بۇ ماقالە «پۇرچاق ئۆسۈملۈكلىرىنىڭ كېسەللىك قوزغاتقۇچى ۋە زىيانداش ھاشاراتلارغا قارشى تۇرۇش كۈچىنى ئاشۇرۇش» تەتقىقات تېمىسىنىڭ بىر قىسمى بولۇپ، 5 ماقالىنىڭ ھەممىسىنى كۆرۈڭ.
زەمبۇرۇغ ئۆسۈملۈك كېسىلى نېكروزىنىڭ سەۋەبچىسى Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary ھەر خىل ساھىبخان ئۆسۈملۈكلەرگە يۇقۇملاندۇرۇش ئۈچۈن كۆپ قاتلاملىق ئىستراتېگىيە قوللىنىدۇ. بۇ تەتقىقاتتا، Pseudomonas sclerotiorum كەلتۈرۈپ چىقارغان ئاق رەڭلىك موگۇغا Phaseolus vulgaris L. نىڭ مولېكۇلا، فىزىئولوگىيىلىك ۋە بىئوخىمىيىلىك ئىنكاسىنى كۈچەيتىش ئۈچۈن، باشقا مۇھىم ئامىنو كىسلاتالارنىڭ سىنتېزىنى قوزغىتىدىغان ئاقسىل بولمىغان ئامىنو كىسلاتاسى دىئامىن L-ئورنىتىننى ئىشلىتىش تەۋسىيە قىلىنىدۇ. سىناق نەيچىسىدىكى تەجرىبىلەر شۇنى كۆرسەتتىكى، L-ئورنىتىن S. pyrenoidosa نىڭ مىتسېليال ئۆسۈشىنى مىقدارغا باغلىق ھالدا زور دەرىجىدە چەكلەيدۇ. ئۇنىڭدىن باشقا، ئۇ پارنىك شارائىتىدا ئاق رەڭلىك موگۇنىڭ ئېغىرلىق دەرىجىسىنى زور دەرىجىدە تۆۋەنلىتىشى مۇمكىن. ئۇنىڭدىن باشقا، L-ئورنىتىن بىر تەرەپ قىلىنغان ئۆسۈملۈكلەرنىڭ ئۆسۈشىنى قوزغىدى، بۇ سىناق قىلىنغان L-ئورنىتىننىڭ مىقدارىنىڭ بىر تەرەپ قىلىنغان ئۆسۈملۈكلەرگە ئۆسۈملۈك زەھەرلىك ئەمەسلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. بۇنىڭدىن باشقا، L-ئورنىتىن ئېنزىملىق بولمىغان ئوكسىدلىنىشقا قارشى تۇرغۇچىلارنىڭ (ئومۇمىي ئېرىيدىغان فېنوللار ۋە فلاۋونوئىدلار) ۋە ئېنزىملىق ئوكسىدلىنىشقا قارشى تۇرغۇچىلارنىڭ (كاتالازا (CAT)، پېروكسىدازا (POX) ۋە پولىفېنول ئوكسىدازا (PPO)) ئىپادىلىنىشىنى كۈچەيتتى، ھەمدە ئوكسىدلىنىشقا قارشى تۇرغۇچىلارغا مۇناسىۋەتلىك ئۈچ گېننىڭ (PvCAT1، PvSOD ۋە PvGR) ئىپادىلىنىشىنى ئاشۇردى. بۇنىڭدىن باشقا، كرېمنىي ئانالىزىدا S. sclerotiorum گېنومىدا ئوكسالوئاتسېتات ئاتسېتىلگىدرولازا (SsOAH) ئاقسىلىنىڭ بارلىقى بايقالدى، بۇ ئاقسىل فۇنكسىيە ئانالىزى، ساقلانغان دائىرە ۋە توپولوگىيە جەھەتتىن Aspergillus fijiensis (AfOAH) ۋە Penicillium sp. (PlOAH) نىڭ ئوكسالوئاتسېتات ئاتسېتىلگىدرولازا (SsOAH) ئاقسىلىغا ئىنتايىن ئوخشايدۇ. قىزىقارلىقى شۇكى، L-ئورنىتىننى كارتوپكا دېكستروزا شورپىسى (PDB) مۇھىتىغا قوشۇش S. sclerotiorum مىتسېلىيەسىدىكى SsOAH گېنىنىڭ ئىپادىلىنىشىنى كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە تۆۋەنلىتىۋەتتى. شۇنىڭغا ئوخشاش، L-ئورنىتىننى سىرتقى ئىشلىتىش داۋالانغان ئۆسۈملۈكلەردىن يىغىۋېلىنغان زەمبۇرۇغ مىتسېلىيەسىدە SsOAH گېنىنىڭ ئىپادىلىنىشىنى كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە تۆۋەنلىتىۋەتكەن. ئاخىرىدا، L-ئورنىتىننى ئىشلىتىش PDB مۇھىتى ۋە يۇقۇملانغان يوپۇرماقلاردا ئوكسالىك كىسلاتاسىنىڭ ئاجرىلىپ چىقىشىنى كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە تۆۋەنلىتىۋەتكەن. خۇلاسە قىلىپ ئېيتقاندا، L-ئورنىتىن يۇقۇملانغان ئۆسۈملۈكلەرنىڭ ئوكسىدلىنىش-قايتالىنىش ھالىتىنى ساقلاشتا، شۇنداقلا مۇداپىئە ئىنكاسىنى كۈچەيتىشتە مۇھىم رول ئوينايدۇ. بۇ تەتقىقاتنىڭ نەتىجىلىرى ئاق موگۇنى كونترول قىلىش ۋە ئۇنىڭ پۇرچاق ئىشلەپچىقىرىشى ۋە باشقا زىرائەتلەرگە بولغان تەسىرىنى ئازايتىش ئۈچۈن يېڭىلىق يارىتىشچان، مۇھىت ئاسرايدىغان ئۇسۇللارنى تەرەققىي قىلدۇرۇشقا ياردەم بېرىشى مۇمكىن.
ئاق موگۇ، نېكروتروفىك زەمبۇرۇغ Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary تەرىپىدىن كەلتۈرۈپ چىقىرىلغان بولۇپ، دۇنيا مىقياسىدا لوبيا (Phaseolus vulgaris L.) ئىشلەپچىقىرىشىغا ئېغىر تەھدىد سالىدىغان، مەھسۇلات مىقدارىنى تۆۋەنلىتىدىغان بىر خىل ۋەيران قىلغۇچ كېسەللىك (Bolton et al., 2006). Sclerotinia sclerotiorum تۇپراقتا تارقىلىدىغان زەمبۇرۇغ ئۆسۈملۈك پاتوگېنلىرىنىڭ بىرى بولۇپ، ئۇنىڭ كەڭ دائىرىلىك ساھىبجامال دائىرىسى 600 دىن ئارتۇق ئۆسۈملۈك تۈرىنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ ھەمدە ساھىبجامال توقۇلمىلىرىنى ئالاھىدە بولمىغان ئۇسۇلدا تېز سۈرئەتتە پارچىلاش ئىقتىدارىغا ئىگە (Liang and Rollins, 2018). ناچار شارائىتتا، ئۇ ھاياتلىق دەۋرىيلىكىنىڭ مۇھىم باسقۇچىنى باشتىن كەچۈرىدۇ، تۇپراقتا «sclerotia» دەپ ئاتىلىدىغان قارا، قاتتىق، ئۇرۇقسىمان قۇرۇلمىلار شەكلىدە ئۇزۇن مۇددەت ئۇيقۇ ھالىتىدە تۇرىدۇ ياكى يۇقۇملانغان ئۆسۈملۈكلەرنىڭ مىتسېلىي ياكى غولىدا ئاق، يۇمشاق ئۆسۈش شەكلىدە ئۆسىدۇ (Schwartz et al., 2005). S. sclerotiorum سكلېروتىيەنى ھاسىل قىلالايدۇ، بۇ ئۇنىڭ يۇقۇملانغان ئېتىزلاردا ئۇزۇن مۇددەت ياشىشىغا ۋە كېسەللىك مەزگىلىدە داۋاملىق ياشىشىغا شارائىت ھازىرلايدۇ (Schwartz et al., 2005). سكلېروتىيەنى ئوزۇقلۇق ماددىلارغا مول بولۇپ، تۇپراقتا ئۇزۇن مۇددەت ساقلىنىپ قالالايدۇ ھەمدە كېيىنكى يۇقۇملىنىشلارنىڭ ئاساسلىق ئوكۇلى بولۇپ خىزمەت قىلىدۇ (Schwartz et al., 2005). پايدىلىق شارائىتتا، سكلېروتىيەنى ئۈنۈپ، ھاۋادىكى سپورالارنى ھاسىل قىلىدۇ، بۇ سپورا ئۆسۈملۈكنىڭ يەر ئۈستىدىكى بارلىق قىسىملىرىغا، شۇ جۈملىدىن گۈل، غول ياكى دانچىلارغا يۇقۇملاندۇرالايدۇ (Schwartz et al., 2005).
Sclerotinia sclerotiorum ئۆزىنىڭ ساھىبخان ئۆسۈملۈكلىرىنى يۇقۇملاندۇرۇش ئۈچۈن كۆپ قاتلاملىق ئىستراتېگىيە قوللىنىدۇ، بۇ ئىسكلېروتىئال ئۈنۈشتىن تارتىپ ئالامەتلەرنىڭ تەرەققىي قىلىشىغىچە بولغان بىر قاتار ماسلاشتۇرۇلغان ۋەقەلەرنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ. دەسلەپتە، S. sclerotiorum ئاپوتېسىيە دەپ ئاتىلىدىغان موگۇغا ئوخشاش قۇرۇلمىلاردىن ئاسما سپورا (ئاسكوسپورا دەپ ئاتىلىدۇ) ئىشلەپچىقىرىدۇ، بۇلار ھاۋادا پەيدا بولۇپ، يۇقۇملانغان ئۆسۈملۈك قالدۇقلىرىدا ھەرىكەتسىز سكلېروتىياغا ئايلىنىدۇ (Bolton et al., 2006). ئاندىن موگۇ ئۆسۈملۈك ھۈجەيرە تېمىنىڭ pH قىممىتىنى كونترول قىلىش، ئېنزىملىق پارچىلىنىش ۋە توقۇلمىلارغا تاجاۋۇز قىلىشنى ئىلگىرى سۈرۈش (Hegedus and Rimmer, 2005) ۋە ساھىبخان ئۆسۈملۈكنىڭ ئوكسىدلىنىش پارتىلىشىنى باستۇرۇش ئۈچۈن زەھەرلىك ئامىل بولغان ئوكسالىك كىسلاتاسىنى ئاجرىتىپ چىقىرىدۇ. بۇ كىسلاتالىنىش جەريانى ئۆسۈملۈك ھۈجەيرە تېمىنى ئاجىزلاشتۇرۇپ، موگۇ ھۈجەيرە تېمىنى پارچىلايدىغان ئېنزىملارنىڭ (CWDEs) نورمال ۋە ئۈنۈملۈك ئىشلىشى ئۈچۈن پايدىلىق مۇھىت يارىتىپ بېرىدۇ، بۇ ئارقىلىق كېسەللىك قوزغاتقۇچىنىڭ فىزىكىلىق توسالغۇنى يېڭىپ، ساھىبخان توقۇلمىلىرىغا سىڭىپ كىرىشىگە يول قويىدۇ (Marciano et al., 1983). S. sclerotiorum بىر قېتىم سىڭىپ كىرگەندىن كېيىن، پولىگالاكتۇروناز ۋە سېللۇلازا قاتارلىق بىر قاتار CWDE لارنى ئاجرىتىپ چىقىرىدۇ، بۇلار يۇقۇملانغان توقۇلمىلاردا تارقىلىشىنى ئاسانلاشتۇرۇپ، توقۇلمىلارنىڭ نېكروزلىنىشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ. يارىلىنىش ۋە گىفال تۈۋرۈكلىرىنىڭ ئىلگىرىلىشى ئاق موگۇنىڭ خاراكتېرلىك ئالامەتلىرىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ (Hegedus ۋە Rimmer, 2005). بۇ ئارىدا، ساھىبخان ئۆسۈملۈكلەر شەكىل تونۇش رېتسېپتورلىرى (PRRs) ئارقىلىق پاتوگېن بىلەن مۇناسىۋەتلىك مولېكۇلا شەكىللىرىنى (PAMPs) تونۇپ، ئاخىرىدا مۇداپىئە ئىنكاسىنى ئاكتىپلاشتۇرىدىغان بىر قاتار سىگنال ۋەقەلىرىنى قوزغىتىدۇ.
