففېرىدا 25 mM Tris، 50 mM ئاتسېتاتىك كىسلاتا، 25 mM Bis-Tris، 150 mM NaCl، 0.1 mM EDTA ۋە 1 mM DTT بار ئىدى. توقۇلما رېئاكسىيە بۇففېرىدا گوموگېنلاشتۇرۇلدى ۋە ھۈجەيرە قالدۇقلىرى مەركەزدىن قاچۇرۇش ئارقىلىق چىقىرىۋېتىلدى. 2.5 mg ml-1 pNPP بار رېئاكسىيە بۇففېرىغا ئېنزىم ياكى توقۇلما ئېكىستراكتى قوشۇش ئارقىلىق رېئاكسىيەنى باشلاڭ. رېئاكسىيە ئارىلاشمىسى ئۆي تېمپېراتۇرىسىدا قاراڭغۇدا ئىنكۇباتسىيە قىلىندى، ھەمدە pNPP دىن ئۆزگەرتىلگەن pNP مىقدارى ھەر خىل ۋاقىتلاردا 405 nm دا سۈمۈرۈلۈشىنى ئۆلچەش ئارقىلىق مىقدارلاشتۇرۇلدى.
سىناق نەيچىسىدىكى EcK پائالىيىتى ئۈچۈن، ئاقسىل 200 µl بۇفېر (pH 7.5) دا 0.2 mg 20E ياكى 3D20E بىلەن 10 mM HEPES–NaOH، %0.1 BSA، 2 mM ATP ۋە 10 mM MgCl2 تەركىبىدە 27 سېلسىيە گرادۇستا 2 سائەت ئىنكۇباتسىيە قىلىندى. رېئاكسىيە 800 µl مېتانول قوشۇش ئارقىلىق توختىتىلدى، ئاندىن -20 سېلسىيە گرادۇستا 1 سائەت سوۋۇتۇلدى، ئاندىن 20000 g دا 4 سېلسىيە گرادۇستا 10 مىنۇت مەركەزدىن قاچۇرۇلدى. ئاندىن ئۈستۈنكى سۇيۇقلۇق HPLC-MS/MS ئارقىلىق ئانالىز قىلىندى. كونترول گۇرۇپپىسىدا ئىشلىتىلگەن ئاقسىللارنى قىزىتىش ئارقىلىق ئاكتىپسىزلاندۇرۇش ئۈچۈن، ئاقسىللار PBS دا %50 گلىتسېرىن ئىچىدە 95 سېلسىيە گرادۇستا 20 مىنۇت ئىنكۇباتسىيە قىلىندى.
سىناق نەيچىسىدىكى EPP پائالىيىتى ئۈچۈن، ئاقسىل 25 mM Tris، 50 mM ئاتسېتاتىك كىسلاتا، 25 mM Bis-Tris، 150 mM NaCl، 0.1 mM EDTA ۋە 1 mM DTT تەركىبىدىكى 100 µl بۇفېر (pH 7.5) غا 3D20E22P (HPLC-MS/MS ئارقىلىق تازىلانغان 18 جۈپ MAG دىكى مىقدارغا تەڭ) بىلەن 27 سېلسىيە گرادۇستا 3 سائەت ئىنكۇباتسىيە قىلىندى. رېئاكسىيە 400 µl مېتانول قوشۇش ئارقىلىق توختىتىلىپ، -20 سېلسىيە گرادۇستا 1 سائەت سوۋۇتۇلدى، ئاندىن 20،000 g دا 4 سېلسىيە گرادۇستا 10 مىنۇت مەركەزدىن قاچۇرۇلدى. ئۈستۈنكى سۇيۇقلۇق HPLC-MS/MS ئارقىلىق ئانالىز قىلىندى.
