بىز ئىلگىرى جىگەر تالالىق كېسىلىگە گىرىپتار بولغان بىمارلاردا ئاشقازاندىن ئېلىنغان تىرىپتوفان مېتابولىتى ئىندول-3-پروپىئون كىسلاتاسى (IPA) نىڭ قان زەردابىدىكى سەۋىيەسىنىڭ تۆۋەن ئىكەنلىكىنى خەۋەر قىلغان ئىدۇق. بۇ تەتقىقاتتا، بىز سېمىز جىگەرلەرنىڭ قان زەردابىدىكى IPA سەۋىيەسى بىلەن بولغان ترانسكرىپتوم ۋە DNA مېتىلومىنى، شۇنداقلا IPA نىڭ جىگەر يۇلتۇز ھۈجەيرىلىرىنىڭ (HSCs) فېنوتىپلىق ئاكتىپسىزلىنىشىنى قوزغىتىشتىكى رولىنى تەكشۈردۇق.
بۇ تەتقىقاتقا كۇئوپيو ئوپېراتسىيە مەركىزىدە (KOBS) ئوپېراتسىيە قىلىنغان، 2-تىپلىق دىئابېت (T2DM) بولمىغان 116 سېمىز بىمار (يېشى 46.8 ± 9.3 ياش؛ بەدەن ئېغىرلىقى ئىندېكسى: 42.7 ± 5.0 kg/m²) قاتناشقان. ئايلىنىۋاتقان IPA سەۋىيەسى سۇيۇقلۇق خروماتوگرافىيەسى-ماسسا سپېكترومېتىرىيەسى (LC-MS) ئارقىلىق ئۆلچەنگەن، جىگەر ترانسكرىپتوم ئانالىزى ئومۇمىي RNA تەرتىپلەش ئارقىلىق ئېلىپ بېرىلغان، DNA مېتىللىنىش ئانالىزى بولسا Infinium HumanMethylation450 BeadChip ئارقىلىق ئېلىپ بېرىلغان. ئىنسان جىگەر يۇلتۇز شەكىللىك ھۈجەيرىلىرى (LX-2) سىناق نەيچىسىدىكى سىناقلارغا ئىشلىتىلگەن.
قان زەردابىدىكى IPA سەۋىيەسى جىگەردىكى ئاپپتوز، مىتوفاگىيە ۋە ئۇزۇن ئۆمۈر كۆرۈش يوللىرىغا چېتىشلىق گېنلارنىڭ ئىپادىلىنىشى بىلەن مۇناسىۋەتلىك. AKT سېرىن/ترېئونىن كىنازا 1 (AKT1) گېنى جىگەرنىڭ كۆچۈرمىسى ۋە DNA مېتىللىنىش پروفىللىرىدا ئەڭ كۆپ ۋە ئەڭ ئاساسلىق ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسىتىدىغان گېن ئىدى. IPA بىلەن داۋالاش LX-2 ھۈجەيرىلىرىنىڭ فىبروز، ئاپپتوز ۋە ياشاش ئىقتىدارىنى تەڭشەيدىغان گېنلارنىڭ ئىپادىلىنىشىنى تەڭشەش ئارقىلىق ئاپپتوزنى، مىتوخوندىرىيە نەپەسلىنىشىنى تۆۋەنلىتىشنى ۋە ھۈجەيرە مورفولوگىيەسى ۋە مىتوخوندىرىيە دىنامىكىسىنى ئۆزگەرتتى.
بۇ سانلىق مەلۇماتلار بىرلەشتۈرۈپ ئېيتقاندا، IPA نىڭ داۋالاش ئۈنۈمىنىڭ يوشۇرۇن ئىكەنلىكىنى، ئاپپتوزنى قوزغىتىپ، HSC فېنوتىپىنى ئاكتىپسىز ھالەتكە يۆتكىيەلەيدىغانلىقىنى، شۇنىڭ بىلەن HSC نىڭ ئاكتىپلىشىشى ۋە مىتوخوندىرىيە ماددا ئالمىشىشىغا توسقۇنلۇق قىلىش ئارقىلىق جىگەر تالالىشىشىنى چەكلەش ئېھتىماللىقىنى كېڭەيتىدىغانلىقىنى قوللايدۇ.
سېمىزلىك ۋە ماددا ئالمىشىش سىندرومىنىڭ تارقىلىشى ماددا ئالمىشىش بىلەن مۇناسىۋەتلىك مايلىق جىگەر كېسىلى (MASLD) نىڭ كۆپىيىشى بىلەن مۇناسىۋەتلىك؛ بۇ كېسەللىك ئومۇمىي نوپۇسنىڭ %25 تىن %30 گىچە تەسىر كۆرسىتىدۇ [1]. MASLD نىڭ ئاساسلىق نەتىجىسى جىگەر تالالىشىشى بولۇپ، بۇ تالالىق ھۈجەيرە سىرتىدىكى ماترىكسا (ECM) نىڭ ئۈزلۈكسىز توپلىنىشى بىلەن خاراكتېرلىنىدىغان دىنامىك جەريان [2]. جىگەر تالالىشىشىغا چېتىشلىق ئاساسلىق ھۈجەيرىلەر جىگەر يۇلتۇز شەكىللىك ھۈجەيرىلىرى (HSCs) بولۇپ، ئۇلار تۆت خىل فېنوتىپنى نامايان قىلىدۇ: تىنچ ھالەتتىكى، ئاكتىپلانغان، ئاكتىپسىزلانغان ۋە قېرىغان [3، 4]. HSCs ئاكتىپلىنىپ، تىنچ ھالەتتىن يۇقىرى ئېنېرگىيە تەلەپ قىلىدىغان كۆپىيىشچان فىبروبلاستقا ئوخشاش ھۈجەيرىلەرگە ئۆزگىرىشى مۇمكىن، بۇنىڭ بىلەن α-سىلىق مۇسكۇل ئاكتىن (α-SMA) ۋە I تىپلىق كوللاگېن (Col-I) نىڭ ئىپادىلىنىشى ئاشىدۇ [5، 6]. جىگەر تالالىشىشىنىڭ ئەسلىگە كېلىشى جەريانىدا، ئاكتىپلانغان HSCs ئاپپتوز ياكى ئاكتىپسىزلاندۇرۇش ئارقىلىق يوقىتىلىدۇ. بۇ جەريانلار فىبروگېن گېنلىرىنىڭ تۆۋەنلىشى ۋە ياشاشقا ياردەم بېرىدىغان گېنلارنىڭ (مەسىلەن، NF-κB ۋە PI3K/Akt سىگنال يوللىرى) تەڭشىلىشىنى [7، 8]، شۇنداقلا مىتوخوندىرىيە دىنامىكىسى ۋە فۇنكسىيەسىدىكى ئۆزگىرىشلەرنى [9] ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ.
ئۈچەيدە ئىشلەپچىقىرىلىدىغان تىرىپتوفان مېتابولىتى ئىندول-3-پروپىئون كىسلاتاسى (IPA) نىڭ قان زەردابىدىكى سەۋىيىسى MASLD قاتارلىق ئىنسانلارنىڭ ماددا ئالمىشىش كېسەللىكلىرىدە تۆۋەنلىگەنلىكى بايقالغان [10-13]. IPA يېمەكلىك تالاسىنى ئىستېمال قىلىش بىلەن مۇناسىۋەتلىك بولۇپ، ئوكسىدلىنىشقا قارشى تۇرۇش ۋە ياللۇغ قايتۇرۇش رولى بىلەن داڭلىق، ھەمدە يېمەكلىكتىن كېلىپ چىققان ئىسپىرتسىز ستېئاتوگېپاتىت (NASH) فېنوتىپىنى تىرىك جانلىقلاردا ۋە تىرىك جانلىقلاردا ئاجىزلاشتۇرىدۇ [11-14]. بىزنىڭ ئىلگىرىكى تەتقىقاتىمىزدىن بەزى دەلىللەر كەلگەن بولۇپ، بۇ تەتقىقاتتا جىگەر تالاسى بار بىمارلاردا قان زەردابىدىكى IPA سەۋىيىسىنىڭ Kuopio Bariatric جىددىي ئوپېراتسىيە تەتقىقاتىدا (KOBS) جىگەر تالاسى يوق سېمىز بىمارلارغا قارىغاندا تۆۋەن ئىكەنلىكى كۆرسىتىلگەن. ئۇنىڭدىن باشقا، بىز IPA بىلەن داۋالاشنىڭ ئىنسان جىگەر يۇلتۇز شەكىللىك ھۈجەيرىسى (LX-2) مودېلىدا ھۈجەيرە چاپلىشىشى، ھۈجەيرە كۆچۈشى ۋە قان ھاسىل قىلىش ئاساسىي ھۈجەيرىسىنىڭ ئاكتىپلىنىشىنىڭ كلاسسىك بەلگىسى بولغان گېنلارنىڭ ئىپادىلىنىشىنى تۆۋەنلىتىشى مۇمكىنلىكىنى ۋە جىگەرنى قوغداش خاراكتېرلىك مېتابولىت ئىكەنلىكىنى كۆرسىتىپ بەردۇق [15]. قانداقلا بولمىسۇن، IPA نىڭ HSC ئاپپتوزى ۋە مىتوخوندىرىيە بىئوئېنېرگىيىسىنى قوزغىتىش ئارقىلىق جىگەر فىبروزىنىڭ رېگرېسسىيەسىنى قانداق قوزغىتىدىغانلىقى ئېنىق ئەمەس.
بۇ يەردە، بىز سېمىز، ئەمما 2-تىپلىق دىئابېت (KOBS) بولمىغان كىشىلەرنىڭ جىگىرىدىكى ئاپپتوز، مىتوفاگىيە ۋە ئۇزۇن ئۆمۈر كۆرۈش يوللىرىغا باي گېنلارنىڭ ئىپادىلىنىشى بىلەن قان زەردابىدىكى IPA نىڭ مۇناسىۋەتلىك ئىكەنلىكىنى كۆرسىتىپ بەردۇق. بۇنىڭدىن باشقا، بىز IPA نىڭ ئاكتىپسىزلاندۇرۇش يولى ئارقىلىق ئاكتىپلانغان قان ھاسىل قىلىش ئاساسىي ھۈجەيرىلىرىنىڭ (HSCs) تازىلىنىشى ۋە پارچىلىنىشىنى قوزغىتالايدىغانلىقىنى بايقىدۇق. بۇ نەتىجىلەر IPA نىڭ يېڭى رولىنى ئاشكارىلاپ، ئۇنى جىگەر تالالىشىشىنىڭ ئەسلىگە كېلىشىنى ئىلگىرى سۈرۈشتىكى داۋالاش نىشانىغا ئايلاندۇرىدۇ.
KOBS گۇرۇپپىسىدىكى ئىلگىرىكى بىر تەتقىقاتتا، جىگەر تالالىقى بار بىمارلارنىڭ قان ئايلىنىش سىستېمىسى IPA سەۋىيىسىنىڭ جىگەر تالالىقى يوق بىمارلارغا سېلىشتۇرغاندا تۆۋەن ئىكەنلىكى كۆرسىتىلگەن [15]. 2-تىپلىق دىئابېتنىڭ مۇمكىن بولغان ئارىلاشما تەسىرىنى چىقىرىۋېتىش ئۈچۈن، بىز داۋاملىق KOBS تەتقىقاتىدىن 2-تىپلىق دىئابېت يوق 116 سېمىز بىمارنى (ئوتتۇرىچە يېشى ± SD: 46.8 ± 9.3 ياش؛ BMI: 42.7 ± 5.0 kg/m2) (1-جەدۋەل) تەتقىقات ئاھالىسى سۈپىتىدە قوبۇل قىلدۇق [16]. بارلىق قاتناشقۇچىلار يازما ئۇچۇر بىلەن ماقۇللۇق بەردى ۋە تەتقىقات خاتىرىسى شىمالىي ساۋو ناھىيەلىك دوختۇرخانىسىنىڭ ئەخلاق كومىتېتى تەرىپىدىن خېلسىنكى خىتابنامىسى (54/2005، 104/2008 ۋە 27/2010) غا ئاساسەن تەستىقلاندى.