ئون يىللار داۋاملاشقان كېسەللىكلەرنى كونترول قىلىش تىرىشچانلىقلىرىغا قارىماي، باشقا سودا زىرائەتلىرىدىكىگە ئوخشاش، كېسەللىك قوزغاتقۇچىنىڭ قارشىلىق كۆرسىتىشى، ياشاش ئىقتىدارى ۋە ماسلىشىشچانلىقى سەۋەبىدىن، لوبىيادا يېتەرلىك قارشىلىق كۆرسىتىدىغان گېرمپلازما كەمچىللىكى ساقلىنىپ كەلمەكتە. شۇڭا كېسەللىكلەرنى باشقۇرۇش ئىنتايىن قىيىن بولۇپ، مەدەنىيەت ئۇسۇللىرى، بىئولوگىيىلىك كونترول قىلىش ۋە خىمىيىلىك زەمبۇرۇغقا قارشى دورىلارنى بىرلەشتۈرۈشنى ئۆز ئىچىگە ئالغان بىر گەۋدىلەشكەن، كۆپ قىرلىق ئىستراتېگىيە تەلەپ قىلىدۇ (O'Sullivan et al., 2021). ئاق موگۇغا قارشى خىمىيىلىك كونترول قىلىش ئەڭ ئۈنۈملۈك، چۈنكى زەمبۇرۇغقا قارشى دورىلار توغرا ۋە توغرا ۋاقىتتا قوللىنىلغاندا، كېسەللىكنىڭ تارقىلىشىنى ئۈنۈملۈك كونترول قىلالايدۇ، يۇقۇملىنىشنىڭ ئېغىرلىق دەرىجىسىنى ئازايتىدۇ ۋە مەھسۇلات زىيىنىنى ئەڭ تۆۋەن چەككە چۈشۈرەلەيدۇ. قانداقلا بولمىسۇن، زەمبۇرۇغقا قارشى دورىلارنى ئارتۇقچە ئىشلىتىش ۋە ئۇلارغا ئارتۇقچە تايىنىش S. sclerotiorum نىڭ قارشىلىق كۆرسىتىدىغان تۈرلىرىنىڭ پەيدا بولۇشىغا سەۋەب بولۇپ، نىشان بولمىغان ئورگانىزملار، تۇپراقنىڭ ساغلاملىقى ۋە سۇ سۈپىتىگە سەلبىي تەسىر كۆرسىتىدۇ (Le Cointe et al., 2016; Ceresini et al., 2024). شۇڭا، مۇھىت ئاسرايدىغان ئالماشتۇرۇشلارنى تېپىش ئەڭ مۇھىم ۋەزىپە بولۇپ قالدى.
پولىئامىنلار (PA)، مەسىلەن، پۇترېسسىن، سپېرمىدىن، سپېرمىن ۋە كاداۋېرىن، تۇپراق ئارقىلىق تارقىلىدىغان ئۆسۈملۈك پاتوگېنلىرىغا قارشى ئۈمىدۋار ئالماشتۇرۇش رولىنى ئوينايدۇ، شۇ ئارقىلىق خەتەرلىك خىمىيىلىك زەمبۇرۇغقا قارشى دورىلارنىڭ ئىشلىتىلىشىنى پۈتۈنلەي ياكى قىسمەن ئازايتىدۇ (Nehela قاتارلىقلار، 2024؛ Yi قاتارلىقلار، 2024). يۇقىرى دەرىجىلىك ئۆسۈملۈكلەردە، PA لار ھۈجەيرە بۆلۈنۈشى، پەرقلىنىشى ۋە ئابىئوتىك ۋە بىئوتىك بېسىملارغا بولغان ئىنكاسى قاتارلىق نۇرغۇن فىزىئولوگىيىلىك جەريانلارغا قاتنىشىدۇ (Killiny ۋە Nehela، 2020). ئۇلار ئوكسىدلىنىشقا قارشى تۇرۇش رولىنى ئوينايدۇ، ئاكتىپ ئوكسىگېن تۈرلىرىنى (ROS) تازىلاشقا ياردەم بېرىدۇ، ئوكسىگېننىڭ ئوكسىگېندىن ساقلىنىش ھالىتىنى ساقلايدۇ (Nehela ۋە Killiny, 2023)، مۇداپىئەگە مۇناسىۋەتلىك گېنلارنى قوزغىتىدۇ (Romero قاتارلىقلار، 2018)، ھەر خىل ماددا ئالمىشىش يوللىرىنى تەڭشەيدۇ (Nehela ۋە Killiny, 2023)، ئىچكى ئۆسۈملۈك ھورمونلىرىنى تەڭشەيدۇ (Nehela ۋە Killiny, 2019)، سىستېمىلىق قارشىلىق كۆرسىتىشنى (SAR) تۇرغۇزىدۇ ۋە ئۆسۈملۈك-پاتوگېن ئۆزئارا تەسىرىنى تەڭشەيدۇ (Nehela ۋە Killiny, 2020; Asija قاتارلىقلار، 2022; Czerwoniec, 2022). شۇنىڭغا دىققەت قىلىشقا ئەرزىيدۇكى، ئۆسۈملۈكلەرنىڭ مۇداپىئەسىدىكى PA نىڭ كونكرېت مېخانىزمى ۋە رولى ئۆسۈملۈك تۈرلىرى، پاتوگېنلار ۋە مۇھىت شارائىتىغا ئاساسەن ئوخشىمايدۇ. ئۆسۈملۈكلەردە ئەڭ كۆپ ئۇچرايدىغان PA مۇھىم پولىئامىن L-ئورنىتىندىن بىئوسىنتېزلىنىدۇ (Killiny ۋە Nehela, 2020).
L-ئورنىتىن ئۆسۈملۈكلەرنىڭ ئۆسۈشى ۋە تەرەققىياتىدا كۆپ خىل رول ئوينايدۇ. مەسىلەن، ئىلگىرىكى تەتقىقاتلاردا گۈرۈچتە (Oryza sativa) ئورنىتىننىڭ ئازوتنى قايتا ئىشلىتىش (Liu قاتارلىقلار، 2018)، گۈرۈچ ھوسۇلى، سۈپىتى ۋە خۇش پۇراق (Lu قاتارلىقلار، 2020) ۋە سۇ بېسىمىغا بولغان ئىنكاس (Yang قاتارلىقلار، 2000) بىلەن مۇناسىۋەتلىك بولۇشى مۇمكىنلىكى كۆرسىتىلگەن. بۇنىڭدىن باشقا، L-ئورنىتىننىڭ سىرتقى ئىشلىتىلىشى شېكەر قىزىلچىسى (Beta vulgaris) نىڭ قۇرغاقچىلىققا چىدامچانلىقىنى كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە ئاشۇرغان (Hussein قاتارلىقلار، 2019) ۋە پىياز (Allium Cepa) (Çavuşoǧlu ۋە Çavuşoǧlu، 2021) ۋە كاجۇ (Anacardium occidentale) ئۆسۈملۈكلىرىدىكى تۇز بېسىمىنى يېنىكلەتكەن (da Rocha قاتارلىقلار، 2012). L-ئورنىتىننىڭ ئابىئوتىك بېسىمدىن ساقلىنىشتىكى رولى، ئۇنىڭ بىر تەرەپ قىلىنغان ئۆسۈملۈكلەردە پرولىننىڭ توپلىنىشىغا قاتنىشىشى بىلەن مۇناسىۋەتلىك بولۇشى مۇمكىن. مەسىلەن، ئورنىتىن دېلتا ئامىنوترانسفېرازا (دېلتا-OAT) ۋە پرولىن دېھىدروگېنازا (ProDH1 ۋە ProDH2) گېنى قاتارلىق پرولىن مېتابولىزمىغا مۇناسىۋەتلىك گېنلارنىڭ ئىلگىرى Nicotiana benthamiana ۋە Arabidopsis thaliana نىڭ ساھىبخان بولمىغان Pseudomonas syringae تۈرلىرىدىن ساقلىنىشىغا قاتنىشىدىغانلىقى خەۋەر قىلىنغان (Senthil-Kumar ۋە Mysore, 2012). يەنە بىر تەرەپتىن، زەمبۇرۇغ ئورنىتىن دېكاربوكسىلازا (ODC) پاتوگېننىڭ ئۆسۈشى ئۈچۈن زۆرۈر (Singh et al., 2020). ساھىبخان تەرىپىدىن قوزغىتىلغان گېننى ئۆچۈرۈش (HIGS) ئارقىلىق Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici نىڭ ODC نى نىشان قىلىش پەمىدۇر ئۆسۈملۈكلىرىنىڭ Fusarium سولىشىش كېسىلىگە قارشى تۇرۇش كۈچىنى كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە ئاشۇردى (Singh et al., 2020). قانداقلا بولمىسۇن، سىرتقى ئورنىتىننى ئىشلىتىشنىڭ ئۆسۈملۈك كېسەللىكلىرىگە ئوخشاش بىئوتىك بېسىملارغا قارشى تۇرۇشتىكى يوشۇرۇن رولى ياخشى تەتقىق قىلىنمىغان. ئەڭ مۇھىمى، ئورنىتىننىڭ كېسەللىككە قارشى تۇرۇش كۈچىگە ۋە ئۇنىڭغا مۇناسىۋەتلىك بىئوخىمىيىلىك ۋە فىزىئولوگىيىلىك ھادىسىلەرگە بولغان تەسىرى ھازىرغىچە ئاساسەن تەتقىق قىلىنمىغان.
پۇرچاق ئۆسۈملۈكلىرىنىڭ S. sclerotiorum يۇقۇملىنىشىنىڭ مۇرەككەپلىكىنى چۈشىنىش ئۈنۈملۈك كونترول قىلىش ئىستراتېگىيىسىنى تەرەققىي قىلدۇرۇشتا مۇھىم ئەھمىيەتكە ئىگە. بۇ تەتقىقاتتا، بىز دىئامىن L-ئورنىتىننىڭ پۇرچاق ئۆسۈملۈكلىرىنىڭ مۇداپىئە مېخانىزمى ۋە Sclerotinia sclerotiorum يۇقۇملىنىشىغا قارشى تۇرۇش كۈچىنى ئاشۇرۇشتىكى مۇھىم ئامىل سۈپىتىدە رولىنى ئېنىقلاشنى مەقسەت قىلدۇق. بىز يۇقۇملانغان ئۆسۈملۈكلەرنىڭ مۇداپىئە ئىنكاسىنى كۈچەيتىشتىن باشقا، L-ئورنىتىننىڭ ئوكسىدلىنىش-قايتا ئۇرۇش ھالىتىنى ساقلاشتا مۇھىم رول ئوينايدىغانلىقىنى پەرەز قىلىمىز. بىز L-ئورنىتىننىڭ مۇمكىن بولغان تەسىرى ئېنزىملىق ۋە ئېنزىملىق بولمىغان ئوكسىدلىنىشقا قارشى تۇرۇش مۇداپىئە مېخانىزمىنى تەڭشەش ۋە زەمبۇرۇغنىڭ كېسەللىك پەيدا قىلىش كۈچى / زەھەرلىكلىك ئامىللىرى ۋە مۇناسىۋەتلىك ئاقسىللارغا توسقۇنلۇق قىلىش بىلەن مۇناسىۋەتلىك دەپ قارايمىز. L-ئورنىتىننىڭ بۇ قوش ئىقتىدارى ئۇنى ئاق موگۇنىڭ تەسىرىنى ئازايتىش ۋە ئادەتتىكى پۇرچاق زىرائەتلىرىنىڭ بۇ كۈچلۈك زەمبۇرۇغ پاتوگېنىغا قارشى تۇرۇش كۈچىنى ئاشۇرۇش ئۈچۈن ئىمكانقەدەر ياخشى ئىستراتېگىيىگە ئايلاندۇرىدۇ. بۇ تەتقىقاتنىڭ نەتىجىلىرى ئاق موگۇنى كونترول قىلىش ۋە ئۇنىڭ پۇرچاق ئىشلەپچىقىرىشىغا بولغان تەسىرىنى ئازايتىش ئۈچۈن يېڭىلىق يارىتىشچان، مۇھىت ئاسرايدىغان ئۇسۇللارنى تەرەققىي قىلدۇرۇشقا ياردەم بېرىشى مۇمكىن.