EPP (362 bp)، EcK1 (AGAP004574, 365 bp) ۋە EcK2 (556 bp) نىڭ PCR پارچىلىرى ئارىلاش جىنىسلىق باشسىز پاشا ئۆلۈكلىرىدىن تەييارلانغان cDNA دىن كۈچەيتىلدى. eGFP كونترول گۇرۇپپىسىنىڭ PCR پارچىسى (495 bp) ئىلگىرى تەسۋىرلەنگەن pCR2.1-eGFP دىن كۈچەيتىلدى؛ PCR باشلانغۇچلىرى كېڭەيتىلگەن سانلىق مەلۇمات جەدۋىلى 2 دا كۆرسىتىلگەن. PCR پارچىسى pL4440 پلازمىدىدىكى تەتۈر T7 ئىلگىرى سۈرگۈچىلىرىنىڭ ئارىسىغا كىرگۈزۈلگەن. پلازمىد قۇرۇلمىلىرى NEB 5-α ئىقتىدارلىق E. coli (يېڭى ئېنگلاند بىئولوگىيىلىك تەجرىبىخانىسى) دىن ئېلىنغان ۋە ئىشلىتىشتىن بۇرۇن DNA تەرتىپى ئارقىلىق دەلىللەنگەن (كىرىش تەرتىپى ئۈچۈن قوشۇمچە سانلىق مەلۇمات 1 گە قاراڭ). T7 ئىلگىرى سۈرگۈچىسىگە ماسلاشتۇرۇلغان باشلانغۇچلار (كېڭەيتىلگەن سانلىق مەلۇمات جەدۋىلى 2) pL4440 ئاساسلىق پلازمىدتىن كىرگۈزۈلگەن قىستۇرمىنى كۈچەيتىش ئۈچۈن ئىشلىتىلگەن. PCR مەھسۇلات چوڭلۇقى ئاگاروز گېلى ئېلېكتروفورېزى ئارقىلىق دەلىللەنگەن. dsRNA Megascript T7 كۆچۈرۈش قورالى (Thermo Fisher) ئارقىلىق PCR قېلىپلىرىدىن كۆچۈرۈلدى ۋە ئىشلەپچىقارغۇچىنىڭ كۆرسەتمىسىگە ئاساسەن ئىلگىرى تەسۋىرلەنگەن ئۆزگەرتىشلەر بىلەن تازىلانغان.
dsRNA ئوكۇلى ئۈچۈن، ئېكلياتسىيەدىن كېيىنكى 1 كۈن ئىچىدە چوڭ ئەر ياكى ئايالنىڭ (Nanoject III، Drummond) كۆكرەك قىسمىغا 10 ng nl-1 قويۇقلۇقىدا 1380 ng dsRNA (dsGFP، dsEcK1، dsEcK2، dsEPP) ئوكۇل قىلىندى. گېننىڭ چۈشۈپ كېتىش سەۋىيىسى RNA ئېلىش، cDNA بىرىكتۈرۈش ۋە RT-qPCR ئارقىلىق كەم دېگەندە ئۈچ بىئولوگىيىلىك تەكرارلىنىشتا بېكىتىلدى. ecdyson ئوكۇلى ئۈچۈن، 4 كۈنلۈك قىز ياكى 6 كۈنلۈك قىز قان بىلەن بېقىلغان ئاياللارغا تەجرىبە لايىھىسىگە ئاساسەن ئايرىم-ئايرىم ھالدا 1.3، 2.1 قويۇقلۇقىدا 0.13، 0.21 ياكى 0.63 µg 20E ياكى 3D20E (Nanoject III، Drummond) ئوكۇل قىلىندى ياكى 6.3 ng nl-1. %10 دىن 100 nl ئوكۇل قىلىندى (vol/vol) سۇدىكى ئېتانول؛ %10 ئېتانولدىكى 100 nl 3D20E22P (بىر جۈپ MAG دىكى مىقدارنىڭ %75 ىگە تەڭ). پاشا ئوكۇل قىلىش گۇرۇپپىسىغا تاسادىپىي تەقسىم قىلىندى.
تۇخۇم چىقىرىش سىنىقى ئۈچۈن، 3 كۈنلۈك چىشى پاشىلار خالىغانچە ئىنسان قېنى بىلەن بېقىلدى. قىسمەن بېقىلغان ياكى بېقىلمىغان پاشىلارنى چىقىرىۋەتتى. داۋالاش ئۇسۇلىغا ئاساسەن، چىشى پاشىلار قان يېگەندىن كېيىن كەم دېگەندە 48 سائەت ئىچىدە ئايرىم تۇخۇم چىقىرىش قاچىسىغا تۆت كېچە قويۇلدى. تۇخۇملار ستېرېئوسكوپ (Stemi 508, Zeiss) ئاستىدا سانالدى؛ جۈپلەشكەن چىشى پاشىلارنىڭ تۇخۇمدىن چىققان تۇخۇملىرى تۇغۇشچان دەپ قارالدى.