جىگەر بىئوپسىيەسى ئەۋرىشكىلىرى بەدەن ئوپېراتسىيەسى جەريانىدا ئېلىنغان ۋە تەجرىبىلىك پاتولوگىيە مۇتەخەسسىسلىرى تەرىپىدىن ئىلگىرى بايان قىلىنغان ئۆلچەملەرگە ئاساسەن گىستولوگىيەلىك جەھەتتىن باھالانغان [17، 18]. باھالاش ئۆلچەملىرى قوشۇمچە جەدۋەل S1 دا قىسقىچە بايان قىلىنغان ۋە ئىلگىرى بايان قىلىنغان [19].
ئاچ قورساق زەردابى ئەۋرىشكىلىرى مېتابولومىك ئانالىزى ئۈچۈن نىشانسىز سۇيۇقلۇق خروماتوگرافىيەسى-ماسسا سپېكترومېتىرىيەسى (LC-MS) ئارقىلىق ئانالىز قىلىندى (n = 116). ئەۋرىشكىلەر ئىلگىرى تەسۋىرلەنگەندەك UHPLC-qTOF-MS سىستېمىسى (1290 LC, 6540 qTOF-MS, Agilent Technologies, Waldbronn, Karlsruhe, گېرمانىيە) ئارقىلىق ئانالىز قىلىندى19. ئىزوپروپىل ئىسپىرت (IPA) نى ئېنىقلاش ساقلاش ۋاقتى ۋە MS/MS سپېكتىرىنى ساپ ئۆلچەملەر بىلەن سېلىشتۇرۇشقا ئاساسلاندى. IPA سىگنالىنىڭ كۈچلۈكلۈكى (چوققا رايونى) كېيىنكى بارلىق ئانالىزلاردا كۆزدە تۇتۇلدى [20].
پۈتۈن جىگەر RNA تەرتىپلەش ئىللۇمىنا HiSeq 2500 ئارقىلىق ئېلىپ بېرىلدى ۋە سانلىق مەلۇماتلار ئىلگىرىكى تەسۋىرلەنگەندەك ئالدىن بىر تەرەپ قىلىندى [19، 21، 22]. بىز MitoMiner 4.0 سانلىق مەلۇمات ئامبىرىدىن تاللانغان 1957 گېننى ئىشلىتىپ، مىتوخوندىرىيە فۇنكسىيەسى/بىئوگېنېزىغا تەسىر كۆرسىتىدىغان كۆچۈرمىلەرنىڭ نىشانلىق پەرقلىق ئىپادىلەش ئانالىزىنى ئېلىپ باردۇق [23]. جىگەر DNA مېتىللىنىش ئانالىزى ئىلگىرى تەسۋىرلەنگەن ئۇسۇل بىلەن Infinium HumanMethylation450 BeadChip (ئىللۇمىنا، سان دىياگو، كالىفورنىيە، ئامېرىكا) ئارقىلىق ئېلىپ بېرىلدى [24، 25].
ئىنسان جىگەر يۇلتۇز شەكىللىك ھۈجەيرىلىرى (LX-2) پروفېسسور ستېفانو رومېئو تەرىپىدىن تەمىنلەنگەن بولۇپ، ئۇلار DMEM/F12 مۇھىتىدا (Biowest, L0093-500, 1% Pen/Strep; Lonza, DE17-602E, 2% FBS; Gibco, 10270-106) يېتىشتۈرۈلۈپ ساقلانغان. IPA نىڭ خىزمەت مىقدارىنى تاللاش ئۈچۈن، LX-2 ھۈجەيرىلىرى DMEM/F12 مۇھىتىدا 24 سائەت ئوخشىمىغان قويۇقلۇقتىكى IPA (10 μM, 100 μM ۋە 1 mM; Sigma, 220027) بىلەن بىر تەرەپ قىلىنغان. بۇنىڭدىن باشقا، IPA نىڭ HSC نى ئاكتىپسىزلاشتۇرۇش ئىقتىدارىنى تەكشۈرۈش ئۈچۈن، LX-2 ھۈجەيرىلىرى قان زەردابىسىز مۇھىتتا 24 سائەت 5 ng/ml TGF-β1 (تەتقىقات ۋە تەرەققىيات سىستېمىسى، 240-B-002/CF) ۋە 1 mM IPA بىلەن بىرلىكتە بىر تەرەپ قىلىنغان. ماس كېلىدىغان ماشىنا كونتروللىرى ئۈچۈن، TGF-β1 داۋالاش ئۈچۈن %0.1 BSA تەركىبىدىكى 4 nM HCL ۋە IPA داۋالاش ئۈچۈن %0.05 DMSO ئىشلىتىلگەن، ھەمدە بۇ ئىككىسى بىرلەشتۈرۈلگەن داۋالاش ئۈچۈن بىرلىكتە ئىشلىتىلگەن.
ئاپپتوز ئىشلەپچىقارغۇچىنىڭ كۆرسەتمىسىگە ئاساسەن، FITC Annexin V ئاپپتوزنى بايقاش قورالى (7-AAD قوشۇلغان Biolegend، سان دىياگو، كالىفورنىيە، ئامېرىكا، كاتتا نومۇرى 640922) ئارقىلىق باھالاندى. قىسقىسى، LX-2 (1 × 105 ھۈجەيرە/ئۆڭكۈر) 12ئۆڭكۈرلۈك تاختايدا بىر كېچە يېتىشتۈرۈلۈپ، ئاندىن كۆپ قېتىملىق IPA ياكى IPA ۋە TGF-β1 بىلەن بىر تەرەپ قىلىندى. ئەتىسى، سۇ ئۈستىدە قالغان ۋە چاپلىشىپ قالغان ھۈجەيرىلەر يىغىۋېلىنىپ، ترىپسىنىزلىنىپ، PBS بىلەن يۇيۇلۇپ، Annexin V باغلاش بۇفېرىدا قايتا ئېرىتىلىپ، FITC-Annexin V ۋە 7-AAD بىلەن 15 مىنۇت ئىنكۇباتسىيە قىلىندى.
تىرىك ھۈجەيرىلەردىكى مىتوخوندىرىيەلەر Mitotracker™ Red CMXRos (MTR) (Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA) ئارقىلىق ئوكسىدلىنىش ئاكتىپلىقى ئۈچۈن بويالدى. MTR سىنىقى ئۈچۈن، LX-2 ھۈجەيرىلىرى IPA ۋە TGF-β1 بىلەن ئوخشاش زىچلىقتا ئىنكۇباتسىيە قىلىندى. 24 سائەتتىن كېيىن، تىرىك ھۈجەيرىلەر تىرىپسىنىزلىنىپ، PBS بىلەن يۇيۇلۇپ، ئاندىن 100 μM MTR بىلەن 37 سېلسىيە گرادۇستا 20 مىنۇت ئىنكۇباتسىيە قىلىندى، بۇ ئىلگىرى تەسۋىرلەنگەندەك [26]. تىرىك ھۈجەيرە مورفولوگىيەسى ئانالىزى ئۈچۈن، ھۈجەيرە چوڭلۇقى ۋە سىتوپلازما مۇرەككەپلىكى ئايرىم-ئايرىم ھالدا ئالدىغا تارقاقلىق (FSC) ۋە يان تارقاقلىق (SSC) پارامېتىرلىرى ئارقىلىق ئانالىز قىلىندى.
بارلىق سانلىق مەلۇماتلار (30،000 ۋەقە) NovoCyte Quanteon (Agilent) ئارقىلىق توپلانغان ۋە NovoExpress® 1.4.1 ياكى FlowJo V.10 يۇمشاق دېتالى ئارقىلىق تەھلىل قىلىنغان.
ئوكسىگېن سەرپىياتى (OCR) ۋە ھۈجەيرە سىرتىدىكى كىسلاتالىشىش سۈرئىتى (ECAR) ئىشلەپچىقارغۇچىنىڭ كۆرسەتمىسىگە ئاساسەن، Seahorse XF ھۈجەيرە مىتو بېسىمى بىلەن تەمىنلەنگەن Seahorse ھۈجەيرە سىرتىدىكى ئېقىم ئانالىزاتورى (Agilent Technologies, Santa Clara, CA) ئارقىلىق ھەقىقىي ۋاقىتتا ئۆلچەندى. قىسقىسى، ھەر بىر قۇدۇققا 2 × 104 LX-2 ھۈجەيرە XF96 ھۈجەيرە يېتىشتۈرۈش تاختىسىغا ئۇرۇق سېلىندى. بىر كېچە ئىنكۇباتسىيەدىن كېيىن، ھۈجەيرىلەر ئىزوپروپانول (IPA) ۋە TGF-β1 (قوشۇمچە ئۇسۇللار 1) بىلەن بىر تەرەپ قىلىندى. سانلىق مەلۇمات ئانالىزى Seahorse XF Wave يۇمشاق دېتالى ئارقىلىق ئېلىپ بېرىلدى، بۇنىڭ ئىچىدە Seahorse XF ھۈجەيرە ئېنېرگىيەسى فېنوتىپ سىناق دوكلاتى گېنېراتورى بار. بۇنىڭدىن، بىئوئېنېرگىيىلىك ساغلاملىق كۆرسەتكۈچى (BHI) ھېسابلىنىپ چىقىلدى [27].
ئومۇمىي RNA cDNA غا كۆچۈرۈلدى. كونكرېت ئۇسۇللار ئۈچۈن [15] گە قاراڭ. ئىنساننىڭ 60S رىبوسوما كىسلاتالىق ئاقسىلى P0 (RPLP0) ۋە سىكلوفىلىن A1 (PPIA) mRNA سەۋىيىسى ئاساسىي گېن كونترولى سۈپىتىدە ئىشلىتىلدى. QuantStudio 6 pro Real-Time PCR سىستېمىسى (Thermo Fisher, Landsmeer, The Netherlands) TaqMan™ Fast Advanced Master Mix Kit (Applied Biosystems) ياكى Sensifast SYBR Lo-ROX Kit (Bioline, BIO 94050) بىلەن ئىشلىتىلدى، ھەمدە نىسپىي گېن ئىپادىلىنىش قاتلىمى سېلىشتۇرما Ct قىممىتى دەۋرىيلىك پارامېتىرلىرى (ΔΔCt) ۋە ∆∆Ct ئۇسۇلى ئارقىلىق ھېسابلىنىدۇ. باشلانغۇچ ماددىلارنىڭ تەپسىلاتلىرى S2 ۋە S3 قوشۇمچە جەدۋەللىرىدە كۆرسىتىلدى.
يادرو DNA (ncDNA) ۋە مىتوخوندىرىيە DNA (mtDNA) ئىلگىرى تەسۋىرلەنگەندەك [28] DNeasy قان ۋە توقۇلما زاپچاسلىرى (Qiagen) ئارقىلىق ئېلىندى. mtDNA نىڭ نىسپىي مىقدارى ھەر بىر نىشان mtDNA رايونىنىڭ ئۈچ يادرو DNA رايونىنىڭ گېئومېتىرىيەلىك ئوتتۇرىچە قىممىتى (mtDNA/ncDNA) بىلەن بولغان نىسبىتىنى ھېسابلاش ئارقىلىق ھېسابلىنىدۇ، بۇ ھەقتە قوشۇمچە ئۇسۇللار 2 دە تەپسىلىي بايان قىلىندى. mtDNA ۋە ncDNA نىڭ دەسلەپكى ئۇچۇرلىرى قوشۇمچە جەدۋەل S4 دە كۆرسىتىلدى.