بۇ تەتقىقاتتا، ئادەتتىكى لوبىيانىڭ سەزگۈر سودا تۈرى بولغان Giza 3 (Phaseolus vulgaris L. cv. Giza 3) تەجرىبە ماتېرىيالى سۈپىتىدە ئىشلىتىلدى. ساغلام ئۇرۇقلار مىسىر دېھقانچىلىق تەتقىقات مەركىزى (ARC) نىڭ دالا زىرائەتلىرى تەتقىقات ئىنستىتۇتى (FCRI) نىڭ لوبىيا تەتقىقات بۆلۈمى تەرىپىدىن تەمىنلەندى. بەش ئۇرۇق S. sclerotiorum يۇقۇملانغان تۇپراق بىلەن تولدۇرۇلغان سۇلياۋ قاچىلارغا (ئىچكى دىئامېتىرى 35 سانتىمېتىر، چوڭقۇرلۇقى 50 سانتىمېتىر) پارنىك شارائىتىدا (25 ± 2 سېلسىيە گرادۇس، نىسپىي نەملىك 75 ± 1%، 8 سائەت يورۇقلۇق/16 سائەت قاراڭغۇ) سېپىلدى. سېپىلگەندىن كېيىنكى 7-10 كۈن (DPS)، ھەر بىر قاچىدا پەقەت ئىككى خىل تەكشى ئۆسكەن ۋە ئۈچ دانە تولۇق ئېچىلغان يوپۇرماق قالدۇرۇلغۇدەك قىلىپ، مايسا نېپىزلىتىلدى. بارلىق قازان ئۆسۈملۈكلىرى ھەر ئىككى ھەپتىدە بىر قېتىم سۇغىرىلدى ۋە بېرىلگەن سورت ئۈچۈن تەۋسىيە قىلىنغان مىقداردا ئايلىق ئوغۇت بېرىلدى.
500 مىللىگرام/لىتىرلىق L-ئورنىتىندىئامىن (يەنە (+)-(S)-2,5-دىئامىنوپېنتانوئىك كىسلاتا دەپمۇ ئاتىلىدۇ؛ سىگما-ئالدرىچ، دارمشتادت، گېرمانىيە) قويۇقلۇقىنى تەييارلاش ئۈچۈن، ئالدى بىلەن 50 مىللىگرام 100 مىللىلىتىر ستېرىللىق ستېرىللىق سۇدا ئېرىتىلدى. ئاندىن زاپاس ئېرىتمە سۇيۇقلاندۇرۇلۇپ، كېيىنكى سىناقلاردا ئىشلىتىلدى. قىسقىسى، ئالتە يۈرۈش L-ئورنىتىن قويۇقلۇقى (12.5، 25، 50، 75، 100 ۋە 125 مىللىگرام/لىتىر) سىناق قىلىندى. بۇنىڭدىن باشقا، ستېرىللىق ستېرىللىق سۇ مەنپىي كونترول (Mock) سۈپىتىدە ئىشلىتىلدى ۋە سودا خاراكتېرلىك زەمبۇرۇغقا قارشى دورى «Rizolex-T» 50% ھۆللىنىشچان پاراشوك (توكلوفوس-مېتىل 20% + تىرام 30%؛ KZ-Kafr El Zayat Pesticides and Chemicals Company, Kafr El Zayat, Gharbia ۋالىيلىقى, مىسىر) مۇسبەت كونترول سۈپىتىدە ئىشلىتىلدى. سودا خاراكتېرلىك زەمبۇرۇغقا قارشى دورى «Rizolex-T» بەش خىل قويۇقلۇقتا (2، 4، 6، 8 ۋە 10 mg/L) سىناق قىلىندى.
ئاق رەڭلىك موگۇنىڭ تىپىك ئالامەتلىرىنى كۆرسىتىدىغان ئادەتتىكى لوبيا غولى ۋە پۇرچاقلىرىنىڭ ئۈلگىلىرى (زىيانلىنىش نىسبىتى: 10-30%) سودا دېھقانچىلىق مەيدانلىرىدىن توپلانغان. يۇقۇملانغان ئۆسۈملۈك ماتېرىياللىرىنىڭ كۆپىنچىسى تۈر/سورت بويىچە ئېنىقلانغان بولسىمۇ (سېزىمچان سودا سورتى گىزا 3)، باشقالىرى، بولۇپمۇ يەرلىك بازارلاردىن ئېلىنغانلىرى نامەلۇم تۈرلەردىن ئىدى. توپلانغان يۇقۇملانغان ماتېرىياللار ئالدى بىلەن 0.5% ناترىي گىپوخلورىت ئېرىتمىسى بىلەن 3 مىنۇت يۈزەكى دېزىنفېكسىيە قىلىندى، ئاندىن بىر قانچە قېتىم ستېرىللىق دىستىللانغان سۇ بىلەن چايقالدى ۋە ئارتۇق سۇنى چىقىرىۋېتىش ئۈچۈن ستېرىللىق فىلتىر قەغىزى بىلەن سۈرتۈلۈپ قۇرۇتۇلدى. ئاندىن يۇقۇملانغان ئەزالار ئوتتۇرا توقۇلمىلاردىن (ساغلام ۋە يۇقۇملانغان توقۇلمىلار ئارىسىدىن) كىچىك پارچىلارغا بۆلۈنۈپ، كارتوشكا دېكستروزا ئاگارى (PDA) مۇھىتىدا يېتىشتۈرۈلۈپ، 25 ± 2 سېلسىيە گرادۇستا 12 سائەت يورۇقلۇق/12 سائەت قاراڭغۇ دەۋرىيلىكتە 5 كۈن سكلېروتىيا شەكىللىنىشىنى قوزغىتىش ئۈچۈن ئىنكۇباتسىيە قىلىندى. مىتسېلىيە ئۇچى ئۇسۇلى ئارىلاشما ياكى بۇلغانغان مەدەنىيەتلەردىن موگۇ ئايرىملىرىنى تازىلاش ئۈچۈنمۇ ئىشلىتىلدى. تازىلانغان زەمبۇرۇغ ئايرىمىسى ئالدى بىلەن ئۇنىڭ مەدەنىيەت مورفولوگىيەلىك ئالاھىدىلىكىگە ئاساسەن ئېنىقلاندى، ئاندىن مىكروسكوپتىكى ئالاھىدىلىكلەرگە ئاساسەن S. sclerotiorum ئىكەنلىكى جەزملەشتۈرۈلدى. ئاخىرىدا، بارلىق تازىلانغان ئايرىمىلار كوچنىڭ پوزىتسىيەسىگە ماس كېلىدىغان سەزگۈر ئادەتتىكى لوبيا تۈرى Giza 3 دە كېسەللىك پەيدا قىلىش دەرىجىسى تەكشۈرۈلدى.
بۇنىڭدىن باشقا، ئەڭ تاجاۋۇزچان S. sclerotiorum ئايرىمىسى (3-ئايرىلما) White قاتارلىقلار، 1990؛ Baturo-Ciesniewska قاتارلىقلار، 2017-يىلى تەسۋىرلىگەندەك، ئىچكى ترانسكرىپسىيە قىلىنغان بوشلۇق (ITS) تەرتىپىگە ئاساسەن تېخىمۇ دەلىللەندى. قىسقىسى، ئايرىمىلار كارتوپكا دېكستروزا شورپىسىدا (PDB) يېتىشتۈرۈلۈپ، 25 ± 2 سېلسىيە گرادۇستا 5-7 كۈن تۇرغۇزۇلدى. ئاندىن زەمبۇرۇغ مىتسېلىيى يىغىۋېلىنىپ، پىشلاق رەخت ئارقىلىق سۈزۈلۈپ، ئىككى قېتىم ستېرىللىق سۇ بىلەن يۇيۇلۇپ، ستېرىللىق سۈزگۈچ قەغەز بىلەن قۇرۇتۇلدى. گېنوم DNAسى Quick-DNA™ زەمبۇرۇغ/باكتېرىيە Miniprep Kit (Kuramae-Izioka، 1997؛ Atallah قاتارلىقلار، 2022، 2024) ئارقىلىق ئايرىۋېلىندى. ئاندىن ITS rDNA رايونى ITS1/ITS4 (TCCGTAGGTGAACCTGCGG TCCTCCGCTTATTGATGC؛ مۆلچەرلەنگەن چوڭلۇقى: 540 bp) ئارقىلىق كۈچەيتىلدى (Baturo-Ciesniewska قاتارلىقلار، 2017). تازىلانغان PCR مەھسۇلاتلىرى تەرتىپكە سېلىشقا تاپشۇرۇلدى (بېيجىڭ Aoke Dingsheng Biotechnology Co., Ltd.). ITS rDNA تەرتىپلىرى Sanger تەرتىپكە سېلىش ئۇسۇلى ئارقىلىق قوش يۆنىلىشلىك تەرتىپكە سېلىندى. ئاندىن يىغىلغان سوئال تەرتىپلىرى BLASTn يۇمشاق دېتالى ئارقىلىق GenBank ۋە دۆلەتلىك بىئوتېخنىكا ئۇچۇر مەركىزى (NCBI, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/) دىكى ئەڭ يېڭى سانلىق مەلۇماتلار بىلەن سېلىشتۇرۇلدى. سوئال تىزىملىكى NCBI GenBank دىكى ئەڭ يېڭى سانلىق مەلۇماتلاردىن (قوشۇمچە جەدۋەل S1) ئېلىنغان باشقا 20 S. sclerotiorum تۈرى/ئىزولاتى بىلەن مولېكۇلا تەرەققىيات گېنېتىكىسى ئانالىز پاكىتى (MEGA-11; نەشرى 11) دىكى ClustalW ئارقىلىق سېلىشتۇرۇلدى (Kumar et al., 2024). تەرەققىيات ئانالىزى ئەڭ چوڭ ئېھتىماللىق ئۇسۇلى ۋە ئادەتتىكى ۋاقىتقا قاراپ قايتىدىغان نۇكلېئوتىد ئورنىنى ئېلىش مودېلى (Nei and Kumar, 2000) ئارقىلىق ئېلىپ بېرىلدى. ئەڭ يۇقىرى لوگارىكا ئېھتىماللىقىغا ئىگە دەرەخ كۆرسىتىلدى. ئېۋرىستىك ئىزدەش ئۈچۈن دەسلەپكى دەرەخ قوشنا ئۇلىنىش (NJ) دەرەخ (Kumar et al., 2024) بىلەن ئەڭ چوڭ پارازىمونىيە (MP) دەرەخ ئارىلىقىدىكى لوگارىكا ئېھتىماللىقى يۇقىرى دەرەخنى تاللاش ئارقىلىق تاللىنىدۇ. NJ دەرەخ ئادەتتىكى ۋاقىتقا قاراپ قايتىدىغان مودېل (Nei and Kumar, 2000) ئارقىلىق ھېسابلىنىدىغان جۈپ ئارىلىق ماترىتسىسى ئارقىلىق قۇرۇلدى.
L-ئورنىتىن ۋە باكتېرىيە ئۆلتۈرگۈچى «Rizolex-T» نىڭ باكتېرىيەگە قارشى تۇرۇش ئىقتىدارى ئاگار دىففۇزىيە ئۇسۇلى ئارقىلىق سىناق نەيچىسىدە بېكىتىلدى. ئۇسۇل: مۇۋاپىق مىقداردا L-ئورنىتىن ئېرىتمىسى (500 mg/L) ئېلىپ، ئۇنى 10 مىللىلىتىر PDA ئوزۇقلۇق مۇھىتى بىلەن تولۇق ئارىلاشتۇرۇپ، ئاخىرقى قويۇقلۇقى ئايرىم-ئايرىم ھالدا 12.5، 25، 50، 75، 100 ۋە 125 mg/L بولغان ئېرىتمىلەرنى تەييارلاڭ. كونترول سۈپىتىدە بەش قويۇقلۇقتىكى «Rizolex-T» زەمبۇرۇغقا قارشى دورىسى (2، 4، 6، 8 ۋە 10 mg/L) ۋە ستېرىللىق ستېرىللىق سۇ ئىشلىتىلدى. مۇھىت قېتىپ قالغاندىن كېيىن، دىئامېتىرى 4 مىللىمېتىر كېلىدىغان يېڭى تەييارلانغان Sclerotinia sclerotiorum مەدەنىيىتىنىڭ مىتسېلىيە تىقىمى پېترى قاچىسىنىڭ ئوتتۇرىسىغا يۆتكىلىپ، مىتسېلىيە كونترول پېترى قاچىسىنىڭ ھەممىسىنى قاپلىغۇچە 25±2°C تېمپېراتۇرىدا يېتىشتۈرۈلدى، ئاندىن زەمبۇرۇغنىڭ ئۆسۈشى خاتىرىلەندى. 1-فورمۇلا ئارقىلىق S. sclerotiorum نىڭ رادىئاتسىيەلىك ئۆسۈشىنىڭ چەكلىنىش نىسبىتىنى ھېسابلاڭ:
بۇ تەجرىبە ئىككى قېتىم تەكرارلاندى، ھەر بىر كونترول/تەجرىبە گۇرۇپپىسى ئۈچۈن ئالتە بىئولوگىيىلىك تەكرارلاش ۋە ھەر بىر بىئولوگىيىلىك تەكرارلاش ئۈچۈن بەش قازان (ھەر بىر قازاندا ئىككى ئۆسۈملۈك) ئىشلىتىلدى. تەجرىبە نەتىجىلىرىنىڭ توغرىلىقى، ئىشەنچلىكلىكى ۋە قايتا ئىشلەپ چىقىرىشچانلىقىغا كاپالەتلىك قىلىش ئۈچۈن ھەر بىر بىئولوگىيىلىك تەكرارلاش ئىككى قېتىم (ئىككى تېخنىكىلىق تەكرارلاش) تەھلىل قىلىندى. بۇنىڭدىن باشقا، يېرىم ئەڭ چوڭ چەكلىمە قويۇقلۇقى (IC50) ۋە IC99 (Prentice, 1976) نى ھېسابلاش ئۈچۈن probit رېگرېسسىيە ئانالىزى ئىشلىتىلدى.