جۈپلىشىش سىنىقى ئۈچۈن، ئاياللارغا داۋالاش ئۇسۇلىغا ئاساسەن كەم دېگەندە 2 كۈن ۋاقىت بېرىلدى، يېشى ماس كېلىدىغان ياۋا تىپتىكى ئەر ھايۋانلار كېيىن ئوخشاش قەپەسكە كىرگۈزۈلدى. ئىككى كېچىدىن كېيىن، ئۇرۇقلانغان ئاياللار توڭلىتىلغان ۋېزىكچە پارچىلىنىپ، گېنوم DNAسى 10 mM Tris-HCl، 1 mM EDTA ۋە 25 mM NaCl (pH 8.2) بار بولغان بۇفېردا توڭلىتىش-ئېرىتىش ۋە ئۇلترا ئاۋاز دولقۇنى ئارقىلىق قويۇپ بېرىلدى. ئەۋرىشكىلەر پروتېئىناز K (0.86 µg µl-1) بىلەن 55 سېلسىيە گرادۇستا 15 مىنۇت، ئاندىن 95 سېلسىيە گرادۇستا 10 مىنۇت ئىنكۇباتسىيە قىلىندى. خام گېنوم DNA تەييارلاشلىرى 10 ھەسسە سۇيۇلدۇرۇلۇپ، Y خروموسوما تەرتىپىنىڭ qPCR ئارقىلىق بايقالىشىغا ئۇچرىدى؛ باشلانغۇچ ماددىلار كېڭەيتىلگەن سانلىق مەلۇمات جەدۋىلى 2 دا كۆرسىتىلدى. Y خروموسوما تەرتىپىنىڭ يوقلۇقى جۈپلىشىشنىڭ يوقلۇقىنى كۆرسىتىدۇ.
قايتا جۈپلىشىش سىنىقى ئۈچۈن، مەجبۇرىي جۈپلەشكەن ئاياللار جۈپلىشىش ھالىتىنى جەزملەشتۈرۈش ئۈچۈن جۈپلىشىش ئېغىزىنىڭ بار-يوقلۇقى تەكشۈرۈلدى ۋە ئىلگىرى تەسۋىرلەنگەندەك 36 ئەرلەر يوق ئەھۋالدا جۈپلىشىشكە چىداملىق بولۇش ئۈچۈن 2 كۈن ۋاقىت بېرىلدى. DsRed ترانسگېنلىق سپېرما ئېلىپ يۈرگەن ئەرلەر ئاندىن ئاياللار قەپەسلىرىگە كىرگۈزۈلدى. ئىككى كېچىدىن كېيىن، ئاياللاردىن ئۇرۇقلاندۇرۇش خالتىلىرى ئايرىۋېتىلدى، ھەمدە يۇقىرىدا تەسۋىرلەنگەندەك گېنوم DNAسى تەييارلاندى ۋە DsRed ترانسگېنىنىڭ qPCR تەكشۈرۈشىگە ئۇچرىدى؛ باشلانغۇچ ماددىلار كېڭەيتىلگەن سانلىق مەلۇمات جەدۋىلى 2 دا كۆرسىتىلدى. DsRed ترانسگېنىنىڭ يوقلۇقى قايتا جۈپلىشىش يۈز بەرمىگەنلىكىنى كۆرسەتتى.
3D20E ئىلگىرىكى تەسۋىرلەنگەندەك بىرىكتۈرۈلدى 37. قىسقىسى، 10 مىللىگرام 20E (Sigma-Aldrich) 10 مىللىلىتىر سۇدا ئېرىتىلدى، ئارقىدىن 30 مىللىگرام پىلاتىنا قارا رەڭ (پارچا شەكلىدە، Sigma-Aldrich) قوشۇلدى. ئو2 نىڭ يېنىك ئېقىمى ئۈزلۈكسىز رېئاكسىيە ئارىلاشمىسىغا قۇيۇلدى، بۇ ئارىلاشما ئۆي تېمپېراتۇرىسىدا ئارىلاشتۇرۇلدى. 6 سائەتتىن كېيىن، رېئاكسىيەنى توختىتىش ئۈچۈن 30 مىللىلىتىر مېتانول قوشۇلدى. ئارىلاشما كاتالىزاتور زەررىچىلىرىنى چىقىرىۋېتىش ئۈچۈن مەركەزدىن قاچۇرۇلدى. ئۈستۈنكى سۇيۇقلۇق ئۆي تېمپېراتۇرىسىدا ۋاكۇئۇمدا قۇرغاق ھالغا كەلتۈرۈلدى. قۇرۇتۇلغان رېئاكسىيە مەھسۇلاتى HPLC-MS/MS ئانالىزى ئۈچۈن ئوكۇل قىلىش ئۈچۈن %10 ئېتانول ۋە مېتانولدا ئېرىتىلدى. ئايلاندۇرۇش نىسبىتى (20E دىن 3D20E غىچە) تەخمىنەن %97 بولدى (4b-رەسىم)، بىرىكتۈرۈلگەن 3D20E نىڭ MS سپېكتىرى جۈپلەشكەن ئاياللاردىكىگە ماس كەلدى (4c-رەسىم).