تىرىك ھۈجەيرىلەر Mitotracker™ قىزىل CMXRos (MTR) (Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA) بىلەن بوялدى، بۇنىڭ بىلەن ھۈجەيرە ئارا ۋە ھۈجەيرە ئىچىدىكى مىتوخوندىرىيە تورىنى كۆرگىلى بولىدۇ. LX-2 ھۈجەيرىلىرى (1 × 104 ھۈجەيرە/ئۆڭكۈر) ئەينەك سىيرىلمىلاردا ئەينەك ئاستىدىكى كۈلتۈرە تەخسىلىرىدە (Ibidi GmbH, Martinsried, گېرمانىيە) يېتىشتۈرۈلدى. 24 سائەتتىن كېيىن، تىرىك LX-2 ھۈجەيرىلىرى 37 سېلسىيە گرادۇستا 20 مىنۇت 100 μM MTR بىلەن ئىنكۇباتسىيە قىلىندى ۋە ھۈجەيرە يادروسى DAPI (1 μg/ml, Sigma-Aldrich) بىلەن بوялدى، بۇلار ئىلگىرى تەسۋىرلەنگەندەك [29] قىلىندى. مىتوخوندىرىيە تورى Zeiss LSM 800 كونفوكال مودۇلى بىلەن تەمىنلەنگەن Zeiss Axio Observer تەتۈر مىكروسكوپى (Carl Zeiss Microimaging GmbH, Jena, گېرمانىيە) ئارقىلىق 37 سېلسىيە گرادۇستا، 5% CO2 بار نەملىك ئاتموسفېرادا، 63×NA 1.3 ئوبيېكتىپ ئارقىلىق كۆرگىلى بولىدۇ. بىز ھەر بىر ئۈلگە تىپى ئۈچۈن ئون Z يۈرۈشلۈك رەسىمگە ئېرىشتۇق. ھەر بىر Z يۈرۈشلۈكى 30 بۆلەكتىن تەركىب تاپقان بولۇپ، ھەر بىرىنىڭ قېلىنلىقى 9.86 μm. ھەر بىر ئۈلگە ئۈچۈن، ZEN 2009 يۇمشاق دېتالى (Carl Zeiss Microimaging GmbH, Jena, گېرمانىيە) ئارقىلىق ئون خىل كۆرۈش دائىرىسىدىكى رەسىملەر ئېلىندى، ھەمدە قوشۇمچە ئۇسۇللار 3 دە تەپسىلىي بايان قىلىنغان پارامېتىرلارغا ئاساسەن ImageJ يۇمشاق دېتالى (v1.54d) [30, 31] ئارقىلىق مىتوخوندىرىيە مورفولوگىيە ئانالىزى ئېلىپ بېرىلدى.
ھۈجەيرىلەر 0.1 M فوسفات بۇففېرىدا %2 لىك گلۇتارالدېھىد بىلەن بېكىتىلدى، ئاندىن %1 ئوسمىي تېتروكسىد ئېرىتمىسى (Sigma Aldrich, MO, ئامېرىكا) بىلەن بېكىتىلدى، ئاتسېتون بىلەن ئاستا-ئاستا سۇسىزلاندۇرۇلدى (Merck, Darmstadt, گېرمانىيە) ۋە ئاخىرىدا ئېپوكسى قېتىشمىسىغا سېلىندى. ئىنتايىن نېپىز پارچىلار تەييارلىنىپ، %1 ئۇرانىل ئاتسېتات (Merck, Darmstadt, گېرمانىيە) ۋە %1 قوغۇشۇن سىترات (Merck, Darmstadt, گېرمانىيە) بىلەن بوялدى. ئۇلترا قۇرۇلمىلىق رەسىملەر 80 kV تېزلىنىش توك بېسىمىدا JEM 2100F EXII يەتكۈزۈش ئېلېكترون مىكروسكوپى (JEOL Ltd, توكيو, ياپونىيە) ئارقىلىق ئېلىندى.
IPA بىلەن 24 سائەت داۋالانغان LX-2 ھۈجەيرىلىرىنىڭ مورفولوگىيەسى Zeiss تەتۈر نۇر مىكروسكوپى (Zeiss Axio Vert.A1 ۋە AxioCam MRm، Jena، گېرمانىيە) ئارقىلىق 50 ھەسسە چوڭايتىش ئارقىلىق باسقۇچلۇق كونتراست مىكروسكوپ ئارقىلىق تەھلىل قىلىندى.
كلىنىكىلىق سانلىق مەلۇماتلار ئوتتۇرىچە قىممەت ± ئۆلچەملىك چەتنىش ياكى ئوتتۇرا قىممەت (كۋارتىللار ئارا دائىرە: IQR) سۈپىتىدە ئىپادىلەندى. ئۈچ تەتقىقات گۇرۇپپىسى ئوتتۇرىسىدىكى پەرقلەرنى سېلىشتۇرۇش ئۈچۈن بىر تەرەپلىمە ئۆزگىرىشچانلىق ئانالىزى (ئۈزلۈكسىز ئۆزگەرگۈچى مىقدارلار) ياكى χ² سىنىقى (تۈرلۈك ئۆزگەرگۈچى مىقدارلار) ئىشلىتىلدى. كۆپ قېتىملىق سىناقنى تۈزىتىش ئۈچۈن يالغان مۇسبەت نىسبىتى (FDR) ئىشلىتىلدى، ھەمدە FDR < 0.05 بولغان گېنلار ستاتىستىكىلىق جەھەتتىن مۇھىم دەپ قارالدى. CpG DNA مېتىللىنىشىنى IPA سىگنالىنىڭ كۈچلۈكلۈكى بىلەن باغلاش ئۈچۈن نەيزە باغلىنىشى ئانالىزى ئىشلىتىلدى، نامدىكى p قىممىتى (p < 0.05) دوكلات قىلىندى.
يول ئانالىزى تورغا ئاساسلانغان گېن توپلىمى ئانالىز قورالى (WebGestalt) ئارقىلىق ئېلىپ بېرىلدى، بۇ قوراللاردا قان زەردابى IPA سەۋىيىسى بىلەن مۇناسىۋەتلىك 268 نۇسخا (ناملىق p < 0.01)، 119 مىتوخوندىرىيە بىلەن مۇناسىۋەتلىك نۇسخا (ناملىق p < 0.05) ۋە 3093 جىگەر نۇسخاسىنىڭ 4350 CpG نىڭ قان زەردابى IPA سەۋىيىسى بىلەن مۇناسىۋەتلىك ئىكەنلىكى ئېنىقلاندى. ئەركىن ئىشلىتىشكە بولىدىغان Venny DB (2.1.0 نەشرى) قورالى قاپلىشىپ كەتكەن گېنلارنى تېپىشقا، StringDB (11.5 نەشرى) بولسا ئاقسىل-ئاقسىل ئۆزئارا تەسىرىنى كۆرسىتىشكە ئىشلىتىلدى.
LX-2 تەجرىبىسى ئۈچۈن، ئەۋرىشكىلەرنىڭ نورماللىقى D'Agostino-Pearson سىنىقى ئارقىلىق سىناق قىلىندى. سانلىق مەلۇماتلار كەم دېگەندە ئۈچ بىئولوگىيىلىك تەكرارلىنىشتىن ئېلىندى ۋە Bonferroni post hoc سىنىقى بىلەن بىر تەرەپلىمە ANOVA قىلىندى. p قىممىتى 0.05 تىن تۆۋەن بولسا، ستاتىستىكىلىق جەھەتتىن مۇھىم دەپ قارالدى. سانلىق مەلۇماتلار ئوتتۇرىچە قىممەت ± SD سۈپىتىدە كۆرسىتىلدى، ھەمدە ھەر بىر رەسىمدە سىناق سانى كۆرسىتىلدى. بارلىق ئانالىزلار ۋە گىرافىكلار Windows ئۈچۈن GraphPad Prism 8 ستاتىستىكىلىق يۇمشاق دېتالى (GraphPad Software Inc., 8.4.3 نەشرى, سان دىياگو, ئامېرىكا) ئارقىلىق ئېلىپ بېرىلدى.
ئالدى بىلەن، بىز قان زەردابى IPA سەۋىيىسىنىڭ جىگەر، پۈتۈن بەدەن ۋە مىتوخوندىرىيە كۆچۈرمىلىرى بىلەن بولغان مۇناسىۋىتىنى تەكشۈردۇق. ئومۇمىي كۆچۈرمە پروفىلىدا، قان زەردابى IPA سەۋىيىسى بىلەن مۇناسىۋەتلىك ئەڭ كۈچلۈك گېن MAPKAPK3 (FDR = 0.0077؛ مىتوخوندىرىيە بىلەن ئاكتىپلاشتۇرۇلغان ئاقسىل كىنازا بىلەن ئاكتىپلاشتۇرۇلغان ئاقسىل كىنازا 3)؛ مىتوخوندىرىيە بىلەن مۇناسىۋەتلىك كۆچۈرمە پروفىلىدا، ئەڭ كۈچلۈك مۇناسىۋەتلىك گېن AKT1 (FDR = 0.7621؛ AKT سېرىن/ترېئونىن كىنازا 1) (قوشۇمچە ھۆججەت 1 ۋە قوشۇمچە ھۆججەت 2).
ئاندىن بىز دۇنياۋى كۆچۈرمىلەرنى (n = 268؛ p < 0.01) ۋە مىتوخوندىرىيە بىلەن مۇناسىۋەتلىك كۆچۈرمىلەرنى (n = 119؛ p < 0.05) تەھلىل قىلىپ، ئاخىرىدا ئاپپتوزنى ئەڭ مۇھىم قانۇنىي يول دەپ بېكىتتۇق (p = 0.0089). قان زەردابى IPA سەۋىيىسى بىلەن مۇناسىۋەتلىك مىتوخوندىرىيە كۆچۈرمىلىرى ئۈچۈن، بىز ئاپپتوز (FDR = 0.00001)، مىتوفاگىيە (FDR = 0.00029) ۋە TNF سىگنال يوللىرىغا (FDR = 0.000006) دىققەت قىلدۇق (1A-رەسىم، 2-جەدۋەل ۋە قوشۇمچە رەسىملەر 1A-B).
ئىنسان جىگىرىدىكى دۇنياۋى، مىتوخوندىرىيە بىلەن مۇناسىۋەتلىك كۆچۈرمىلەر ۋە DNA مېتىللىنىشىنىڭ قان زەردابى IPA سەۋىيىسى بىلەن مۇناسىۋەتلىك قاپلىنىش ئانالىزى. A قان زەردابى IPA سەۋىيىسى بىلەن مۇناسىۋەتلىك 3092 CpG ئورنىغا خەرىتىلەنگەن 268 دۇنياۋى كۆچۈرمىلەر، 119 مىتوخوندىرىيە بىلەن مۇناسىۋەتلىك كۆچۈرمىلەر ۋە DNA مېتىللانغان كۆچۈرمىلەرنى كۆرسىتىدۇ (دۇنياۋى كۆچۈرمىلەر ۋە مېتىللانغان DNA ئۈچۈن p قىممىتى < 0.01، مىتوخوندىرىيە كۆچۈرمىلىرى ئۈچۈن p قىممىتى < 0.05). ئاساسلىق قاپلىنىش كۆچۈرمىلىرى ئوتتۇرىدا كۆرسىتىلدى (AKT1 ۋە YKT6). B ئەڭ يۇقىرى ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسىتىش نومۇرىغا (0.900) ئىگە 13 گېننىڭ باشقا گېنلار بىلەن بولغان ئۆز-ئارا تەسىر خەرىتىسى StringDB تور قورالى ئارقىلىق قان زەردابى IPA سەۋىيىسى بىلەن مۇھىم دەرىجىدە مۇناسىۋەتلىك بولغان 56 قاپلىنىش گېنىدىن (قارا سىزىق رايونى) قۇرۇلدى. يېشىل: گېن ئونتولوگىيەسى (GO) ھۈجەيرە تەركىبى: مىتوخوندىرىيە (GO:0005739) غا خەرىتىلەنگەن گېنلار. AKT1 سانلىق مەلۇماتلارغا ئاساسەن (تېكىست قېزىش، تەجرىبە، سانلىق مەلۇمات ئامبىرى ۋە بىرلىكتە ئىپادىلەش) باشقا ئاقسىللار بىلەن بولغان ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسىتىش جەھەتتە ئەڭ يۇقىرى نومۇرغا (0.900) ئېرىشكەن ئاقسىل. تور تۈگۈنلىرى ئاقسىللارنى، گىرۋەكلىرى ئاقسىللار ئوتتۇرىسىدىكى باغلىنىشلارنى كۆرسىتىدۇ.
ئۈچەيدىكى مىكرو بىئولوگىيىلىك مېتابولىتلار DNA مېتىللىنىشى ئارقىلىق ئېپىگېنېتىك تەركىبنى تەڭشىيەلەيدىغان بولغاچقا [32]، بىز قان زەردابى IPA سەۋىيەسىنىڭ جىگەر DNA مېتىللىنىشى بىلەن مۇناسىۋەتلىك ياكى ئەمەسلىكىنى تەكشۈردۇق. بىز قان زەردابى IPA سەۋىيەسى بىلەن مۇناسىۋەتلىك ئىككى چوڭ مېتىللىنىش ئورنىنىڭ پرولىن-سېرىنغا باي رايون 3 (C19orf55) ۋە ئىسسىقلىق سوقۇش ئاقسىلى ئائىلىسى B (كىچىك) ئەزاسى 6 (HSPB6) غا يېقىن ئىكەنلىكىنى بايقىدۇق (قوشۇمچە ھۆججەت 3). 4350 CpG نىڭ DNA مېتىللىنىشى (p < 0.01) قان زەردابى IPA سەۋىيەسى بىلەن مۇناسىۋەتلىك بولۇپ، ئۇزۇن ئۆمۈر كۆرۈشنى تەڭشەش يوللىرى بىلەن موللاشتى (p = 0.006) (1A-رەسىم، 2-جەدۋەل ۋە قوشۇمچە 1C-رەسىم).