پارنىك شارائىتىدا L-ئورنىتىننىڭ پوتېنسىيالىنى باھالاش ئۈچۈن، ئارقا-ئارقىدىن ئىككى قېتىم قازان تەجرىبىسى ئېلىپ بېرىلدى. قىسقىسى، قازانلار ستېرىللانغان لاي-قۇم تۇپراق بىلەن تولدۇرۇلدى (3:1) ۋە يېڭى تەييارلانغان S. sclerotiorum مەدەنىيىتى بىلەن ئوكۇل قىلىندى. ئالدى بىلەن، S. sclerotiorum نىڭ ئەڭ تاجاۋۇزچان ئايرىمىسى (3-قېتىملىق ئايرىش) بىر ستېرىلوتيۇمنى ئىككىگە بۆلۈپ، يۈزىنى ئاستىغا قارىتىپ PDA غا قويۇپ، مىتسېلىيەنىڭ ئۆسۈشىنى قوزغىتىش ئۈچۈن 25 سېلسىيە گرادۇستا (24 سائەت) 4 كۈن داۋاملىق قاراڭغۇلۇقتا ئىنكۇباتسىيە قىلىش ئارقىلىق يېتىشتۈرۈلدى. ئاندىن دىئامېتىرى 5 مىللىمېتىر كېلىدىغان تۆت ئاگار تىقى ئالدى گىرۋىكىدىن ئېلىپ، 100 گرام بۇغداي ۋە گۈرۈچ كېپىكىنىڭ ستېرىل ئارىلاشمىسى (1:1, v/v) بىلەن ئوكۇل قىلىندى ۋە بارلىق بوتۇلكىلار 25 ± 2 سېلسىيە گرادۇستا 12 سائەت يورۇقلۇق/12 سائەت قاراڭغۇلۇق دەۋرىيلىكى ئاستىدا 5 كۈن ئىنكۇباتسىيە قىلىندى، بۇ ستېرىلوتيۇم شەكىللىنىشىنى قوزغىتىش ئۈچۈن قىلىندى. تۇپراق قوشۇشتىن بۇرۇن، بارلىق بوتۇلكىلارنىڭ ئىچىدىكىسى تولۇق ئارىلاشتۇرۇلۇپ، بىر خىللىققا كاپالەتلىك قىلىندى. ئاندىن، كېسەللىك قوزغاتقۇچى مىكروبلارنىڭ دائىملىق قويۇقلۇقىنى كاپالەتلەندۈرۈش ئۈچۈن، ھەر بىر قازانغا 100 گرام كولونىزىيەلىك كېپەك ئارىلاشمىسى قوشۇلدى. ئېمپىلياتسىيە قىلىنغان قازانلارغا زەمبۇرۇغنىڭ ئۆسۈشىنى قوزغىتىش ئۈچۈن سۇ قۇيۇلدى ۋە 7 كۈن پارنىك شارائىتىدا قويۇلدى.
ئاندىن ھەر بىر قازانغا گىزا 3 تۈرىدىكى بەش ئۇرۇق سېپىلدى. L-ئورنىتىن ۋە رىزولېكس-T زەمبۇرۇغقا قارشى دورىسى بىلەن بىر تەرەپ قىلىنغان قازانلار ئۈچۈن، ستېرىللانغان ئۇرۇقلار ئالدى بىلەن ئىككى خىل بىرىكمىنىڭ سۇ ئېرىتمىسىگە ئىككى سائەت چىلاپ قويۇلدى، ئاخىرقى IC99 قويۇقلۇقى ئايرىم-ئايرىم ھالدا تەخمىنەن 250 مىللىگرام/لىتىر ۋە 50 مىللىگرام/لىتىر ئىدى، ئاندىن ئېكىشتىن بۇرۇن بىر سائەت ھاۋادا قۇرۇتۇلدى. يەنە بىر تەرەپتىن، ئۇرۇقلار ستېرىللانغان ستېرىللانغان سۇغا چىلىنىپ، مەنپىي كونترول قىلىندى. 10 كۈندىن كېيىن، تۇنجى قېتىم سۇغىرىشتىن بۇرۇن، كۆچەتلەر سىيرىلىپ، ھەر بىر قازاندا پەقەت ئىككى پاكىز كۆچەت قالدى. بۇنىڭدىن باشقا، S. sclerotiorum بىلەن يۇقۇملىنىشنىڭ ئالدىنى ئېلىش ئۈچۈن، ئوخشاش تەرەققىيات باسقۇچىدىكى (10 كۈن) لوبيا ئۆسۈملۈك غولى ستېرىللانغان پىچاق بىلەن ئىككى خىل جايدا كېسىۋېتىلدى ۋە ھەر بىر يارىغا تەخمىنەن 0.5 گرام كولونىزىياتسىيە كېپىكى ئارىلاشمىسى سېلىندى، ئاندىن يۇقىرى نەملىك بىلەن ئوكۇل قىلىنغان بارلىق ئۆسۈملۈكلەردە يۇقۇملىنىش ۋە كېسەللىكنىڭ تەرەققىياتىنى ئىلگىرى سۈردى. كونترول ئۆسۈملۈكلىرىمۇ ئوخشاشلا يارىلىنىپ، يارىغا تەڭ مىقداردا (0.5 گرام) ستېرىل، مۇستەملىكىسىز كېپەك ئارىلاشمىسى قويۇلۇپ، يۇقىرى نەملىكتە ساقلىنىپ، كېسەللىكنىڭ تەرەققىيات مۇھىتىنى تەقلىد قىلىش ۋە داۋالاش گۇرۇپپىلىرى ئوتتۇرىسىدىكى مۇقىملىقنى كاپالەتلەندۈرۈش ئۈچۈن يارىلاندى.
داۋالاش ئۇسۇلى: لوبيا كۆچەتلىرىگە 500 مىللىلىتىر L-ئورنىتىن (250 مىللىگرام/لىتىر) سۇ ئېرىتمىسى ياكى Rizolex-T زەمبۇرۇغقا قارشى دورىسى (50 مىللىگرام/لىتىر) بىلەن تۇپراقنى سۇغىرىش ئارقىلىق سۇغۇرۇلدى، ئاندىن داۋالاش 10 كۈن ئارىلىقى بىلەن ئۈچ قېتىم تەكرارلاندى. پلاسېبو بىلەن داۋالانغان كونترول ئۆسۈملۈكلىرى 500 مىللىلىتىر ستېرىللىق سۈمۈرۈلگەن سۇ بىلەن سۇغىرىلدى. بارلىق داۋالاشلار پارنىك شارائىتىدا (25 ± 2°C، 75 ± 1% نىسپىي نەملىك ۋە 8 سائەت يورۇق/16 سائەت قاراڭغۇ فوتوپېرىئود) ئېلىپ بېرىلدى. بارلىق قازانلارغا ئىككى ھەپتىدە بىر قېتىم سۇغۇرۇلدى ۋە ھەر ئايدا 3-4 گرام/لىتىر قويۇقلۇقتا تەڭپۇڭلاشتۇرۇلغان NPK ئوغۇتى (20-20-20، 3.6% كۈكۈرت ۋە TE مىكرو ئېلېمېنتلىرى قوشۇلغان؛ Zain Seeds, مىسىر) بىلەن ئالاھىدە تۈرنىڭ تەۋسىيەسى ۋە ئىشلەپچىقارغۇچىنىڭ كۆرسەتمىسىگە ئاساسەن يوپۇرماققا پۈركۈش ئارقىلىق بىر تەرەپ قىلىندى. باشقىچە بەلگىلىمە بولمىغاندا، تولۇق كېڭەيگەن پىشقان يوپۇرماقلار (ئۈستىدىن باشلاپ 2- ۋە 3- يوپۇرماقلار) ھەر بىر بىئولوگىيىلىك كۆپەيتىلگەن يوپۇرماقتىن 72 سائەت كېيىن (hpt) يىغىۋېلىنىپ، بىر خىل ھالەتكە كەلتۈرۈلۈپ، بىرلەشتۈرۈلۈپ، -80 سېلسىيە گرادۇستا ساقلىنىپ، ئوكسىدلىنىش سترېس كۆرسەتكۈچلىرىنىڭ ئورنىدا گىستوخىمىيىلىك ئورنى، ماي پېروكسىدلىنىشى، ئېنزىملىق ۋە ئېنزىملىق ئەمەس ئوكسىدلىنىشقا قارشى تۇرۇش ۋە گېن ئىپادىسى قاتارلىق تېخىمۇ كۆپ ئانالىزلار ئېلىپ بېرىلدى.
ئاق موگۇ يۇقۇملىنىش دەرىجىسى تېران قاتارلىقلار تەرىپىدىن ئۆزگەرتىلگەن (2006) پېتزولدت ۋە دىكسون دەرىجىسى (1996) ئاساسىدا 1-9 دەرىجىسى (قوشۇمچە جەدۋەل S2) ئارقىلىق ھەر ھەپتە ئوكۇل قىلىنغاندىن كېيىن 21 كۈن (dpi) باھالانغان. قىسقىسى، لوبيا ئۆسۈملۈكلىرىنىڭ غولى ۋە شاخلىرى ئوكۇل قىلىنغان نۇقتىدىن باشلاپ تەكشۈرۈلۈپ، تۈگۈن ئارىلىقى ۋە تۈگۈنلەر بويىدىكى يارىلارنىڭ ئىلگىرىلىشىنى كۆزىتىلغان. ئاندىن يارىنىڭ ئوكۇل قىلىنغان نۇقتىدىن غول ياكى شاخ بويىدىكى ئەڭ يىراق نۇقتىغىچە بولغان ئارىلىقى ئۆلچەنگەن ۋە يارىنىڭ ئورنىغا ئاساسەن 1-9 دەرىجىسى بېرىلگەن، بۇ يەردە (1) ئوكۇل قىلىنغان نۇقتىغا يېقىن جايدا كۆرۈنىدىغان يۇقۇملىنىش يوقلۇقىنى، (2-9) يارىنىڭ چوڭلۇقىنىڭ ئاستا-ئاستا ئېشىپ، تۈگۈن/تۈگۈن ئارىلىقى بويىدىكى ئىلگىرىلىشىنى كۆرسەتكەن (قوشۇمچە جەدۋەل S2). ئاندىن ئاق موگۇ يۇقۇملىنىش دەرىجىسى 2-فورمۇلا ئارقىلىق پىرسەنتكە ئايلاندۇرۇلغان:
بۇنىڭدىن باشقا، كېسەللىكنىڭ ئىلگىرىلەش ئەگرى سىزىقى ئاستىدىكى كۆلەم (AUDPC) يېقىندا ئادەتتىكى لوبيانىڭ ئاق چىرىش كېسىلىگە ماسلاشتۇرۇلغان فورمۇلا (Shaner and Finney, 1977) ئارقىلىق ھېسابلىنىدۇ (Chauhan et al., 2020): 3-تەڭلىمە ئارقىلىق
بۇ يەردە Yi = ti ۋاقىتتىكى كېسەللىكنىڭ ئېغىرلىق دەرىجىسى، Yi+1 = كېيىنكى ۋاقىتتىكى كېسەللىكنىڭ ئېغىرلىق دەرىجىسى ti+1، ti = تۇنجى قېتىم ئۆلچەش ۋاقتى (كۈن بىلەن)، ti+1 = كېيىنكى قېتىم ئۆلچەش ۋاقتى (كۈن بىلەن)، n = ۋاقىت نۇقتىلىرى ياكى كۆزىتىش نۇقتىلىرىنىڭ ئومۇمىي سانى. ئۆسۈملۈك ئېگىزلىكى (cm)، ھەر بىر ئۆسۈملۈكتىكى شاخ سانى ۋە ھەر بىر ئۆسۈملۈكتىكى يوپۇرماق سانى قاتارلىق پۇرچاق ئۆسۈملۈكىنىڭ ئۆسۈش پارامېتىرلىرى ھەر ھەپتىدە 21 كۈن بارلىق بىئولوگىيىلىك تەكرارلاشلاردا خاتىرىلەندى.