بۇ ئەپسانە ئېلىپ بېرىلغان ستاتىستىكىلىق سىناقلارنىڭ كونكرېت تەپسىلاتلىرىنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ. GraphPad (9.0 نەشرى) فىشېرنىڭ ئېنىق سىنىقى، مانتېل-كوكىس سىنىقى ۋە ستۇدېنتنىڭ t سىنىقىنى ئېلىپ بېرىشقا ئىشلىتىلدى. Cochran-Mantel-Haenszel سىناقلىرى خاسلاشتۇرۇلغان R سىكرىپتى ئارقىلىق ئېلىپ بېرىلدى (https://github.com/duopeng/mantelhaen.test دىن تاپقىلى بولىدۇ). سانلىق مەلۇمات تەقسىماتى Shapiro-Wilk سىنىقى ئارقىلىق 0.05 ئەھمىيەتلىك چەك بىلەن نورماللىق ئۈچۈن سىناق قىلىندى. سانلىق مەلۇماتلار نورماللىق سىنىقىدىن ئۆتەلمىگەندە، مانن-ۋىتنىي سىنىقى ئېلىپ بېرىلدى. ھايات قېلىش سانلىق مەلۇماتلىرى مانتېل-كوكىس سىنىقى ئارقىلىق تەھلىل قىلىندى. DESeq2 بولىقى (1.28.1 نەشرى) RNA-seq گېن سەۋىيىسىدىكى پەرقلىق ئىپادىلەش ئانالىزىنى ئېلىپ بېرىشقا ئىشلىتىلدى. گىرافىكتىكى گورىزونتال بالداق ئوتتۇرا قىممەتنى كۆرسىتىدۇ. P = 0.05 ئەھمىيەتلىك قىممىتى بارلىق سىناقلارنىڭ چەك قىممىتى سۈپىتىدە ئىشلىتىلدى.
تەتقىقات لايىھىسى ھەققىدە تېخىمۇ كۆپ ئۇچۇرغا ئېرىشىش ئۈچۈن، بۇ ماقالىگە ئۇلانغان تەبىئەت تەتقىقات دوكلاتىنىڭ قىسقىچە مەزمۇنىغا قاراڭ.
MS پروتېئومىك سانلىق مەلۇماتلىرى PXD032157 سانلىق مەلۇمات توپلىمى ئېنىقلىغۇچ بىلەن PRIDE ھەمكارلىق ئامبىرى (https://www.ebi.ac.uk/pride/) ئارقىلىق ProteomeXchange بىرلەشمىسىگە (http://proteomecentral.proteomexchange.org) كىرگۈزۈلدى.
RNA-seq سانلىق مەلۇمات توپلىمى GSE198665 نومۇرلۇق يۈرۈشلۈك خاتىرىدە گېن ئىپادىلەش ئۇنىۋېرسال كۇتۇپخانىسىغا (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/) ساقلاندى.
نۆۋەتتىكى تەتقىقات جەريانىدا ھاسىل قىلىنغان ۋە/ياكى تەھلىل قىلىنغان قوشۇمچە سانلىق مەلۇماتلارنى مۇۋاپىق تەلەپ بويىچە ئالاقىدار ئاپتورلاردىن ئېلىشقا بولىدۇ. بۇ ماقالىدە مەنبە سانلىق مەلۇماتلىرى بېرىلگەن.
De Loof, A. Ecdysteroids: ھاشاراتلارنىڭ جىنسىي ستېروئىدلىرىغا سەل قارىلىدۇ؟ ئەر: قارا قۇتا. ھاشارات ئىلمى. 13، 325–338 (2006).
رېدفېرن، CPF 20-گىدروكسىئېكدىزون ۋە ئانوفېلېس ستېفېنستىكى تۇخۇمداننىڭ تەرەققىياتى. ھاشاراتلار فىزىئولوگىيەسى ژۇرنىلى. 28، 97–109 (1982).