ئىنسان جىگىرىدىكى قان زەردابى IPA سەۋىيىسى، دۇنياۋى كۆچۈرمە، مىتوخوندىرىيە بىلەن مۇناسىۋەتلىك كۆچۈرمە ۋە DNA مېتىللىنىشى ئوتتۇرىسىدىكى باغلىنىشنىڭ ئاساسىدىكى بىئولوگىيىلىك مېخانىزملارنى چۈشىنىش ئۈچۈن، بىز ئالدىنقى يول ئانالىزىدا بايقالغان گېنلارنىڭ ئۈستى-ئۈستى ئانالىزىنى ئېلىپ باردۇق (1A-رەسىم). 56 ئۈستى-ئۈستى گېننىڭ يولنى بايىتىش ئانالىزىنىڭ نەتىجىسى (1A-رەسىمدىكى قارا سىزىقنىڭ ئىچىدە) ئاپپتوز يولىنىڭ (p = 0.00029) ئۈچ ئانالىزغا ئورتاق بولغان ئىككى گېننى گەۋدىلەندۈرگەنلىكىنى كۆرسەتتى: AKT1 ۋە YKT6 (YKT6 v-SNARE گومولوگى)، ۋېنن دىئاگراممىسىدا كۆرسىتىلگەندەك (قوشۇمچە رەسىم 2 ۋە 1A-رەسىم). قىزىقارلىقى شۇكى، بىز AKT1 (cg19831386) ۋە YKT6 (cg24161647) نىڭ قان زەردابى IPA سەۋىيىسى بىلەن مۇسبەت مۇناسىۋەتلىك ئىكەنلىكىنى بايقىدۇق (قوشۇمچە ھۆججەت 3). گېن مەھسۇلاتلىرى ئوتتۇرىسىدىكى ئاقسىل ئۆزئارا تەسىر كۆرسىتىش ئېھتىماللىقىنى ئېنىقلاش ئۈچۈن، بىز 56 ئۈستى-ئۈستى گېن ئىچىدىن ئەڭ يۇقىرى ئورتاق رايون نومۇرى (0.900) بولغان 13 گېننى كىرگۈزۈش سۈپىتىدە تاللىدۇق ۋە ئۆزئارا تەسىر كۆرسىتىش خەرىتىسىنى تۈزدۇق. ئىشەنچ دەرىجىسىگە (چەكلىك ئىشەنچ) ئاساسلانغاندا، ئەڭ يۇقىرى نومۇرغا (0.900) ئېرىشكەن AKT1 گېنى ئەڭ يۇقىرى ئورۇندا تۇرغان (1B-رەسىم).
يول ئانالىزىغا ئاساسەن، بىز ئاپپتوزنىڭ ئاساسلىق يول ئىكەنلىكىنى بايقىدۇق، شۇڭا بىز IPA داۋالاش ئۇسۇلىنىڭ HSC نىڭ ئاپپتوزغا تەسىر كۆرسىتىدىغان-تەسىر قىلمايدىغانلىقىنى تەكشۈردۇق. بىز ئىلگىرى IPA نىڭ ھەر خىل مىقدارىنىڭ (10 μM، 100 μM ۋە 1 mM) LX-2 ھۈجەيرىلىرىگە زەھەرلىك ئەمەسلىكىنى ئىسپاتلىغان ئىدۇق [15]. بۇ تەتقىقاتتا 10 μM ۋە 100 μM دا IPA داۋالاش ئۇسۇلىنىڭ جانلىق ۋە نېكروزغا ئۇچرىغان ھۈجەيرىلەرنىڭ سانىنى ئاشۇرغانلىقى كۆرسىتىلدى. قانداقلا بولمىسۇن، كونترول گۇرۇپپىسى بىلەن سېلىشتۇرغاندا، ھۈجەيرىنىڭ جانلىقلىقى 1 mM IPA قويۇقلۇقىدا تۆۋەنلىگەن، ھۈجەيرە نېكروز نىسبىتى ئۆزگەرمىگەن (2A، B رەسىم). ئاندىن، LX-2 ھۈجەيرىلىرىدە ئاپپتوزنى قوزغىتىدىغان ئەڭ ياخشى قويۇقلۇقنى تېپىش ئۈچۈن، بىز 10 μM، 100 μM ۋە 1 mM IPA نى 24 سائەت سىناق قىلدۇق (2A-E رەسىم ۋە قوشۇمچە 3A-B رەسىم). قىزىقارلىقى شۇكى، IPA 10 μM ۋە 100 μM ئاپپتوز نىسبىتىنى (%) تۆۋەنلىتىۋەتكەن، ئەمما IPA 1 mM كونترول گۇرۇپپىسىغا سېلىشتۇرغاندا ئاخىرقى ئاپپتوز ۋە ئاپپتوز نىسبىتىنى (%) ئاشۇرغان، شۇڭا كېيىنكى سىناقلار ئۈچۈن تاللانغان (2A-D رەسىملەر).
IPA LX-2 ھۈجەيرىلىرىنىڭ ئاپپتوزنى قوزغىتىدۇ. ئېقىن سىتومېتىرىيەسى ئارقىلىق ئاپپتوز سۈرئىتى ۋە ھۈجەيرە مورفولوگىيەسىنى مىقدارلاشتۇرۇش ئۈچۈن Annexin V ۋە 7-AAD قوش بوياش ئۇسۇلى قوللىنىلدى. BA ھۈجەيرىلىرى 24 سائەت 10 μM، 100 μM ۋە 1 mM IPA بىلەن ياكى 24 سائەت قان زەردابىسىز مۇھىتتا F–H TGF-β1 (5 ng/ml) ۋە 1 mM IPA بىلەن ئىنۇباتسىيە قىلىندى. A: تىرىك ھۈجەيرىلەر (Annexin V -/ 7AAD-); B: نېكروزلانغان ھۈجەيرىلەر (Annexin V -/ 7AAD+); C, F: دەسلەپكى (Annexin V +/ 7AAD-); D, G: ئاخىرقى (Annexin V+/7AAD.+); E, H: ئاپپتوز سۈرئىتىدىكى دەسلەپكى ۋە ئاخىرقى ئاپپتوز ھۈجەيرىلىرىنىڭ ئومۇمىي نىسبىتى (%). سانلىق مەلۇماتلار ئوتتۇرىچە ± SD، n = 3 مۇستەقىل سىناق شەكلىدە ئىپادىلىنىدۇ. ستاتىستىكىلىق سېلىشتۇرۇشلار بىر تەرەپلىمە ANOVA بىلەن Bonferroni post hoc سىنىقى ئارقىلىق ئېلىپ بېرىلدى. *p < 0.05; ****p < 0.0001
ئىلگىرى كۆرسىتىپ ئۆتكىنىمىزدەك، 5 ng/ml TGF-β1 كلاسسىك ماركېر گېنلىرىنىڭ ئىپادىلىنىشىنى ئاشۇرۇش ئارقىلىق HSC نىڭ ئاكتىپلىشىشىنى قوزغىتالايدۇ [15]. LX-2 ھۈجەيرىلىرى 5 ng/ml TGF-β1 ۋە 1 mM IPA بىلەن بىرلەشتۈرۈلگەن (2E-H رەسىم). TGF-β1 بىلەن داۋالاش ئاپپتوز نىسبىتىنى ئۆزگەرتمىدى، قانداقلا بولمىسۇن، IPA بىلەن بىرلىكتە داۋالاش TGF-β1 بىلەن داۋالاشقا سېلىشتۇرغاندا، كېچىكىپ ئاپپتوز ۋە ئاپپتوز نىسبىتىنى (%) ئاشۇردى (2E-H رەسىم). بۇ نەتىجىلەر 1 mM IPA نىڭ TGF-β1 ئىندۇكسىيەسىدىن مۇستەقىل ھالدا LX-2 ھۈجەيرىلىرىدە ئاپپتوزنى ئىلگىرى سۈرەلەيدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.
بىز IPA نىڭ LX-2 ھۈجەيرىلىرىدىكى مىتوخوندىرىيە نەپەسلىنىشىگە بولغان تەسىرىنى تېخىمۇ چوڭقۇر تەكشۈردۇق. نەتىجىلەر شۇنى كۆرسەتتىكى، 1 mM IPA ئوكسىگېن سەرپ قىلىش نىسبىتى (OCR) پارامېتىرلىرىنى تۆۋەنلىتىدۇ: مىتوخوندىرىيەدىن باشقا نەپەسلىنىش، ئاساسىي ۋە ئەڭ يۇقىرى نەپەسلىنىش، پروتون ئېقىشى ۋە ATP ئىشلەپچىقىرىشنى كونترول گۇرۇپپىسىغا سېلىشتۇرغاندا (3A، B-رەسىم)، بىئوئېنېرگىيىلىك ساغلاملىق كۆرسەتكۈچى (BHI) ئۆزگەرمىدى.
IPA LX-2 ھۈجەيرىلىرىدە مىتوخوندىرىيە نەپەسلىنىشىنى ئازايتىدۇ. مىتوخوندىرىيە نەپەسلىنىش ئەگرى سىزىقى (OCR) مىتوخوندىرىيە نەپەسلىنىش پارامېتىرلىرى (مىتوخوندىرىيەسىز نەپەسلىنىش، ئاساسىي نەپەسلىنىش، ئەڭ يۇقىرى نەپەسلىنىش، پروتون ئېقىشى، ATP ھاسىل قىلىش، SRC ۋە BHI) سۈپىتىدە كۆرسىتىلىدۇ. A ۋە B ھۈجەيرىلىرى ئايرىم-ئايرىم ھالدا 10 μM، 100 μM ۋە 1 mM IPA بىلەن 24 سائەت ئىنكۇباتسىيە قىلىندى. C ۋە D ھۈجەيرىلىرى ئايرىم-ئايرىم ھالدا TGF-β1 (5 ng/ml) ۋە 1 mM IPA بىلەن قان زەردابىسىز مۇھىتتا 24 سائەت ئىنكۇباتسىيە قىلىندى. بارلىق ئۆلچەشلەر CyQuant ئۈسكۈنىسى ئارقىلىق DNA مىقدارىغا نورماللاشتۇرۇلدى. BHI: بىئوئېنېرگىيىلىك ساغلاملىق كۆرسەتكۈچى؛ SRC: نەپەس ئېلىش زاپاس سىغىمى؛ OCR: ئوكسىگېن سەرپىياتى. سانلىق مەلۇماتلار ئوتتۇرىچە ± ئۆلچەملىك چەتنىش (SD)، n = 5 مۇستەقىل سىناق سۈپىتىدە كۆرسىتىلدى. ستاتىستىكىلىق سېلىشتۇرۇشلار بىر تەرەپلىمە ANOVA ۋە Bonferroni post hoc سىنىقى ئارقىلىق ئېلىپ بېرىلدى. *p < 0.05; **p < 0.01; ۋە ***p < 0.001
IPA نىڭ TGF-β1 بىلەن ئاكتىپلاشتۇرۇلغان LX-2 ھۈجەيرىلىرىنىڭ بىئوئېنېرگىيىلىك پروفىلىغا بولغان تەسىرىنى تېخىمۇ ئومۇميۈزلۈك چۈشىنىش ئۈچۈن، بىز OCR ئارقىلىق مىتوخوندىرىيە ئوكسىدلىنىش فوسفورلىنىشىنى تەھلىل قىلدۇق (3C، D رەسىم). نەتىجىلەر شۇنى كۆرسەتتىكى، TGF-β1 بىلەن داۋالاش ئەڭ يۇقىرى نەپەس ئېلىش، نەپەس ئېلىش زاپاس سىغىمى (SRC) ۋە BHI نى كونترول گۇرۇپپىسىغا سېلىشتۇرغاندا تۆۋەنلىتىشى مۇمكىن (3C، D رەسىم). بۇنىڭدىن باشقا، بىرلەشتۈرۈلگەن داۋالاش ئاساسىي نەپەس ئېلىش، پروتون ئېقىشى ۋە ATP ئىشلەپچىقىرىشنى ئازايتتى، ئەمما SRC ۋە BHI TGF-β1 بىلەن داۋالانغانلارغا قارىغاندا كۆرۈنەرلىك يۇقىرى بولدى (3C، D رەسىم).