ھەر بىر بىئولوگىيىلىك كۆپەيتىشتە، يوپۇرماق ئەۋرىشكىلىرى (ئۈستىدىن ئىككىنچى ۋە ئۈچىنچى تولۇق تەرەققىي قىلغان يوپۇرماقلار) داۋالاشتىن كېيىنكى 45-كۈنى (ئەڭ ئاخىرقى داۋالاشتىن 15 كۈن كېيىن) يىغىۋېلىندى. ھەر بىر بىئولوگىيىلىك كۆپەيتىش بەش قازاندىن تەركىب تاپقان (ھەر بىر قازاندا ئىككى ئۆسۈملۈك بار). تەخمىنەن 500 مىللىگرام ئېزىلگەن توقۇلما قاراڭغۇدا 4 سېلسىيە گرادۇستا %80 ئاتسېتون ئىشلىتىپ فوتوسىنتېز پىگمېنتلىرىنى (خلوروفىل a، خىلوروفىل b ۋە كاروتېنوئىدلار) ئايرىش ئۈچۈن ئىشلىتىلدى. 24 سائەتتىن كېيىن، ئەۋرىشكىلەر مەركەزدىن قاچۇرۇلۇپ، ئۈستۈنكى قەۋەت يىغىۋېلىنىپ، ئۈچ خىل دولقۇن ئۇزۇنلۇقىدىكى (A470، A646 ۋە A663 nm) سۈمۈرگۈچنى ئۆلچەش ئارقىلىق (Lichtenthaler، 1987) UV-160A سپېكتروفوتومېتىرى (Shimadzu شىركىتى، ياپونىيە) ئارقىلىق خىلوروفىل a، خىلوروفىل b ۋە كاروتېنوئىد تەركىبىنى رەڭدارلىق بىلەن بېكىتتى. ئاخىرىدا، فوتوسىنتېز پىگمېنتلىرىنىڭ تەركىبى Lichtenthaler (1987) تەرىپىدىن تەسۋىرلەنگەن تۆۋەندىكى 4-6 فورمۇلا ئارقىلىق ھېسابلىنىدۇ.
داۋالاشتىن كېيىنكى 72 سائەتتە (hpt)، ھەر بىر بىئولوگىيىلىك كۆپەيتىلگەن يوپۇرماقلاردىن ۋودورود پېروكسىد (H2O2) ۋە سۇپېرئوكسىد ئانيونىنىڭ (O2•−) ئورنىدا گىستوخىمىيىلىك ئورنى ئۈچۈن يوپۇرماقلار (ئۈستىدىن ئىككىنچى ۋە ئۈچىنچى تولۇق يېتىلگەن يوپۇرماقلار) يىغىۋېلىندى. ھەر بىر بىئولوگىيىلىك كۆپەيتىلگەن يوپۇرماق بەش قازاندىن تەركىب تاپقان (ھەر بىر قازاندا ئىككى ئۆسۈملۈك). ئۇسۇلنىڭ توغرىلىقى، ئىشەنچلىكلىكى ۋە قايتا ئىشلەپ چىقىرىشچانلىقىغا كاپالەتلىك قىلىش ئۈچۈن ھەر بىر بىئولوگىيىلىك كۆپەيتىلگەن يوپۇرماق ئىككى قېتىم تەھلىل قىلىندى (ئىككى تېخنىكىلىق كۆپەيتىلگەن يوپۇرماق). H2O2 ۋە O2•− ئايرىم-ئايرىم ھالدا %0.1 3,3′-دىئامىنوبېنزىدىن (DAB; Sigma-Aldrich, Darmstadt, گېرمانىيە) ياكى نىترو كۆك تېترازولىي (NBT; Sigma-Aldrich, Darmstadt, گېرمانىيە) ئارقىلىق بېكىتىلدى، بۇ ئۇسۇللار Romero-Puertas قاتارلىقلار (2004) ۋە Adam قاتارلىقلار (1989) تەرىپىدىن تەسۋىرلەنگەن ئۇسۇللارغا ئاساسەن ئازراق ئۆزگەرتىشلەر بىلەن يولغا قويۇلدى. H2O2 نىڭ گىستوخىمىيىلىك ئورنىنى بېكىتىش ئۈچۈن، ۋاراقچىلارغا 10 مىللىمېتىرلىق Tris بۇفېر (pH 7.8) دا %0.1 DAB قوشۇپ ۋاكۇئۇم ئارقىلىق سىڭدۈرۈلدى ۋە ئاندىن ئۆي تېمپېراتۇرىسىدا يورۇقلۇقتا 60 مىنۇت تۇرغۇزۇلدى. ۋاراقچىلار 4:1 (v/v) ئېتانول:خلوروفورم (Al-Gomhoria Pharmaceuticals and Medical Supplies, قاھىرە، مىسىر) دىكى %0.15 (v/v) TCA دا ئاقارتىلىپ، ئاندىن قاراڭغۇلاشقىچە يورۇقلۇققا قويۇلدى. شۇنىڭغا ئوخشاش، O2•− نىڭ گىستوخىمىيىلىك ئورنىنى بېكىتىش ئۈچۈن، ۋاكۇئۇمغا 0.1 w/v % HBT قوشۇلغان 10 مىللىمېتىرلىق كالىي فوسفات بۇفېر (pH 7.8) قوشۇپ ۋاكۇئۇم ئارقىلىق سىڭدۈرۈلدى. ۋاراقچىلار ئۆي تېمپېراتۇرىسىدا يورۇقلۇقتا 20 مىنۇت تۇرغۇزۇلدى، ئاندىن يۇقىرىقىدەك ئاقارتىلدى ۋە ئاندىن قېنىق كۆك/بىنەپشە رەڭلىك داغلار پەيدا بولغۇچە يورۇتۇلدى. نەتىجىدە پەيدا بولغان قوڭۇر (H2O2 كۆرسەتكۈچى سۈپىتىدە) ياكى كۆك-بىنەفشە (O2•− كۆرسەتكۈچى سۈپىتىدە) رەڭنىڭ كۈچلۈكلۈك دەرىجىسى رەسىم بىر تەرەپ قىلىش بوغچىسى ImageJ نىڭ فىجى نۇسخىسى ئارقىلىق باھالاندى (http://fiji.sc; 2024-يىلى 7-مارت زىيارەت قىلىندى).
مالوندىئالدېھىد (MDA؛ لىپىد پېروكسىدلىنىشىنىڭ بەلگىسى سۈپىتىدە) Du ۋە Bramlage (1992) نىڭ ئۇسۇلى بويىچە ئازراق ئۆزگەرتىشلەر بىلەن بېكىتىلدى. ھەر بىر بىئولوگىيىلىك كۆپەيتىلگەن يوپۇرماقلار (ئۈستىدىن ئىككىنچى ۋە ئۈچىنچى تولۇق تەرەققىي قىلغان يوپۇرماقلار) بىر تەرەپ قىلىنغاندىن كېيىن 72 سائەتتىن كېيىن (hpt) يىغىۋېلىندى. ھەر بىر بىئولوگىيىلىك كۆپەيتىلگەن يوپۇرماق بەش قازاندىن تەركىب تاپقان (ھەر بىر قازاندا ئىككى ئۆسۈملۈك). ھەر بىر بىئولوگىيىلىك كۆپەيتىلگەن يوپۇرماقنىڭ توغرىلىقى، ئىشەنچلىكلىكى ۋە قايتا ئىشلەپچىقىرىش ئىقتىدارىنى كاپالەتلەندۈرۈش ئۈچۈن ئىككى قېتىم تەھلىل قىلىندى (ئىككى تېخنىكىلىق كۆپەيتىلگەن يوپۇرماق). قىسقىسى، %0.01 بۇتىللانغان گىدروكسىتولۇئېن (BHT؛ Sigma-Aldrich، سانت لۇئىس، MO، ئامېرىكا) تەركىبىدىكى %20 ترىخلوروسىركە كىسلاتاسى (TCA؛ MilliporeSigma، بۇرلىڭتون، MA، ئامېرىكا) بىلەن MDA ئايرىش ئۈچۈن 0.5 گرام يەر يوپۇرماق توقۇلمىسى ئىشلىتىلدى. ئاندىن ئۈستۈنكى سۇيۇقلۇقتىكى MDA مىقدارى UV-160A سپېكتروفوتومېتىرى (شىمادزۇ شىركىتى، ياپونىيە) ئارقىلىق 532 ۋە 600 نانومېتىردىكى يۇتۇلۇشنى ئۆلچەش ئارقىلىق رەڭ ئۆلچىمى ئارقىلىق بېكىتىلدى ۋە ئاندىن nmol g−1 FW شەكلىدە ئىپادىلەندى.
ئېنزىمسىز ۋە ئېنزىملىق ئوكسىدلىنىشقا قارشى تۇرغۇچىلارنى باھالاش ئۈچۈن، داۋالاشتىن كېيىنكى 72 سائەتتە (hpt) ھەر بىر بىئولوگىيىلىك كۆپەيتىلگەن يوپۇرماقلاردىن يوپۇرماقلار (ئۈستىدىن ئىككىنچى ۋە ئۈچىنچى تولۇق يېتىلگەن يوپۇرماقلار) يىغىۋېلىندى. ھەر بىر بىئولوگىيىلىك كۆپەيتىلگەن يوپۇرماق بەش قازاندىن تەركىب تاپقان (ھەر بىر قازاندا ئىككى ئۆسۈملۈك). ھەر بىر بىئولوگىيىلىك ئەۋرىشكە كۆپەيتىلگەن نۇسخىسى (ئىككى تېخنىكىلىق ئەۋرىشكە) ئانالىز قىلىندى. ئىككى يوپۇرماق سۇيۇق ئازوت بىلەن ئېزىلىپ، ئېنزىملىق ۋە ئېنزىمسىز ئوكسىدلىنىشقا قارشى تۇرغۇچىلار، ئومۇمىي ئامىنو كىسلاتا، پرولىن مىقدارى، گېن ئىپادىسى ۋە ئوكسالات مىقدارىنى بېكىتىشتە بىۋاسىتە ئىشلىتىلدى.
ئېرىيدىغان فېنوللارنىڭ ئومۇمىي مىقدارى Folin-Ciocalteu رېئاگېنتى (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) ئارقىلىق Kahkonen قاتارلىقلار (1999) تەسۋىرلىگەن ئۇسۇلغا ئازراق ئۆزگەرتىش كىرگۈزۈلۈپ بېكىتىلدى. قىسقىسى، تەخمىنەن 0.1 گرام گوموگېنلاشتۇرۇلغان يوپۇرماق توقۇلمىسى 20 مىللىلىتىر %80 مېتانول بىلەن قاراڭغۇدا 24 سائەت ئېلىنىپ چىقىرىلدى ۋە ئۈستۈنكى سۇيۇقلۇق مەركەزدىن قاچۇرۇلغاندىن كېيىن يىغىۋېلىندى. 0.1 مىللىلىتىر ئەۋرىشكە ئېكىستراكتى 0.5 مىللىلىتىر Folin-Ciocalteu رېئاگېنتى (%10) بىلەن ئارىلاشتۇرۇلۇپ، 30 سېكۇنت چايقىلىپ، 5 مىنۇت قاراڭغۇدا قويۇپ قويۇلدى. ئاندىن ھەر بىر تۇرۇباغا %20 ناترىي كاربونات ئېرىتمىسىدىن 0.5 مىللىلىتىر (Na2CO3; Al-Gomhoria Pharmaceuticals and Medical Supplies Company, Cairo, مىسىر) قوشۇلۇپ، تولۇق ئارىلاشتۇرۇلۇپ، ئۆي تېمپېراتۇرىسىدا قاراڭغۇدا 1 سائەت تۇرغۇزۇلدى. ئىنكۇباتسىيەدىن كېيىن، رېئاكسىيە ئارىلاشمىسىنىڭ سۈمۈرۈلۈشى 765 نانومېتىردا UV-160A سپېكتروفوتومېتىرى (شىمادزۇ شىركىتى، ياپونىيە) ئارقىلىق ئۆلچەندى. ئەۋرىشكە ئېكىستراكتلىرىدىكى ئومۇمىي ئېرىيدىغان فېنوللارنىڭ قويۇقلۇقى گال كىسلاتاسىنى تەڭشەش ئەگرى سىزىقى (فىشېر ئىلمىي، خامپتون، NH، ئامېرىكا) ئارقىلىق بېكىتىلدى ۋە ھەر گرام يېڭى ئېغىرلىقتىكى گال كىسلاتاسىغا تەڭ مىللىگرام ئېكۋىۋالېنت (mg GAE g-1 يېڭى ئېغىرلىق) سۈپىتىدە ئىپادىلەندى.
ئېرىيدىغان فلاۋونوئىدنىڭ ئومۇمىي مىقدارى Djeridane قاتارلىقلارنىڭ (2006) ئۇسۇلى بويىچە ئازراق ئۆزگەرتىشلەر بىلەن بېكىتىلدى. قىسقىسى، يۇقىرىدىكى 0.3 مىللىلىتىر مېتانول ئېكىستراكتى 0.3 مىللىلىتىر %5 ئاليۇمىن خىلورىد ئېرىتمىسى (AlCl3؛ Fisher Scientific, Hampton, NH, USA) بىلەن ئارىلاشتۇرۇلۇپ، كۈچلۈك ئارىلاشتۇرۇلۇپ، ئاندىن ئۆي تېمپېراتۇرىسىدا 5 مىنۇت تۇرغۇزۇلدى، ئاندىن 0.3 مىللىلىتىر %10 كالىي ئاتسېتات ئېرىتمىسى (Al-Gomhoria Pharmaceuticals and Medical Supplies, Cairo, Misr) قوشۇلدى، تولۇق ئارىلاشتۇرۇلۇپ، ئۆي تېمپېراتۇرىسىدا 30 مىنۇت قاراڭغۇدا تۇرغۇزۇلدى. ئېكىستراكتتىن كېيىن، رېئاكسىيە ئارىلاشمىسىنىڭ سۈمۈرۈلۈشى UV-160A سپېكتروفوتومېتىرى (Shimadzu Corporation, Japan) ئارقىلىق 430 نانومېتىردا ئۆلچەندى. ئەۋرىشكە ئېكىستراكتىدىكى ئومۇمىي ئېرىيدىغان فلاۋونوئىدنىڭ قويۇقلۇقى رۇتىننى تەڭشەش ئەگرى سىزىقى (TCI America, Portland, OR, USA) ئارقىلىق بېكىتىلدى، ئاندىن يېڭى ئېغىرلىقتىكى ھەر گرام رۇتىن ئېكۋىۋالېنتىنىڭ مىللىگرامى (mg RE g-1 يېڭى ئېغىرلىق) سۈپىتىدە ئىپادىلەندى.
لوبيا يوپۇرمىقىدىكى ئومۇمىي ئەركىن ئامىنو كىسلاتا مىقدارى يوكوياما ۋە ھىراماتسۇ (2003) تەرىپىدىن ئوتتۇرىغا قويۇلغان ۋە سۇن قاتارلىقلار (2006) تەرىپىدىن ئۆزگەرتىلگەن ئۇسۇلغا ئاساسەن ئۆزگەرتىلگەن نىنىدرىن رېئاگېنتى (Thermo Scientific Chemicals, Waltham, MA, USA) ئارقىلىق بېكىتىلدى. قىسقىسى، 0.1 گرام يەر توقۇلمىسى pH قىممىتى 5.4 بۇفېر بىلەن ئېلىنىپ چىقىرىلدى، ھەمدە 200 μL ئۈستۈنكى سۇيۇقلۇق 200 μL نىنىدرىن (%2) ۋە 200 μL پىرىدىن (%10؛ Spectrum Chemical, New Brunswick, NJ, USA) بىلەن رېئاكسىيە قىلىندى، قايناق سۇ مۇنچىسىدا 30 مىنۇت تۇرغۇزۇلدى، ئاندىن سوۋۇتۇلدى ۋە UV-160A سپېكتروفوتومېتىرى (Shimadzu Corporation, Japan) ئارقىلىق 580 nm دا ئۆلچەندى. يەنە بىر تەرەپتىن، پرولىن Bates ئۇسۇلى ئارقىلىق بېكىتىلدى (Bates قاتارلىقلار, 1973). پرولىن %3 لىك سۇلفوسالىتسىل كىسلاتاسى (Thermo Scientific Chemicals, Waltham, MA, USA) بىلەن ئېكىستىراكسىيە قىلىندى ۋە مەركەزدىن قاچۇرۇلغاندىن كېيىن، ئۈستۈنكى سۇيۇقلۇقنىڭ 0.5 مىللىلىتىر سۇيۇقلۇقى 1 مىللىلىتىر مۇز ئاتسېتاتىك كىسلاتاسى (Fisher Scientific, Hampton, NH, USA) ۋە نىنىدرىن رېئاگېنتى بىلەن ئارىلاشتۇرۇلۇپ، 90 سېلسىيە گرادۇستا 45 مىنۇت ئىكۇباتسىيە قىلىندى، سوۋۇتۇلدى ۋە يۇقىرىقىغا ئوخشاش سپېكتروفوتومېتىر ئارقىلىق 520 نانومېتىردا ئۆلچەندى. يوپۇرماق ئېكىستىراكتىدىكى ئومۇمىي ئەركىن ئامىنو كىسلاتاسى ۋە پرولىن ئايرىم-ئايرىم ھالدا گلىتسىن ۋە پرولىننى تەڭشەش ئەگرى سىزىقى (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA) ئارقىلىق بېكىتىلدى ۋە mg/g يېڭى ئېغىرلىقى بىلەن ئىپادىلەندى.
ئوكسىدلىنىشقا قارشى تۇرۇش ئېنزىملىرىنىڭ ئېنزىملىق ئاكتىپلىقىنى بېكىتىش ئۈچۈن، تەخمىنەن 500 مىللىگرام گوموگېنلاشتۇرۇلغان توقۇلمىدىن 3 مىللىلىتىر 50 مىللىلىتىر Tris بۇفېر (pH 7.8) بىلەن 1 مىللىلىتىر EDTA-Na2 (Sigma-Aldrich, سانت لۇئىس, MO, ئامېرىكا) ۋە %7.5 پولىۋىنىلپىررولىدون (PVP; Sigma-Aldrich, سانت لۇئىس, MO, ئامېرىكا) قوشۇلغان 50 مىللىلىتىر Tris بۇفېر (pH 7.8) بىلەن ئايرىۋېلىندى، 10،000 × g دا توڭلاتقۇدا (4 سېلسىيە گرادۇس) 20 مىنۇت مەركەزدىن قاچۇرۇلدى ۋە ئۈستۈنكى سۇيۇقلۇق (خام ئېنزىم ئېكىستراكتى) يىغىۋېلىندى (El-Nagar قاتارلىقلار، 2023؛ Osman قاتارلىقلار، 2023). ئاندىن كاتالازا (CAT) نىڭ ئېنزىملىق ئاكتىپلىقىنى Aebi (1984) نىڭ ئۇسۇلى بويىچە، ئازراق ئۆزگەرتىشلەر بىلەن بېكىتىش ئۈچۈن 2 مىللىلىتىر 0.1 M ناترىي فوسفات بۇفېرى (pH 6.5؛ Sigma-Aldrich، سانت لۇئىس، MO، ئامېرىكا) ۋە 100 μl 269 mM H2O2 ئېرىتمىسى بىلەن رېئاكسىيە قىلىندى (El-Nagar قاتارلىقلار، 2023؛ Osman قاتارلىقلار، 2023). گۇئاياكولغا تايىنىدىغان پېروكسىدازا (POX) ئېنزىملىق ئاكتىپلىقى Harrach قاتارلىقلارنىڭ ئۇسۇلى ئارقىلىق بېكىتىلدى (2009). (2008) ئازراق ئۆزگەرتىشلەر بىلەن (El-Nagar قاتارلىقلار، 2023؛ Osman قاتارلىقلار، 2023) ۋە پولىفېنول ئوكسىدازا (PPO) نىڭ ئېنزىملىق پائالىيىتى 2.2 مىللىلىتىر 100 مىللىمېتىرلىق ناترىي فوسفات بۇفېرى (pH 6.0)، 100 μl گۋاياكول (TCI خىمىيىلىك ماددىلار، پورتلاند، OR، ئامېرىكا) ۋە 100 μl 12 مىللىمېتىرلىق H2O2 بىلەن رېئاكسىيە قىلغاندىن كېيىن بېكىتىلدى. بۇ ئۇسۇل (El-Nagar قاتارلىقلار، 2023؛ Osman قاتارلىقلار، 2023) دىن ئازراق ئۆزگەرتىلگەن. بۇ سىناق 0.1 M فوسفات بۇفېرىدا (pH 6.0) يېڭى تەييارلانغان 3 مىللىلىتىر كاتېخول ئېرىتمىسى (Thermo Scientific Chemicals، Waltham، MA، ئامېرىكا) (0.01 M) بىلەن رېئاكسىيەدىن كېيىن ئېلىپ بېرىلدى. CAT پائالىيىتى 240 نانومېتىر (A240) دا H2O2 نىڭ پارچىلىنىشىنى كۆزىتىش ئارقىلىق ئۆلچەندى، POX پائالىيىتى 436 نانومېتىر (A436) دا يۇتۇشچانلىقىنىڭ ئېشىشىنى كۆزىتىش ئارقىلىق ئۆلچەندى، PPO پائالىيىتى بولسا UV-160A سپېكتروفوتومېتىرى (شىمادزۇ، ياپونىيە) ئارقىلىق ھەر 30 سېكۇنتتا 495 نانومېتىر (A495) دا يۇتۇشچانلىقىنىڭ تەۋرىنىشىنى خاتىرىلەش ئارقىلىق ئۆلچەندى.
ھەقىقىي ۋاقىتلىق RT-PCR ئۇسۇلى ئارقىلىق، ئەڭ ئاخىرقى داۋالاشتىن 72 سائەت كېيىن، لوبيا يوپۇرمىقىدىكى (ئۈستىدىن باشلاپ ئىككىنچى ۋە ئۈچىنچى تولۇق تەرەققىي قىلغان يوپۇرماقلار) پېروكسىسومال كاتالازا (PvCAT1; GenBank Accession نومۇرى KF033307.1)، سۇپېرئوكسىد دىسمۇتازا (PvSOD; GenBank Accession نومۇرى XM_068639556.1) ۋە گلۇتاتىئون رېدۇكتازا (PvGR; GenBank Accession نومۇرى KY195009.1) قاتارلىق ئۈچ خىل ئوكسىدلىنىشقا قارشى تۇرۇشقا مۇناسىۋەتلىك گېننىڭ ترانسكرىپت سەۋىيەسى بايقالدى. قىسقىسى، RNA ئىشلەپچىقارغۇچىنىڭ كېلىشىمىگە ئاساسەن Simply P Total RNA Extraction Kit (Cat. No. BSC52S1; BioFlux, Biori Technology, China) ئارقىلىق ئايرىۋېلىندى. ئاندىن، ئىشلەپچىقارغۇچىنىڭ كۆرسەتمىسىگە ئاساسەن TOP script™ cDNA Synthesis Kit ئارقىلىق cDNA سىنتېز قىلىندى. يۇقىرىدىكى ئۈچ گېننىڭ باشلانغۇچ تەرتىپلىرى قوشۇمچە جەدۋەل S3 دە كۆرسىتىلدى. PvActin-3 (GenBank كىرىش نومۇرى: XM_068616709.1) ئۆي ئىشلىرى گېنى سۈپىتىدە ئىشلىتىلدى ۋە نىسبىي گېن ئىپادىسى 2-ΔΔCT ئۇسۇلى ئارقىلىق ھېسابلىنىدۇ (Livak ۋە Schmittgen, 2001). بىئوتىك بېسىم (ئادەتتىكى پۇرچاق ئۆسۈملۈكلىرى بىلەن ئانتراكنوز زەمبۇرۇغى Colletotrichum lindemuthianum ئوتتۇرىسىدىكى ماس كەلمەيدىغان ئۆز-ئارا تەسىر) ۋە ئابىئوتىك بېسىم (قۇرغاقچىلىق، شورلۇق، تۆۋەن تېمپېراتۇرا) ئاستىدا ئاكتىننىڭ مۇقىملىقى كۆرسىتىلدى (Borges قاتارلىقلار, 2012).
بىز دەسلەپتە S. sclerotiorum دىكى ئوكسالوئاتسېتات ئاتسېتىلگىدرولازا (OAH) ئاقسىللىرىنىڭ گېنوم دائىرىسىدە كرېمنىي ئانالىزىنى ئاقسىل-ئاقسىل BLAST قورالى (BLASTp 2.15.0+) ئارقىلىق ئېلىپ باردۇق (Altschul et al., 1997, 2005). قىسقىسى، بىز Aspergillus fijiensis CBS 313.89 (AfOAH; taxide: 1191702; GenBank كىرىش نومۇرى XP_040799428.1; 342 ئامىنو كىسلاتا) ۋە Penicillium lagena (PlOAH; taxide: 94218; GenBank كىرىش نومۇرى XP_056833920.1; 316 ئامىنو كىسلاتا) دىن OAH نى ئىشلىتىپ، S. sclerotiorum دىكى گومولوگ ئاقسىلنى (taxide: 5180) خەرىتىلەشتۈردۇق. BLASTp ئەڭ يېڭى قولغا كەلتۈرۈلگەن S. sclerotiorum گېنوم سانلىق مەلۇماتلىرىغا قارىتا ئېلىپ بېرىلدى، بۇ سانلىق مەلۇمات دۆلەتلىك بىئوتېخنىكا ئۇچۇر مەركىزى (NCBI) تور بېتى http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/ دىكى GenBank دا بار ئىدى.