بىز يەنە Seahorse يۇمشاق دېتالى تەمىنلىگەن «ھۈجەيرە ئېنېرگىيەسى فېنوتىپ سىنىقى» نى ئېلىپ باردۇق (قوشۇمچە رەسىم 4A–D). قوشۇمچە رەسىم 3B دا كۆرسىتىلگەندەك، TGF-β1 داۋالىشىدىن كېيىن OCR ۋە ECAR مېتابولىزم پوتېنسىيالى تۆۋەنلىگەن، قانداقلا بولمىسۇن، بىرلەشتۈرۈلگەن ۋە IPA داۋالاش گۇرۇپپىلىرىدا كونترول گۇرۇپپىسىغا سېلىشتۇرغاندا پەرق كۆرۈلمىگەن. ئۇنىڭدىن باشقا، بىرلەشتۈرۈلگەن ۋە IPA داۋالىشىدىن كېيىن كونترول گۇرۇپپىسىغا سېلىشتۇرغاندا OCR نىڭ ئاساسىي ۋە بېسىم سەۋىيىسى تۆۋەنلىگەن (قوشۇمچە رەسىم 4C). قىزىقارلىقى شۇكى، بىرلەشتۈرۈلگەن داۋالاشتا ئوخشاش ئەھۋال كۆزىتىلگەن بولۇپ، TGF-β1 داۋالىشىغا سېلىشتۇرغاندا ECAR نىڭ ئاساسىي ۋە بېسىم سەۋىيىسىدە ھېچقانداق ئۆزگىرىش كۆرۈلمىگەن (قوشۇمچە رەسىم 4C). HSC لاردا، مىتوخوندىرىيە ئوكسىدلىنىش فوسفورلىنىشىنىڭ تۆۋەنلىشى ۋە بىرلەشتۈرۈلگەن داۋالاشنىڭ TGF-β1 داۋالىشىغا ئۇچرىغاندىن كېيىن SCR ۋە BHI نى ئەسلىگە كەلتۈرۈش ئىقتىدارى مېتابولىزم پوتېنسىيالىنى ئۆزگەرتمىگەن (OCR ۋە ECAR). بۇ نەتىجىلەرنى بىرلەشتۈرۈپ قارىغاندا، IPA نىڭ HSC دىكى بىئوئېنېرگىيەنى تۆۋەنلىتىشى مۇمكىنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ، بۇ IPA نىڭ HSC فېنوتىپىنى ئاكتىپسىزلىنىشقا قاراپ يۆتكىلىدىغان تۆۋەن ئېنېرگىيەلىك پروفىلنى پەيدا قىلىشى مۇمكىنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ (قوشۇمچە رەسىم 4D).
IPA نىڭ مىتوخوندىرىيە دىنامىكىسىغا بولغان تەسىرى مىتوخوندىرىيە مورفولوگىيەسى ۋە تور ئۇلىنىشىنىڭ ئۈچ ئۆلچەملىك مىقدارلاشتۇرۇشى، شۇنداقلا MTR بوياش ئۇسۇلى ئارقىلىق تەكشۈرۈلدى (4-رەسىم ۋە قوشۇمچە 5-رەسىم). 4-رەسىمدە كۆرسىتىلىشىچە، كونترول گۇرۇپپىسى بىلەن سېلىشتۇرغاندا، TGF-β1 داۋالاش ئوتتۇرىچە يۈزە كۆلىمى، تارماق سانى، ئومۇمىي تارماق ئۇزۇنلۇقى ۋە تارماق تۇتىشۇش سانىنى ئازايتقان (4A ۋە B-رەسىم) ۋە مىتوخوندىرىيەنىڭ نىسبىتىنى شار شەكىللىكتىن ئوتتۇرا شەكىللىككە ئۆزگەرتكەن (4C-رەسىم). پەقەت IPA داۋالاش كونترول گۇرۇپپىسى بىلەن سېلىشتۇرغاندا ئوتتۇرىچە مىتوخوندىرىيە ھەجىمىنى ئازايتقان ۋە مىتوخوندىرىيەنىڭ نىسبىتىنى شار شەكىللىكتىن ئوتتۇرا شەكىللىككە ئۆزگەرتكەن (4A-رەسىم). ئەكسىچە، مىتوخوندىرىيە پەردىسىنىڭ پوتېنسىيالىغا تايىنىدىغان MTR ئارقىلىق باھالانغان شار شەكىللىك، ئوتتۇرىچە تارماق ئۇزۇنلۇقى ۋە مىتوخوندىرىيە پائالىيىتى (4A ۋە E-رەسىم) ئۆزگەرمىگەن بولۇپ، بۇ پارامېتىرلار گۇرۇپپىلار ئارىسىدا پەرقلەنمىگەن. بۇ نەتىجىلەرنى بىرلەشتۈرۈپ ئېيتقاندا، TGF-β1 ۋە IPA داۋالاش تىرىك LX-2 ھۈجەيرىلىرىدىكى مىتوخوندىرىيە شەكلى ۋە چوڭلۇقىنى، شۇنداقلا تور مۇرەككەپلىكىنى تەڭشەيدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.
IPA LX-2 ھۈجەيرىلىرىدىكى مىتوخوندىرىيە دىنامىكىسى ۋە مىتوخوندىرىيە DNA موللۇقىنى ئۆزگەرتىدۇ. A. قان زەردابىسىز مۇھىتتا 24 سائەت TGF-β1 (5 ng/ml) ۋە 1 mM IPA بىلەن ئىنكۇباتسىيە قىلىنغان تىرىك LX-2 ھۈجەيرىلىرىنىڭ ۋەكىللىك كونفوكال رەسىملىرى، مىتوتوراكېر™ قىزىل CMXRos بىلەن بوялغان مىتوخوندىرىيە تورى ۋە DAPI بىلەن كۆك رەڭگە بوялغان يادرولارنى كۆرسىتىدۇ. بارلىق سانلىق مەلۇماتلار ھەر بىر گۇرۇپپىدا كەم دېگەندە 15 رەسىمنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ. بىز ھەر بىر ئۈلگە تىپى ئۈچۈن 10 Z-ئۈست رەسىمىنى ئالدۇق. ھەر بىر Z ئوقى تەرتىپى 30 پارچە، ھەر بىرىنىڭ قېلىنلىقى 9.86 μm. كۆلەم بالداق: 10 μm. B. رەسىمگە ماسلىشىشچان چەكلىمە قوللىنىش ئارقىلىق ئېنىقلانغان ۋەكىللىك ئوبيېكتلار (پەقەت مىتوخوندىرىيە). ھەر بىر گۇرۇپپىدىكى بارلىق ھۈجەيرىلەر ئۈچۈن مىتوخوندىرىيە مورفولوگىيەلىك تور ئۇلىنىشلىرىنى مىقدار جەھەتتىن تەھلىل قىلىش ۋە سېلىشتۇرۇش ئېلىپ بېرىلدى. C. مىتوخوندىرىيە شەكىل نىسبىتىنىڭ چاستوتىسى. 0 گە يېقىن قىممەتلەر شار شەكىللىرىنى، 1 گە يېقىن قىممەتلەر تالا شەكىللىرىنى كۆرسىتىدۇ. D مىتوخوندىرىيە DNA (mtDNA) نىڭ مىقدارى ماتېرىياللار ۋە ئۇسۇللار دا تەسۋىرلەنگەندەك بېكىتىلدى. E Mitotracker™ قىزىل CMXRos ئانالىزى «ماتېرىياللار ۋە ئۇسۇللار» دا تەسۋىرلەنگەندەك ئېقىم سىتومېتىرىيەسى (30،000 ۋەقە) ئارقىلىق ئېلىپ بېرىلدى. سانلىق مەلۇماتلار ئوتتۇرىچە قىممەت ± SD، n = 3 مۇستەقىل سىناق سۈپىتىدە كۆرسىتىلدى. ستاتىستىكىلىق سېلىشتۇرۇشلار بىر تەرەپلىمە ANOVA ۋە Bonferroni post hoc سىنىقى ئارقىلىق ئېلىپ بېرىلدى. *p < 0.05; **p < 0.01; ***p < 0.001; ****p < 0.0001
ئاندىن بىز LX-2 ھۈجەيرىلىرىدىكى mtDNA مىقدارىنى مىتوخوندىرىيە سانىنىڭ كۆرسەتكۈچى سۈپىتىدە تەھلىل قىلدۇق. كونترول گۇرۇپپىسى بىلەن سېلىشتۇرغاندا، TGF-β1 بىلەن داۋالانغان گۇرۇپپىدا mtDNA مىقدارى ئاشقان (4D-رەسىم). TGF-β1 بىلەن داۋالانغان گۇرۇپپىغا سېلىشتۇرغاندا، بىرلەشتۈرۈلگەن داۋالاش گۇرۇپپىسىدا mtDNA مىقدارى تۆۋەنلىگەن (4D-رەسىم)، بۇ IPA نىڭ mtDNA مىقدارىنى ۋە بەلكىم مىتوخوندىرىيە سانىنى، شۇنداقلا مىتوخوندىرىيە نەپەسلىنىشىنى ئازايتىشى مۇمكىنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ (3C-رەسىم). ئۇنىڭدىن باشقا، IPA بىرلەشتۈرۈلگەن داۋالاشتا mtDNA مىقدارىنى ئازايتقاندەك قىلىدۇ، ئەمما MTR ئارقىلىق مىتوخوندىرىيە پائالىيىتىگە تەسىر كۆرسەتمىدى (4A-C-رەسىملەر).
بىز IPA نىڭ LX-2 ھۈجەيرىلىرىدىكى فىبروز، ئاپپتوز، ياشاش ۋە مىتوخوندىرىيە دىنامىكىسى بىلەن مۇناسىۋەتلىك گېنلارنىڭ mRNA سەۋىيىسى بىلەن بولغان مۇناسىۋىتىنى تەكشۈردۇق (5A-D رەسىم). كونترول گۇرۇپپىسى بىلەن سېلىشتۇرغاندا، TGF-β1 بىلەن داۋالانغان گۇرۇپپىدا كوللاگېن I تىپلىق α2 زەنجىرى (COL1A2)، α-سىلىق مۇسكۇل ئاكتىن (αSMA)، ماترىكسا مېتاللوپروتېئىناز 2 (MMP2)، مېتاللوپروتېئىناز 1 نىڭ توقۇلما چەكلىگۈچىسى (TIMP1) ۋە دىنامىن 1 گە ئوخشاش گېن (DRP1) قاتارلىق گېنلارنىڭ ئىپادىلىنىشى ئاشقان، بۇ فىبروز ۋە ئاكتىپلىنىشنىڭ ئاشقانلىقىنى كۆرسىتىدۇ. بۇنىڭدىن باشقا، كونترول گۇرۇپپىسى بىلەن سېلىشتۇرغاندا، TGF-β1 بىلەن داۋالانغاندا يادرو ھامىلىدار X رېتسېپتورى (PXR)، كاسپاز 8 (CASP8)، MAPKAPK3، B ھۈجەيرىسى α نىڭ چەكلىگۈچىسى، يادرو ئامىلى κ گېنى يورۇقلۇق پېپتىدىنى كۈچەيتكۈچى (NFκB1A) ۋە يادرو ئامىلى κB كىنازا تارماق بىرلىكى β نىڭ چەكلىگۈچىسى (IKBKB) نىڭ mRNA سەۋىيىسى تۆۋەنلىگەن (5A-D رەسىم). TGF-β1 داۋالاش ئۇسۇلى بىلەن سېلىشتۇرغاندا، TGF-β1 ۋە IPA بىلەن بىرلەشتۈرۈلگەن داۋالاش COL1A2 ۋە MMP2 نىڭ ئىپادىسىنى تۆۋەنلىتىۋەتكەن، ئەمما PXR، TIMP1، B-ھۈجەيرە لىمفا راكى-2 (BCL-2)، CASP8، NFκB1A، NFκB1-β ۋە IKBKB نىڭ mRNA سەۋىيەسىنى ئۆستۈرگەن. IPA داۋالاش ئۇسۇلى MMP2، Bcl-2 بىلەن مۇناسىۋەتلىك ئاقسىل X (BAX)، AKT1، كۆرۈش ئاجىزلىقى ئاقسىلى 1 (OPA1) ۋە مىتوخوندىرىيە قوشۇلۇش ئاقسىلى 2 (MFN2) نىڭ ئىپادىسىنى كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە تۆۋەنلىتىۋەتكەن، ھالبۇكى CASP8، NFκB1A، NFκB1B ۋە IKBKB نىڭ ئىپادىسى كونترول گۇرۇپپىسىغا سېلىشتۇرغاندا ئاشقان. قانداقلا بولمىسۇن، كاسپاز-3 (CASP3)، ئاپپتوز پېپتىدازا ئاكتىپلاشتۇرۇش ئامىلى 1 (APAF1)، مىتوخوندىرىيە قوشۇلۇش ئاقسىلى 1 (MFN1) ۋە بۆلۈنۈش ئاقسىلى 1 (FIS1) نىڭ ئىپادىسىدە پەرق بايقالمىغان. بۇ نەتىجىلەر ئومۇمەن قىلىپ ئېيتقاندا، IPA داۋالاش ئۇسۇلىنىڭ فىبروز، ئاپپتوز، ياشاش ۋە مىتوخوندىرىيە دىنامىكىسى بىلەن مۇناسىۋەتلىك گېنلارنىڭ ئىپادىلىنىشىنى تەڭشەيدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. بىزنىڭ سانلىق مەلۇماتلىرىمىز IPA داۋالاش ئۇسۇلىنىڭ LX-2 ھۈجەيرىلىرىدىكى فىبروزنى ئازايتىدىغانلىقىنى؛ شۇنىڭ بىلەن بىر ۋاقىتتا، ئۇ فېنوتىپنى ئاكتىپسىزلىنىشقا يۆتكەش ئارقىلىق ياشاشنى ئىلگىرى سۈرىدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.
IPA LX-2 ھۈجەيرىلىرىدىكى فىبروبلاست، ئاپپتوز، ياشاش ئىقتىدارى ۋە مىتوخوندىرىيە دىنامىكىسى گېنلىرىنىڭ ئىپادىلىنىشىنى تەڭشەيدۇ. گىستوگراممىلار LX-2 ھۈجەيرىلىرى قان زەردابىسىز مۇھىتتا 24 سائەت TGF-β1 ۋە IPA بىلەن قوزغىتىلغاندىن كېيىن، ئىچكى كونترول (RPLP0 ياكى PPIA) غا نىسبەتەن mRNA ئىپادىلىنىشىنى كۆرسىتىدۇ. A فىبروبلاستلارنى، B ئاپپتوز ھۈجەيرىلىرىنى، C ھايات قالغان ھۈجەيرىلەرنى ۋە D مىتوخوندىرىيە دىنامىكىسى گېنىنىڭ ئىپادىلىنىشىنى كۆرسىتىدۇ. سانلىق مەلۇماتلار ئوتتۇرىچە ± ئۆلچەملىك چەتنىش (SD)، n = 3 مۇستەقىل سىناق سۈپىتىدە كۆرسىتىلدى. ستاتىستىكىلىق سېلىشتۇرۇشلار بىر تەرەپلىمە ANOVA ۋە Bonferroni post hoc سىنىقى ئارقىلىق ئېلىپ بېرىلدى. *p < 0.05; **p < 0.01; ***p < 0.001; ****p < 0.0001
ئاندىن، ھۈجەيرە چوڭلۇقىدىكى ئۆزگىرىشلەر (FSC-H) ۋە سىتوپلازما مۇرەككەپلىكى (SSC-H) ئېقىن سىتومېتىرىيەسى ئارقىلىق باھالاندى (6A، B-رەسىم)، IPA بىلەن داۋالاشتىن كېيىنكى ھۈجەيرە مورفولوگىيەسىدىكى ئۆزگىرىشلەر ئېلېكترون مىكروسكوپى (TEM) ۋە باسقۇچلۇق كونتراست مىكروسكوپى ئارقىلىق باھالاندى (قوشۇمچە رەسىم 6A-B). كۈتۈلگىنىدەك، TGF-β1 بىلەن داۋالانغان گۇرۇپپىدىكى ھۈجەيرىلەرنىڭ چوڭلۇقى كونترول گۇرۇپپىسىغا سېلىشتۇرغاندا چوڭايدى (6A، B-رەسىم)، بۇ قوپال ئېندوپلازما تور (ER*) ۋە فاگولىزوسوما (P) نىڭ كلاسسىك كېڭىيىشىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ، بۇ قان ھاسىل قىلىش ئاساسىي ھۈجەيرىسى (HSC) نىڭ ئاكتىپلىنىشىنى كۆرسىتىدۇ (قوشۇمچە رەسىم 6A). قانداقلا بولمىسۇن، TGF-β1 بىلەن داۋالانغان گۇرۇپپىغا سېلىشتۇرغاندا، TGF-β1 ۋە IPA بىرلەشتۈرۈلگەن داۋالاش گۇرۇپپىسىدا ھۈجەيرە چوڭلۇقى، سىتوپلازما مۇرەككەپلىكى (6A، B-رەسىم) ۋە ER* مىقدارى تۆۋەنلىدى (قوشۇمچە رەسىم 6A). بۇنىڭدىن باشقا، IPA داۋالاش ئۇسۇلى كونترول گۇرۇپپىسىغا سېلىشتۇرغاندا ھۈجەيرە چوڭلۇقى، سىتوپلازما مۇرەككەپلىكى (6A، B-رەسىملەر)، P ۋە ER* مىقدارىنى تۆۋەنلىتىۋەتكەن (قوشۇمچە 6A-رەسىم). بۇنىڭدىن باشقا، كونترول گۇرۇپپىسىغا سېلىشتۇرغاندا، ئاپپتوز ھۈجەيرىلىرىنىڭ مىقدارى 24 سائەت IPA داۋالاشتىن كېيىن ئاشقان (ئاق كۆرسەتكۈچلەر، قوشۇمچە 6B-رەسىم). بۇ نەتىجىلەر ئومۇمەن قىلىپ ئېيتقاندا، 1 mM IPA نىڭ HSC ئاپپتوزىنى قوزغىتىپ، TGF-β1 تەرىپىدىن قوزغىتىلغان ھۈجەيرە مورفولوگىيەلىك پارامېتىرلىرىدىكى ئۆزگىرىشلەرنى ئۆزگەرتەلەيدىغانلىقىنى، شۇ ئارقىلىق ھۈجەيرە چوڭلۇقى ۋە مۇرەككەپلىكىنى تەڭشەيدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ، بۇ HSC نىڭ ئاكتىپسىزلىنىشى بىلەن مۇناسىۋەتلىك بولۇشى مۇمكىن.
IPA LX-2 ھۈجەيرىلىرىدىكى ھۈجەيرە چوڭلۇقى ۋە سىتوپلازما مۇرەككەپلىكىنى ئۆزگەرتىدۇ. ئېقىم سىتومېتىرىيەسى ئانالىزىنىڭ ۋەكىللىك رەسىملىرى. ئانالىزدا LX-2 ھۈجەيرىلىرىگە خاس بولغان بىر خىل دەرۋازا ئىستراتېگىيىسى قوللىنىلدى: ھۈجەيرە توپىنى ئېنىقلاش ئۈچۈن SSC-A/FSC-A، قوش ھۈجەيرىلەرنى ئېنىقلاش ئۈچۈن FSC-H/FSC-A ۋە ھۈجەيرە چوڭلۇقى ۋە مۇرەككەپلىك ئانالىزى ئۈچۈن SSC-H/FSC-H. ھۈجەيرىلەر TGF-β1 (5 ng/ml) ۋە 1 mM IPA بىلەن قان زەردابىسىز سۇيۇقلۇقتا 24 سائەت ئىنكۇباتسىيە قىلىندى. LX-2 ھۈجەيرىلىرى ھۈجەيرە چوڭلۇقى ۋە سىتوپلازما مۇرەككەپلىك ئانالىزى ئۈچۈن تۆۋەنكى سول كۋادرانت (SSC-H-/FSC-H-)، ئۈستۈنكى سول كۋادرانت (SSC-H+/FSC-H-)، تۆۋەنكى ئوڭ كۋادرانت (SSC-H-/FSC-H+) ۋە ئۈستۈنكى ئوڭ كۋادرانت (SSC-H+/FSC-H+) غا تەقسىملەندى. B. ھۈجەيرە مورفولوگىيەسى FSC-H (ئالدىغا تارقىلىش، ھۈجەيرە چوڭلۇقى) ۋە SSC-H (يانغا تارقىلىش، سىتوپلازما مۇرەككەپلىكى) (30،000 ۋەقە) ئارقىلىق ئېقىم سىتومېتىرىيەسى ئارقىلىق تەھلىل قىلىندى. سانلىق مەلۇماتلار ئوتتۇرىچە ± SD، n = 3 مۇستەقىل سىناق شەكلىدە كۆرسىتىلدى. ستاتىستىكىلىق سېلىشتۇرۇشلار بىر تەرەپلىمە ANOVA ۋە Bonferroni post hoc سىنىقى ئارقىلىق ئېلىپ بېرىلدى. *p < 0.05; **p < 0.01; ***p < 0.001 ۋە ****p < 0.0001
IPA قاتارلىق ئۈچەي مېتابولىتلىرى تەتقىقاتنىڭ قىزىق تېمىسىغا ئايلاندى، بۇ ئۈچەي مىكروبيوتىسىدا يېڭى نىشانلارنىڭ بايقىلىشى مۇمكىنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. شۇڭا، بىز ئىنسانلاردا جىگەر تالالىشىشى بىلەن باغلىغان مېتابولىت IPA نىڭ [15] ھايۋانات مودېللىرىدا تالاغا قارشى تۇرۇش ئىقتىدارىغا ئىگە بىرىكمە ئىكەنلىكى كۆرسىتىلدى [13، 14]. بۇ يەردە، بىز تۇنجى قېتىم 2-تىپلىق دىئابېت (T2D) بولمىغان سېمىز كىشىلەرنىڭ قان زەردابى IPA بىلەن دۇنياۋى جىگەر ترانسكرىپتومىكىسى ۋە DNA مېتىللىنىشى ئوتتۇرىسىدىكى مۇناسىۋەتنى كۆرسىتىپ، ئاپپتوز، مىتوفاگىيە ۋە ئۇزۇن ئۆمۈر كۆرۈشنى، شۇنداقلا جىگەر گومېئوستازىنى تەڭشەيدىغان AKT1 گېنىنىڭ مۇمكىنلىكىنى كۆرسىتىپ بەردۇق. تەتقىقاتىمىزنىڭ يەنە بىر يېڭىلىقى شۇكى، بىز IPA داۋالاش ئۇسۇلىنىڭ ئاپپتوز، ھۈجەيرە مورفولوگىيەسى، مىتوخوندىرىيە بىئوئېنېرگىيىسى ۋە LX-2 ھۈجەيرىلىرىدىكى دىنامىكا بىلەن بولغان ئۆز-ئارا تەسىرىنى كۆرسىتىپ بەردۇق، بۇ HSC فېنوتىپىنى ئاكتىپسىزلىنىشقا قاراپ يۆتكىگەن تۆۋەن ئېنېرگىيە سپېكتىرىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ، IPA نى جىگەر تالالىشىشىنى ياخشىلاشتىكى مۇمكىن بولغان نامزاتقا ئايلاندۇرىدۇ.