بۇنىڭدىن باشقا، S. sclerotiorum دىن مۆلچەرلەنگەن OAH گېنى (SsOAH) ۋە A. fijiensis CBS 313.89 دىن AfOAH ۋە P. lagena دىن PlOAH نىڭ تەرەققىيات ئانالىزى ۋە فىلوگېنېتىك دەرىخى MEGA11 دىكى ئەڭ چوڭ ئېھتىماللىق ئۇسۇلى (Tamura et al., 2021) ۋە JTT ماترىتسا ئاساسلىق مودېلى (Jones et al., 1992) ئارقىلىق چىقىرىلدى. فىلوگېنېتىك دەرىخى S. sclerotiorum دىن مۆلچەرلەنگەن بارلىق OAH گېنلىرىنىڭ (SsOAH) ئاقسىل تىزىملىكىنىڭ كۆپ خىل ماسلىشىش ئانالىزى ۋە چەكلىمە ئاساسلىق ماسلىشىش قورالى (COBALT; https://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/cobalt/re_cobalt.cgi) ئارقىلىق سوئال تىزىملىكى بىلەن بىرلەشتۈرۈلدى (Papadopoulos ۋە Agarwala, 2007). بۇنىڭدىن باشقا، S. sclerotiorum دىن ئېلىنغان SsOAH نىڭ ئەڭ ماس كېلىدىغان ئامىنو كىسلاتا تىزىملىكى ClustalW (http://www.genome.jp/tools-bin/clustalw) ئارقىلىق سوئال تىزىملىكى (AfOAH ۋە PlOAH) (Larkin قاتارلىقلار، 2007) بىلەن ماسلاشتۇرۇلدى، ھەمدە ماسلاشتۇرۇشتىكى ساقلانغان رايونلار ESPript قورالى (3.0 نەشرى؛ https://espript.ibcp.fr/ESPript/ESPript/index.php) ئارقىلىق كۆرسىتىلدى.
بۇنىڭدىن باشقا، S. sclerotiorum SsOAH نىڭ مۆلچەرلەنگەن فۇنكسىيەلىك ۋەكىللىك ساھەلىرى ۋە ساقلانغان ئورۇنلىرى InterPro قورالى (https://www.ebi.ac.uk/interpro/) ئارقىلىق ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسىتىش ئارقىلىق ئوخشىمىغان ئائىلىلەرگە تۈرگە ئايرىلدى (Blum قاتارلىقلار، 2021). ئاخىرىدا، مۆلچەرلەنگەن S. sclerotiorum SsOAH نىڭ ئۈچ ئۆلچەملىك (3D) قۇرۇلما مودېلى ئاقسىل گومولوگىيە/ئانالوگىيە تونۇش ماتورى (Phyre2 مۇلازىمېتىر نۇسخىسى 2.0؛ http://www.sbg.bio.ic.ac.uk/~phyre2/html/page.cgi?id=index) (Kelley قاتارلىقلار، 2015) ئارقىلىق ئېلىپ بېرىلدى ۋە SWISS-MODEL مۇلازىمېتىرى (https://swissmodel.expasy.org/) ئارقىلىق دەلىللەندى (Biasini قاتارلىقلار، 2014). مۆلچەرلەنگەن ئۈچ ئۆلچەملىك قۇرۇلمىلار (PDB فورماتى) UCSF-Chimera بوغچىسى (1.15 نەشرى؛ https://www.cgl.ucsf.edu/chimera/) ئارقىلىق ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسىتىش ئارقىلىق كۆرسىتىلدى (Pettersen قاتارلىقلار، 2004).
مىقدارلىق ھەقىقىي ۋاقىتلىق فلۇئورېسسېنسىيە PCR ئۇسۇلى ئارقىلىق Sclerotinia sclerotiorum مىتسېلىيەسىدىكى ئوكسالوئاتسېتات ئاتسېتىلگىدرولازا (SsOAH; GenBank كىرىش نومۇرى: XM_001590428.1) نىڭ ترانسكرىپسىيە سەۋىيەسى بېكىتىلدى. قىسقىسى، S. sclerotiorum PDB قاچىلانغان بوتۇلكىغا ئوكۇل قىلىنىپ، مىتسېلىيە ئۆسۈشىنى قوزغىتىش ئۈچۈن 25 ± 2 سېلسىيە گرادۇستا 24 سائەت، 150 ئايلىنىش سۈرئىتىدە ۋە دائىم قاراڭغۇدا (24 سائەت) تەۋرىنىشلىك ئىنكۇباتورغا (مودېل: I2400، New Brunswick Scientific Co.، Edison، NJ، USA) قويۇلدى. ئۇنىڭدىن كېيىن، ھۈجەيرىلەر ئاخىرقى IC50 قويۇقلۇقىدا (تەخمىنەن 40 ۋە 3.2 mg/L) L-ئورنىتىن ۋە زەمبۇرۇغقا قارشى Rizolex-T بىلەن داۋالىنىپ، ئاندىن ئوخشاش شارائىتتا يەنە 24 سائەت يېتىشتۈرۈلدى. ئىنكۇباتسىيەدىن كېيىن، مەدەنىيەتلەر 2500 ئايلىنىش سۈرئىتىدە 5 مىنۇت مەركەزدىن قاچۇرۇلدى ۋە ئۈستۈنكى سۇيۇقلۇق (زەمبۇرۇغ مىتسېلىيىسى) گېن ئىپادىسى ئانالىزى ئۈچۈن توپلاندى. شۇنىڭغا ئوخشاش، يۇقۇملانغان توقۇلمىلارنىڭ يۈزىدە ئاق موگۇ ۋە پاختا مىتسېلىيىسى ھاسىل قىلغان يۇقۇملانغان ئۆسۈملۈكلەردىن يۇقۇملانغاندىن كېيىن 0، 24، 48، 72، 96 ۋە 120 سائەتتە زەمبۇرۇغ مىتسېلىيىسى توپلاندى. زەمبۇرۇغ مىتسېلىيىسىدىن RNA ئېلىندى، ئاندىن يۇقىرىدا دېيىلگەندەك cDNA سىنتېز قىلىندى. SsOAH نىڭ باشلانغۇچ تىزىملىكى S3 قوشۇمچە جەدۋەلدە كۆرسىتىلدى. SsActin (GenBank كىرىش نومۇرى: XM_001589919.1) ئۆي ئىشلىرى گېنى سۈپىتىدە ئىشلىتىلدى، نىسپىي گېن ئىپادىسى 2-ΔΔCT ئۇسۇلى ئارقىلىق ھېسابلىنىدۇ (Livak ۋە Schmittgen, 2001).
ئوكسالىك كىسلاتاسى كارتوپكا دېكستروزا شورپىسى (PDB) ۋە زەمبۇرۇغ پاتوگېنى Sclerotinia sclerotiorum بار ئۆسۈملۈك ئەۋرىشكىلىرىدە شۈ ۋە جاڭ (2000) نىڭ ئۇسۇلى بويىچە ئازراق ئۆزگەرتىشلەر بىلەن بېكىتىلدى. قىسقىسى، S. sclerotiorum ئايرىملىرى PDB بار بولغان بوتۇلكىلارغا ئوكۇل قىلىنىپ، ئاندىن مىتسېلىيەنىڭ ئۆسۈشىنى قوزغىتىش ئۈچۈن تەۋرىنىشلىك ئىنكۇباتوردا (I2400 مودېلى، يېڭى برۇنسۋىك ئىلمىي شىركىتى، ئېدىسون، نيۇ-جېرسىي، ئامېرىكا) 150 ئايلىنىش سۈرئىتىدە 25 ± 2 سېلسىيە گرادۇستا 3-5 كۈن داۋاملىق قاراڭغۇ (24 سائەت) يېتىشتۈرۈلدى. ئىنكۇباتاتسىيەدىن كېيىن، زەمبۇرۇغ مەدەنىيىتى ئالدى بىلەن Whatman #1 فىلتىر قەغىزى ئارقىلىق سۈزۈلۈپ، ئاندىن قالغان مىتسېلىيە چىقىرىۋېتىلىش ئۈچۈن 2500 ئايلىنىش سۈرئىتىدە 5 مىنۇت مەركەزدىن قاچۇرۇلدى. ئۈستۈنكى قەۋەت توپلىنىپ، ئوكسالاتنى تېخىمۇ مىقدار جەھەتتىن بېكىتىش ئۈچۈن 4 سېلسىيە گرادۇستا ساقلاندى. ئۆسۈملۈك ئەۋرىشكىلىرىنى تەييارلاش ئۈچۈن، تەخمىنەن 0.1 گرام ئۆسۈملۈك توقۇلمىسى پارچىلىرى ئۈچ قېتىم دېستىللەنگەن سۇ بىلەن (ھەر قېتىمدا 2 مىللىلىتىر) چىقىرىۋېتىلدى. ئاندىن ئەۋرىشكىلەر 2500 ئايلىنىش سۈرئىتىدە 5 مىنۇت مەركەزدىن قاچۇرۇلدى، ئۈستۈنكى سۇيۇقلۇق قۇرۇق ھالەتتە 1-نومۇرلۇق Whatman فىلتىر قەغىزى ئارقىلىق سۈزۈلۈپ، كېيىنكى ئانالىز ئۈچۈن يىغىۋېلىندى.
ئوكسالىك كىسلاتانىڭ مىقدار ئانالىزى ئۈچۈن، رېئاكسىيە ئارىلاشمىسى ئەينەك توسۇقلۇق تۇرۇبا ئىچىدە تۆۋەندىكى تەرتىپ بويىچە تەييارلاندى: 0.2 مىللىلىتىر ئەۋرىشكە (ياكى PDB مەدەنىيەت فىلترات ياكى ئوكسالىك كىسلاتا ئۆلچەملىك ئېرىتمىسى)، 0.11 مىللىلىتىر بروموفېنول كۆك (BPB، 1 mM؛ Fisher Chemical، پىتتسبۇرگ، پېنسىلۋانىيە، ئامېرىكا)، 0.198 مىللىلىتىر 1 M سۇلفات كىسلاتاسى (H2SO4؛ Al-Gomhoria Pharmaceuticals and Medical Supplies، قاھىرە، مىسىر) ۋە 0.176 مىللىلىتىر 100 mM كالىي دىخرومات (K2Cr2O7؛ TCI chemicals، پورتلاند، OR، ئامېرىكا)، ئاندىن ئېرىتمە 4.8 مىللىلىتىرغىچە سۇيۇلدۇرۇلۇپ، كۈچلۈك ئارىلاشتۇرۇلۇپ، دەرھال 60 سېلسىيە گرادۇسلۇق سۇ مۇنچىسىغا قويۇلدى. 10 مىنۇتتىن كېيىن، 0.5 مىللىلىتىر ناترىي گىدروكسىد ئېرىتمىسى (NaOH؛ 0.75 M) قوشۇش ئارقىلىق رېئاكسىيە توختىتىلدى. رېئاكسىيە ئارىلاشمىسىنىڭ سۈمۈرۈلۈشى (A600) UV-160 سپېكتروفوتومېتىرى (شىمادزۇ شىركىتى، ياپونىيە) ئارقىلىق 600 نانومېتىردا ئۆلچەندى. مەدەنىيەت فىلتراتلىرى ۋە ئۆسۈملۈك ئەۋرىشكىلىرىنىڭ مىقدارىنى بەلگىلەشتە PDB ۋە دىستىللانغان سۇ ئايرىم-ئايرىم ھالدا كونترول سۈپىتىدە ئىشلىتىلدى. مەدەنىيەت فىلتراتلىرىدىكى ئوكسالىك كىسلاتا قويۇقلۇقى، PDB مۇھىتىنىڭ ھەر مىللىلىتىرىغا ئوكسالىك كىسلاتاسىنىڭ مىكروگرامى (μg.mL−1) ۋە يوپۇرماق ئېكىستراكتىدىكى ئوكسالىك كىسلاتاسىنىڭ ھەر گرام يېڭى ئېغىرلىقىغا ئوكسالىك كىسلاتاسىنىڭ مىكروگرامى (μg.g−1 FW) سۈپىتىدە ئىپادىلەندى، ئوكسالىك كىسلاتاسىنى تەڭشەش ئەگرى سىزىقى (Thermo Fisher ئىلمىي خىمىيىلىك ماددىلار، ۋالتام، MA، ئامېرىكا) ئارقىلىق بېكىتىلدى.