بىز قان ئايلىنىش قان زەردابى IPA بىلەن مۇناسىۋەتلىك جىگەر گېنلىرى مول بولغان ئەڭ مۇھىم قانونلۇق يوللار ئاپپتوز، مىتوفاگىيە ۋە ئۇزۇن ئۆمۈر كۆرۈش ئىكەنلىكىنى بايقىدۇق. مىتوخوندىرىيە سۈپەت كونترول سىستېمىسىنىڭ بۇزۇلۇشى مىتوخوندىرىيە ئىقتىدارىنىڭ قالايمىقانلىشىشى، مىتوفاگىيە ۋە ئاپپتوزغا ئېلىپ كېلىپ، MASLD نىڭ پەيدا بولۇشىنى ئىلگىرى سۈرىدۇ [33، 34]. شۇڭا، بىز IPA نىڭ جىگەردە ئاپپتوز، مىتوفاگىيە ۋە ئۇزۇن ئۆمۈر كۆرۈش ئارقىلىق ھۈجەيرە دىنامىكىسى ۋە مىتوخوندىرىيە پۈتۈنلۈكىنى ساقلاشقا قاتنىشىشى مۇمكىن دەپ پەرەز قىلالايمىز. بىزنىڭ سانلىق مەلۇماتلىرىمىز ئۈچ خىل سىناقتا ئىككى گېننىڭ ئورتاق ئىكەنلىكىنى كۆرسەتتى: YKT6 ۋە AKT1. YKT6 نىڭ ھۈجەيرە پەردىسىنىڭ قوشۇلۇش جەريانىغا قاتنىشىدىغان SNARE ئاقسىلى ئىكەنلىكىنى ئالاھىدە تىلغا ئېلىشقا ئەرزىيدۇ. ئۇ ئاپتوفاگوسوما ئۈستىدە STX17 ۋە SNAP29 بىلەن باشلىنىش بىرىكمىسى ھاسىل قىلىش ئارقىلىق ئاپتوفاگىيە ۋە مىتوفاگىيەدە رول ئوينايدۇ، شۇ ئارقىلىق ئاپتوفاگوسوما ۋە لىزوسومانىڭ قوشۇلۇشىنى ئىلگىرى سۈرىدۇ [35]. بۇنىڭدىن باشقا، YKT6 نىڭ ئىقتىدارىنىڭ يوقىلىشى مىتوفاگىيەنىڭ ئاجىزلىشىشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ [36]، YKT6 نىڭ تەڭشىلىشى جىگەر راكىنىڭ (HCC) ئىلگىرىلىشى بىلەن مۇناسىۋەتلىك بولۇپ، ھۈجەيرىلەرنىڭ ياشاش نىسبىتىنىڭ ئېشىشىنى كۆرسىتىدۇ [37]. يەنە بىر تەرەپتىن، AKT1 ئەڭ مۇھىم ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسىتىدىغان گېن بولۇپ، PI3K/AKT سىگنال يولى، ھۈجەيرە دەۋرىيلىكى، ھۈجەيرە كۆچۈشى، كۆپىيىشى، مەركەزلىك چاپلىشىشى، مىتوخوندىرىيە ئىقتىدارى ۋە كوللاگېن ئاجرىلىپ چىقىشى قاتارلىق جىگەر كېسەللىكلىرىدە مۇھىم رول ئوينايدۇ [38-40]. ئاكتىپلانغان PI3K/AKT سىگنال يولى قان ھاسىل قىلىش ئاساسىي ھۈجەيرىلىرىنى (HSCs) ئاكتىپلاشتۇرالايدۇ، بۇ ھۈجەيرە سىرتقى ماترىكسا (ECM) ئىشلەپچىقىرىشقا مەسئۇل ھۈجەيرىلەر بولۇپ، ئۇنىڭ تەڭشىلىشىنىڭ قالايمىقانلىشىشى جىگەر تالالىشىشىنىڭ پەيدا بولۇشى ۋە ئىلگىرىلىشىگە تۆھپە قوشۇشى مۇمكىن [40]. بۇنىڭدىن باشقا، AKT p53 غا تايىنىدىغان ھۈجەيرە ئاپپتوزىنى چەكلەيدىغان ئاساسلىق ھۈجەيرە ياشاش ئامىللىرىنىڭ بىرى بولۇپ، AKT نىڭ ئاكتىپلىنىشى جىگەر ھۈجەيرىسى ئاپپتوزىنىڭ چەكلىنىشى بىلەن مۇناسىۋەتلىك بولۇشى مۇمكىن [41، 42]. قولغا كەلتۈرۈلگەن نەتىجىلەر IPA نىڭ جىگەر مىتوخوندىرىيەسى بىلەن مۇناسىۋەتلىك ئاپپتوزغا قاتنىشىشى مۇمكىنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ، چۈنكى بۇ جەرياندا جىگەر ھۈجەيرىلىرىنىڭ ئاپپتوزغا كىرىشى ياكى ياشاش ئارىلىقىدىكى قارارغا تەسىر كۆرسىتىشى مۇمكىن. بۇ تەسىرلەر جىگەرنىڭ گومېئوستازى ئۈچۈن مۇھىم بولغان AKT ۋە/ياكى YKT6 كاندىدات گېنلىرى تەرىپىدىن تەڭشىلىنىشى مۇمكىن.
بىزنىڭ نەتىجىلىرىمىز شۇنى كۆرسەتتىكى، 1 mM IPA TGF-β1 داۋالاش ئۇسۇلىدىن مۇستەقىل ھالدا LX-2 ھۈجەيرىلىرىدە ئاپپتوزنى كەلتۈرۈپ چىقىرىپ، مىتوخوندىرىيە نەپەسلىنىشىنى ئازايتىدۇ. ئاپپتوزنىڭ فىبروزنى ھەل قىلىش ۋە قان ھاسىل قىلىش ئاساسىي ھۈجەيرىسى (HSC) نىڭ ئاكتىپلىشىشىنىڭ ئاساسلىق يولى ئىكەنلىكى، شۇنداقلا جىگەر فىبروزىنىڭ ئەسلىگە كېلىدىغان فىزىئولوگىيىلىك ئىنكاسىدىكى مۇھىم ۋەقە ئىكەنلىكى دىققەت قىلىشقا ئەرزىيدۇ [4، 43]. ئۇنىڭدىن باشقا، بىرلەشتۈرۈلگەن داۋالاشتىن كېيىن LX-2 ھۈجەيرىلىرىدە BHI نىڭ ئەسلىگە كېلىشى، مىتوخوندىرىيە بىئو ئېنېرگىيەسىنى تەڭشەشتىكى IPA نىڭ يوشۇرۇن رولى توغرىسىدا يېڭى چۈشەنچىلەرنى بەردى. دەم ئېلىش ۋە ئاكتىپسىز شارائىتتا، قان ھاسىل قىلىش ھۈجەيرىلىرى ئادەتتە مىتوخوندىرىيە ئوكسىدلىنىش فوسفورلىنىشىدىن پايدىلىنىپ ATP ھاسىل قىلىدۇ ۋە ماددا ئالمىشىش پائالىيىتى تۆۋەن بولىدۇ. يەنە بىر تەرەپتىن، HSC نىڭ ئاكتىپلىشىشى مىتوخوندىرىيە نەپەسلىنىشى ۋە بىئوسىنتېزىنى كۈچەيتىپ، گلىكوزلىق ھالەتكە كىرىشنىڭ ئېنېرگىيە ئېھتىياجىنى تولۇقلايدۇ [44]. IPA نىڭ ماددا ئالمىشىش ئىقتىدارىغا ۋە ECAR غا تەسىر كۆرسەتمىگەنلىكى، گلىكوزلىق يولنىڭ ئانچە مۇھىم ئەمەسلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. شۇنىڭغا ئوخشاش، يەنە بىر تەتقىقاتتا 1 mM IPA نىڭ يۈرەك مىيوسىتسىتلىرى، ئىنسان جىگەر ھۈجەيرىسى ھۈجەيرە لىنىيىسى (Huh7) ۋە ئىنسان كىندىك تومۇر ئېندوتېلىي ھۈجەيرىلىرى (HUVEC) دىكى مىتوخوندىرىيە نەپەسلىنىش زەنجىرى پائالىيىتىنى تەڭشىيەلەيدىغانلىقى كۆرسىتىلدى؛ قانداقلا بولمىسۇن، IPA نىڭ يۈرەك مىيوسىتلىرىدىكى گلىكوزغا تەسىرى بايقالمىغان، بۇ IPA نىڭ باشقا ھۈجەيرە تىپلىرىنىڭ بىئوئېنېرگىيىسىگە تەسىر كۆرسىتىشى مۇمكىنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ [45]. شۇڭا، بىز 1 mM IPA نىڭ يېنىك خىمىيىلىك ئايرىغۇچ رولىنى ئوينايدىغانلىقىنى پەرەز قىلىمىز، چۈنكى ئۇ mtDNA مىقدارىنى ئۆزگەرتمەي تۇرۇپ، فىبروگېن گېن ئىپادىسى، ھۈجەيرە مورفولوگىيەسى ۋە مىتوخوندىرىيە بىئوئېنېرگىيىسىنى كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە تۆۋەنلىتىدۇ [46]. مىتوخوندىرىيە ئايرىغۇچلىرى مەدەنىيەت ئارقىلىق قوزغىتىلغان فىبروز ۋە HSC نىڭ ئاكتىپلىشىشىنى توسالايدۇ [47] ۋە ئايرىش ئاقسىلى (UCP) ياكى ئادېنىن نۇكلېئوتىد ترانسلوكازا (ANT) قاتارلىق بەزى ئاقسىللار تەرىپىدىن تەڭشىلىنىدىغان ياكى قوزغىتىلىدىغان مىتوخوندىرىيە ATP ئىشلەپچىقىرىشنى ئازايتالايدۇ. ھۈجەيرە تىپىغا ئاساسەن، بۇ ھادىسە ھۈجەيرىلەرنى ئاپپتوزدىن ساقلايدۇ ۋە/ياكى ئاپپتوزنى ئىلگىرى سۈرىدۇ [46]. قانداقلا بولمىسۇن، IPA نىڭ قان ھاسىل قىلىش ئاساسىي ھۈجەيرىسىنىڭ ئاكتىپسىزلىنىشىدىكى مىتوخوندىرىيە ئايرىغۇچ رولىنى ئېنىقلاش ئۈچۈن تېخىمۇ كۆپ تەتقىقاتلارغا ئېھتىياجلىق.
ئاندىن بىز مىتوخوندىرىيە نەپەسلىنىشىدىكى ئۆزگىرىشلەرنىڭ تىرىك LX-2 ھۈجەيرىلىرىدىكى مىتوخوندىرىيە مورفولوگىيەسىگە ئەكس ئەتكەن-ئەتمىگەنلىكىنى تەكشۈردۇق. قىزىقارلىقى شۇكى، TGF-β1 داۋالاش مىتوخوندىرىيە نىسبىتىنى شار شەكىللىكتىن ئوتتۇرا شەكىللىككە ئۆزگەرتىدۇ، مىتوخوندىرىيە تارماقلىنىشىنىڭ تۆۋەنلىشى ۋە مىتوخوندىرىيە بۆلۈنۈشىنىڭ مۇھىم ئامىلى بولغان DRP1 نىڭ ئىپادىلىنىشىنىڭ ئېشىشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ [48]. بۇنىڭدىن باشقا، مىتوخوندىرىيە پارچىلىنىشى ئومۇمىي تور مۇرەككەپلىكى بىلەن مۇناسىۋەتلىك، قوشۇلۇشتىن بۆلۈنۈشكە ئۆتۈش قان ھاسىل قىلىش ئاساسىي ھۈجەيرىسى (HSC) نىڭ ئاكتىپلىشىشى ئۈچۈن ئىنتايىن مۇھىم، مىتوخوندىرىيە بۆلۈنۈشىنىڭ چەكلىنىشى بولسا HSC ئاپپتوزىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ [49]. شۇڭا، بىزنىڭ نەتىجىلىرىمىز شۇنى كۆرسىتىپ بېرىدۇكى، TGF-β1 داۋالاش تارماقلىنىشنىڭ تۆۋەنلىشى بىلەن مىتوخوندىرىيە تورىنىڭ مۇرەككەپلىكىنى تۆۋەنلىتىشى مۇمكىن، بۇ ئاكتىپلانغان قان ھاسىل قىلىش ئاساسىي ھۈجەيرىسى (HSC) بىلەن مۇناسىۋەتلىك مىتوخوندىرىيە بۆلۈنۈشىدە كۆپ ئۇچرايدۇ. ئۇنىڭدىن باشقا، بىزنىڭ سانلىق مەلۇماتلىرىمىز IPA نىڭ مىتوخوندىرىيە نىسبىتىنى شار شەكىللىكتىن ئوتتۇرا شەكىلگە ئۆزگەرتەلەيدىغانلىقىنى، شۇنىڭ بىلەن OPA1 ۋە MFN2 نىڭ ئىپادىلىنىشىنى تۆۋەنلىتىشى مۇمكىنلىكىنى كۆرسەتتى. تەتقىقاتلار OPA1 نىڭ تۆۋەنلىشى مىتوخوندىرىيە پەردە پوتېنسىيالىنىڭ تۆۋەنلىشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىپ، ھۈجەيرە ئاپپتوزىنى قوزغىشى مۇمكىنلىكىنى كۆرسەتتى [50]. MFN2 نىڭ مىتوخوندىرىيەنىڭ بىرىكىشى ۋە ئاپپتوزنى ۋاسىتىچىلىك قىلىدىغانلىقى مەلۇم [51]. قولغا كەلتۈرۈلگەن نەتىجىلەر TGF-β1 ۋە/ياكى IPA تەرىپىدىن LX-2 ھۈجەيرىلىرىنىڭ قوزغىلىشى مىتوخوندىرىيەنىڭ شەكلى ۋە چوڭ-كىچىكلىكىنى، شۇنداقلا ئاكتىپلىنىش ھالىتى ۋە تورنىڭ مۇرەككەپلىكىنى تەڭشەيدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.
بىزنىڭ نەتىجىلىرىمىز شۇنى كۆرسىتىپ بېرىدۇكى، TGFβ-1 ۋە IPA نى بىرلەشتۈرۈپ داۋالاش ئارقىلىق، ئاپپتوزدىن قېچىۋاتقان ھۈجەيرىلەردە فىبروز، ئاپپتوز ۋە ياشاشقا مۇناسىۋەتلىك گېنلارنىڭ mRNA ئىپادىسىنى تەڭشەش ئارقىلىق mtDNA ۋە ھۈجەيرە مورفولوگىيەلىك پارامېتىرلىرىنى ئازايتقىلى بولىدۇ. ھەقىقەتەن، IPA AKT1 نىڭ mRNA ئىپادىسى سەۋىيەسىنى ۋە COL1A2 ۋە MMP2 قاتارلىق مۇھىم فىبروز گېنلىرى نىڭ ئىپادىسى سەۋىيەسىنى تۆۋەنلىتىۋەتكەن، ئەمما ئاپپتوز بىلەن مۇناسىۋەتلىك CASP8 نىڭ ئىپادىسى سەۋىيەسىنى ئاشۇرغان. بىزنىڭ نەتىجىلىرىمىز IPA داۋالاشتىن كېيىن، BAX ئىپادىسى تۆۋەنلىگەن ۋە TIMP1 ئائىلىسىدىكى تارماق بىرلىكلەر، BCL-2 ۋە NF-κB نىڭ mRNA ئىپادىسى ئاشقانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ، بۇ IPA نىڭ قان ھاسىل قىلىش ئاساسىي ھۈجەيرىلىرى (HSCs) دىكى ئاپپتوزدىن قېچىش سىگنالىنى قوزغىتالايدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. بۇ مولېكۇلالار ئاكتىپلاشتۇرۇلغان قان ھاسىل قىلىش ئاساسىي ھۈجەيرىلىرىدە ياشاش سىگنالى رولىنى ئوينايدۇ، بۇ ئاپپتوزغا قارشى ئاقسىللارنىڭ (مەسىلەن، Bcl-2) ئىپادىلىنىشىنىڭ ئېشىشى، ئاپپتوزغا قارشى BAX نىڭ ئىپادىلىنىشىنىڭ تۆۋەنلىشى ۋە TIMP بىلەن NF-κB ئوتتۇرىسىدىكى مۇرەككەپ ئۆزئارا تەسىر بىلەن مۇناسىۋەتلىك بولۇشى مۇمكىن [5، 7]. IPA ئۆز تەسىرىنى PXR ئارقىلىق كۆرسىتىدۇ، بىز TGF-β1 ۋە IPA بىلەن بىرلەشتۈرۈلگەن داۋالاشنىڭ PXR mRNA ئىپادىلىنىش سەۋىيەسىنى ئۆستۈرىدىغانلىقىنى، بۇ HSC ئاكتىپلىنىشىنىڭ باستۇرۇلغانلىقىنى كۆرسىتىدىغانلىقىنى بايقىدۇق. ئاكتىپلاشتۇرۇلغان PXR سىگنالىنىڭ تىرىك جانلىقلار ۋە تىرىك جانلىقلار شارائىتىدا HSC ئاكتىپلىنىشىنى توسىدىغانلىقى مەلۇم [52، 53]. بىزنىڭ نەتىجىلىرىمىز شۇنى كۆرسىتىپ بېرىدۇكى، IPA ئاپپتوزنى ئىلگىرى سۈرۈش، فىبروز ۋە مىتوخوندىرىيە ماددا ئالمىشىشىنى ئازايتىش ۋە ياشاش سىگنالىنى كۈچەيتىش ئارقىلىق ئاكتىپلاشتۇرۇلغان HSC لارنىڭ تازىلىنىشىغا قاتنىشىشى مۇمكىن، بۇلار ئاكتىپلاشتۇرۇلغان HSC فېنوتىپىنى ئاكتىپسىز ھالەتكە ئۆزگەرتىدىغان تىپىك جەريانلار. IPA نىڭ ئاپپتوزدىكى يوشۇرۇن مېخانىزمى ۋە رولىنىڭ يەنە بىر مۇمكىن بولغان چۈشەندۈرۈشى شۇكى، ئۇ ئاساسلىقى مىتوفاگىيە (ئىچكى يول) ۋە سىرتقى TNF سىگنال يولى (1-جەدۋەل) ئارقىلىق نورمالسىز مىتوخوندىرىيەنى تازىلايدۇ، بۇ يول بىۋاسىتە NF-κB ياشاش سىگنال يولى بىلەن باغلىنىدۇ (قوشۇمچە رەسىم 7). قىزىقارلىقى شۇكى، IPA بىلەن مۇناسىۋەتلىك مول گېنلار ئاپپتوز يولىدا ئاپپتوزنى ئىلگىرى سۈرىدىغان ۋە ياشاشنى ئىلگىرى سۈرىدىغان سىگناللارنى قوزغىتالايدۇ [54]، بۇ IPA نىڭ بۇ گېنلار بىلەن ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسىتىش ئارقىلىق ئاپپتوز يولىنى ياكى ياشاشنى قوزغىتالايدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. قانداقلا بولمىسۇن، IPA نىڭ HSC ئاكتىپلىنىشى جەريانىدا ئاپپتوزنى ياكى ياشاشنى قانداق قوزغىتالايدىغانلىقى ۋە ئۇنىڭ مېخانىزم يوللىرى ئېنىق ئەمەس.
IPA ئۈچەي مىكرو بىئولوگىيىسى ئارقىلىق يېمەكلىك تىرىپتوفاندىن ھاسىل بولغان مىكرو ئورگانىزىملىق مېتابولىت. تەتقىقاتلار شۇنى كۆرسەتتىكى، ئۇنىڭ ئۈچەي مۇھىتىدا ياللۇغ قايتۇرۇش، ئوكسىدلىنىشقا قارشى تۇرۇش ۋە ئېپىگېنېتىك تەڭشەش خۇسۇسىيىتىگە ئىگە. [55] تەتقىقاتلار شۇنى كۆرسەتتىكى، IPA ئۈچەينىڭ توسالغۇ ئىقتىدارىنى تەڭشەپ، ئوكسىدلىنىش سترېسىنى ئازايتالايدۇ، بۇ ئۇنىڭ يەرلىك فىزىئولوگىيىلىك تەسىرىگە تۆھپە قوشۇشى مۇمكىن. [56] ئەمەلىيەتتە، IPA قان ئايلىنىش ئارقىلىق نىشان ئەزالارغا يەتكۈزۈلىدۇ، IPA تىرىپتوفان، سېروتونىن ۋە ئىندول ھاسىلاتلىرى بىلەن ئوخشاش ئاساسلىق مېتابولىت قۇرۇلمىسىغا ئىگە بولغاچقا، IPA ماددا ئالمىشىش رولىنى ئوينايدۇ، نەتىجىدە ماددا ئالمىشىشتا رىقابەت پەيدا قىلىدۇ. [52] IPA تىرىپتوفاندىن ئېلىنغان مېتابولىتلار بىلەن ئېنزىم ياكى رېتسېپتورلارغا باغلىنىش ئورنى ئۈچۈن رىقابەتلىشىپ، نورمال ماددا ئالمىشىش يوللىرىغا توسقۇنلۇق قىلىشى مۇمكىن. بۇ ئۇنىڭ داۋالاش ۋاقتىنى ياخشىراق چۈشىنىش ئۈچۈن ئۇنىڭ فارماكوكىنېتىكىسى ۋە فارماكودىنامىكىسى توغرىسىدا تېخىمۇ كۆپ تەتقىقات ئېلىپ بېرىشنىڭ زۆرۈرلۈكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. [57] بۇنىڭ قان ھاسىل قىلىش ئاساسىي ھۈجەيرىلىرى (HSCs) دىمۇ يۈز بېرىشى مۇمكىن ياكى يوقلۇقىنى ھازىرغىچە كۆرۈش كېرەك.
بىز تەتقىقاتىمىزنىڭ بەزى چەكلىمىلىرى بارلىقىنى ئېتىراپ قىلىمىز. IPA بىلەن مۇناسىۋەتلىك مۇناسىۋەتلەرنى ئالاھىدە تەكشۈرۈش ئۈچۈن، بىز 2-تىپلىق دىئابېت كېسىلى (T2DM) بىمارلىرىنى چىقىرىۋەتتۇق. بىز بۇنىڭ بىزنىڭ بايقاشلىرىمىزنىڭ 2-تىپلىق دىئابېت كېسىلى ۋە ئېغىر جىگەر كېسىلى بىمارلىرىغا كەڭ دائىرىدە قوللىنىلىشىنى چەكلەيدىغانلىقىنى ئېتىراپ قىلىمىز. ئىنسان قان زەردابىدىكى IPA نىڭ فىزىئولوگىيىلىك قويۇقلۇقى 1-10 μM بولسىمۇ [11، 20]، ئەڭ يۇقىرى زەھەرلىك بولمىغان قويۇقلۇق [15] ۋە ئەڭ يۇقىرى ئاپپتوز نىسبىتىگە ئاساسەن 1 mM IPA قويۇقلۇقى تاللاندى، نېكروز ھۈجەيرە توپىنىڭ نىسبىتىدە پەرق يوق. بۇ تەتقىقاتتا IPA نىڭ سۇپرافىئولوگىيىلىك سەۋىيەسى ئىشلىتىلگەن بولسىمۇ، ھازىر IPA نىڭ ئۈنۈملۈك مىقدارى توغرىسىدا بىرلىككە كەلگەن قاراش يوق [52]. نەتىجىلىرىمىز مۇھىم بولسىمۇ، IPA نىڭ كەڭ دائىرىلىك ماددا ئالمىشىش تەقدىرى تەتقىقاتنىڭ ئاكتىپ ساھەسى بولۇپ قالماقتا. ئۇنىڭدىن باشقا، قان زەردابىدىكى IPA سەۋىيەسى بىلەن جىگەر كۆچۈرمىسىنىڭ DNA مېتىللىنىشى ئوتتۇرىسىدىكى مۇناسىۋەت توغرىسىدىكى بايقاشلىرىمىز پەقەت قان ھاسىل قىلىش ئاساسىي ھۈجەيرىلىرىدىن (HSCs)لا ئەمەس، بەلكى جىگەر توقۇلمىلىرىدىنمۇ ئېلىندى. بىز ئىلگىرىكى ترانسكرىپتوم ئانالىزىدىن ئېرىشكەن نەتىجىلىرىمىزگە ئاساسەن ئىنسان LX-2 ھۈجەيرىلىرىنى ئىشلىتىشنى تاللىدۇق، بۇ IPA نىڭ قان ھاسىل قىلىش ئاساسىي ھۈجەيرىسى (HSC) نىڭ ئاكتىپلىشىشى بىلەن مۇناسىۋەتلىك ئىكەنلىكى [15]، ھەمدە HSC لار جىگەر تالالىشىشىنىڭ ئىلگىرىلىشىگە قاتناشقان ئاساسلىق ھۈجەيرىلەر ئىكەنلىكى توغرىسىدا بايقاشلىرىمىزغا ئاساسلىنىپ [15]. جىگەر كۆپ خىل ھۈجەيرە تىپلىرىدىن تەركىب تاپقان، شۇڭا IPA نىڭ رولىنى ۋە ئۇنىڭ باشقا جىگەر ھۈجەيرە تىپلىرى بىلەن بولغان ئۆز-ئارا تەسىرىنى تەتقىق قىلىش ئۈچۈن، جىگەر ھۈجەيرىسى-HSC-ئىممۇنىتېت ھۈجەيرىسى بىرلىكتە يېتىشتۈرۈش سىستېمىسى، كاسپاز ئاكتىپلىشىشى ۋە DNA پارچىلىنىشى، شۇنداقلا ئاقسىل سەۋىيىسى قاتارلىق ھەرىكەت مېخانىزمى قاتارلىقلارنى ئويلىشىش كېرەك.