تەتقىقات جەريانىدا، بارلىق تەجرىبىلەر پۈتۈنلەي تاسادىپىي لايىھە (CRD) شەكلىدە لايىھەلەنگەن بولۇپ، ھەر بىر داۋالاشتا ئالتە بىئولوگىيىلىك تەكرارلاش ۋە ھەر بىر بىئولوگىيىلىك تەكرارلاشتا بەش قازان (ھەر بىر قازاندا ئىككى ئۆسۈملۈك) بار. بىئولوگىيىلىك تەكرارلاشلار ئىككى قېتىم تەھلىل قىلىندى (ئىككى تېخنىكىلىق تەكرارلاش). ئوخشاش تەجرىبىنىڭ قايتا ئىشلەپچىقىرىش ئىقتىدارىنى تەكشۈرۈش ئۈچۈن تېخنىكىلىق تەكرارلاشلار ئىشلىتىلگەن، ئەمما ساختا تەكرارلاشلاردىن ساقلىنىش ئۈچۈن ستاتىستىكىلىق ئانالىزدا ئىشلىتىلمىگەن. سانلىق مەلۇماتلار ئۆزگىرىشچانلىق ئانالىزى (ANOVA) ئارقىلىق ستاتىستىكىلىق تەھلىل قىلىنغاندىن كېيىن، Tukey-Kramer ھەقىقىي مەنىدىكى پەرق (HSD) سىنىقى (p ≤ 0.05) ئىشلىتىلگەن. سىناق نەيچىسىدىكى تەجرىبىلەر ئۈچۈن، IC50 ۋە IC99 قىممەتلىرى probit مودېلى ئارقىلىق ھېسابلىنىپ، %95 ئىشەنچلىك ئارىلىق ھېسابلانغان.
مىسىرنىڭ ئەل غابىييە ۋالىيلىقىدىكى ھەر خىل پۇرچاق ئېتىزلىرىدىن جەمئىي تۆت خىل ئايرىم ماددىسى توپلاندى. PDA مۇھىتىدا، بارلىق ئايرىم ماددىلىرى قايماقسىمان ئاق مىتسېلىي ھاسىل قىلدى، بۇ مىتسېلىي تېزلا پاختا ئاق رەڭگە ئۆزگىرىدۇ (1A-رەسىم)، ئاندىن سكلېروتىيۇم باسقۇچىدا بېج ياكى قوڭۇر رەڭگە ئۆزگىرىدۇ. سكلېروتىيۇم ئادەتتە زىچ، قارا، شار شەكىللىك ياكى نورمالسىز شەكىلدە بولىدۇ، ئۇزۇنلۇقى 5.2 دىن 7.7 مىللىمېتىرغىچە، دىئامېتىرى 3.4 دىن 5.3 مىللىمېتىرغىچە بولىدۇ (1B-رەسىم). گەرچە تۆت ئايرىم 25 ± 2 سېلسىيە گرادۇستا 10-12 كۈن تۇرغۇزۇلغاندىن كېيىن (1A-رەسىم)، مەدەنىيەت مۇھىتىنىڭ چېتىدە سكلېروتىيۇمنىڭ چەت شەكلىنى پەيدا قىلغان بولسىمۇ، ھەر بىر تەخسە سكلېروتىيۇم سانى ئۇلارنىڭ ئارىسىدا كۆرۈنەرلىك پەرقلەنگەن (P < 0.001)، 3-ئايرىم ماددىدا سكلېروتىيۇم سانى ئەڭ كۆپ (ھەر بىر تەخسە 32.33 ± 1.53 سكلېروتىيۇم؛ 1C-رەسىم). شۇنىڭغا ئوخشاش، 3-نومۇرلۇق ئايرىش ماددا PDB دا باشقا ئايرىش ماددىلارغا قارىغاندا كۆپرەك ئوكسالىك كىسلاتا ھاسىل قىلغان (3.33 ± 0.49 μg.mL−1; 1D-رەسىم). 3-نومۇرلۇق ئايرىش ماددا ئۆسۈملۈك كېسەللىكلىرىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدىغان زەمبۇرۇغ Sclerotinia sclerotiorum نىڭ تىپىك مورفولوگىيەلىك ۋە مىكروسكوپلۇق ئالاھىدىلىكلىرىنى كۆرسەتكەن. مەسىلەن، PDA دا، 3-نومۇرلۇق ئايرىش ماددا كولونىيىسى تېز ئۆسكەن، قايماق ئاق (1A-رەسىم)، تەتۈر بېج رەڭلىك ياكى ئوچۇق قىزىل بېلىق سېرىق-قوڭۇر رەڭلىك بولۇپ، 9 سانتىمېتىرلىق دىئامېتىرلىق تاختا يۈزىنى تولۇق يېپىش ئۈچۈن 25 ± 2°C دا 6-7 كۈن ۋاقىت كەتكەن. يۇقىرىدىكى مورفولوگىيەلىك ۋە مىكروسكوپلۇق ئالاھىدىلىكلەرگە ئاساسەن، 3-نومۇرلۇق ئايرىش ماددا Sclerotinia sclerotiorum دەپ ئېنىقلانغان.
1-رەسىم. ئادەتتىكى پۇرچاق ئۆسۈملۈكلىرىدىن ئېلىنغان S. sclerotiorum ئايرىملىرىنىڭ ئالاھىدىلىكى ۋە كېسەللىك پەيدا قىلىش كۈچى. (A) PDA مۇھىتىدا تۆت S. sclerotiorum ئايرىمىنىڭ مىتسېلىيە ئۆسۈشى، (B) تۆت S. sclerotiorum ئايرىمىنىڭ سكلېروتىيىسى، (C) سكلېروتىيا سانى (ھەر بىر تەخسىدە)، (D) PDB مۇھىتىدا ئوكسالىك كىسلاتاسىنىڭ ئاجرىلىپ چىقىشى (μg.mL−1)، ۋە (E) پارنىك شارائىتىدا سەزگۈر سودا پۇرچاق تۈرىدىكى Giza 3 دىكى تۆت S. sclerotiorum ئايرىمىنىڭ كېسەللىك دەرىجىسى (%). قىممەتلەر بەش بىئولوگىيىلىك تەكرارلىنىشنىڭ ئوتتۇرىچە قىممىتى ± SD نى كۆرسىتىدۇ (n = 5). ئوخشىمىغان ھەرپلەر داۋالاش ئۇسۇللىرى ئوتتۇرىسىدىكى ستاتىستىكىلىق جەھەتتىن مۇھىم پەرقنى كۆرسىتىدۇ (p < 0.05). (F–H) 3-قېتىملىق ئايرىم (dpi) بىلەن ئوكۇل قىلىنغاندىن 10 كۈن كېيىن، يەر ئۈستى غولى ۋە سىلىكۇسلاردا ئادەتتىكى ئاق موگۇ ئالامەتلىرى پەيدا بولدى. (I) S. sclerotiorum ئايرىمىسى #3 نىڭ ئىچكى ترانسكرىپسىيە قىلىنغان بوشلۇق (ITS) رايونىنىڭ تەرەققىيات ئانالىزى ئەڭ چوڭ ئېھتىماللىق ئۇسۇلى ئارقىلىق ئېلىپ بېرىلدى ۋە دۆلەتلىك بىئوتېخنىكا ئۇچۇر مەركىزى (NCBI) سانلىق مەلۇمات ئامبىرىدىن (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/) ئېلىنغان 20 خىل پايدىلىنىش ئايرىمىسى/تۈرى بىلەن سېلىشتۇرۇلدى. توپلاش سىزىقلىرىنىڭ ئۈستىدىكى سانلار رايوننىڭ قاپلاش دائىرىسىنى (%)، توپلاش سىزىقلىرىنىڭ ئاستىدىكى سانلار تارماق ئۇزۇنلۇقىنى كۆرسىتىدۇ.
بۇنىڭدىن باشقا، كېسەللىك پەيدا قىلىش ئىقتىدارىنى جەزملەشتۈرۈش ئۈچۈن، ئېرىشكەن تۆت S. sclerotiorum ئايرىمىسى پارنىك شارائىتىدا سەزگۈر سودا لوبيا سورتى Giza 3 نى ئوكۇل قىلىشقا ئىشلىتىلدى، بۇ Koch نىڭ پوستۇلاتى بىلەن ماس كېلىدۇ (1E-رەسىم). ئېرىشكەن بارلىق زەمبۇرۇغ ئايرىمىسى كېسەللىك پەيدا قىلغۇچى بولۇپ، يېشىل لوبياغا يۇقۇملاندۇرۇۋېتىشى مۇمكىن (Cv. Giza 3)، ئوكۇل قىلىنغاندىن كېيىنكى 10 كۈندە (dpi) بارلىق يەر ئۈستى قىسىملىرىدا، بولۇپمۇ غولىدا (1G-رەسىم) ۋە دانچىلاردا (1H-رەسىم) ئاق موگۇ ئالامەتلىرىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىشى مۇمكىن بولسىمۇ، ئايرىمىسى 3 ئىككى مۇستەقىل سىناقتا ئەڭ ئاكتىپ ئايرىمىسى بولدى. ئايرىمىسى 3 لوبيا ئۆسۈملۈكلىرىدە ئەڭ يۇقىرى كېسەللىك دەرىجىسى (%) (يۇقۇملانغاندىن كېيىنكى 7، 14 ۋە 21 كۈندە ئايرىم-ئايرىم ھالدا 24.0 ± 4.0، 58.0 ± 2.0 ۋە 76.7 ± 3.1) بولغان؛ 1F-رەسىم).
ئەڭ تاجاۋۇزچى S. sclerotiorum ئايرىمىسى #3 نىڭ ئېنىقلىنىشى ئىچكى ترانسكرىپسىيە قىلىنغان بوشلۇق (ITS) تەرتىپىگە ئاساسەن تېخىمۇ دەلىللەندى (1I-رەسىم). ئايرىمىسى #3 بىلەن 20 خىل پايدىلىنىش ئايرىمىسى/تۈرى ئوتتۇرىسىدىكى فىلوگېنېتىك ئانالىز ئۇلارنىڭ ئوتتۇرىسىدا يۇقىرى ئوخشاشلىقنى (>99%) كۆرسەتتى. شۇنىڭغا دىققەت قىلىشقا ئەرزىيدىغىنى شۇكى، S. sclerotiorum ئايرىمىسى #3 (533 bp) قۇرۇق نوخۇت ئۇرۇقىدىن ئايرىۋېلىنغان ئامېرىكا S. sclerotiorum ئايرىمىسى LPM36 (GenBank تىزىملىتىش نومۇرى MK896659.1؛ 540 bp) ۋە جۇڭگو S. sclerotiorum ئايرىمىسى YKY211 (GenBank تىزىملىتىش نومۇرى OR206374.1؛ 548 bp) بىلەن يۇقىرى ئوخشاشلىققا ئىگە، بۇ بىنەپشە (Matthiola incana) غولىنىڭ چىرىشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ، بۇلارنىڭ ھەممىسى دېندروگراممىنىڭ ئۈستى تەرىپىدە ئايرىم گۇرۇپپىلىنىدۇ (1I-رەسىم). يېڭى تەرتىپ NCBI سانلىق مەلۇمات ئامبىرىغا كىرگۈزۈلدى ۋە «Sclerotinia sclerotiorum – izolate YN-25» (GenBank تىزىملىتىش نومۇرى PV202792) دەپ ئاتىلدى. بۇنىڭدىن كۆرۈۋېلىشقا بولىدۇكى، 3-ئىزولياتور ئەڭ تاجاۋۇزچىلىق خاراكتېرلىك ئىزولياتور؛ شۇڭا بۇ ئىزولياتور كېيىنكى بارلىق سىناقلاردا تەتقىقات ئۈچۈن تاللاندى.
دىئامىن L-ئورنىتىن (Sigma-Aldrich, Darmstadt, گېرمانىيە) نىڭ S. sclerotiorum ئايرىمىسى 3 گە قارشى ھەر خىل قويۇقلۇقتىكى (12.5، 25، 50، 75، 100 ۋە 125 mg/L) باكتېرىيەگە قارشى تۇرۇش ئىقتىدارى سىناق نەيچىسىدە تەكشۈرۈلدى. دىققەت قىلىشقا ئەرزىيدىغىنى شۇكى، L-ئورنىتىن باكتېرىيەگە قارشى تۇرۇش ئۈنۈمىنى كۆرسىتىپ، S. sclerotiorum hyphae نىڭ رادىئاتسىيەلىك ئۆسۈشىنى دورا مىقدارىغا باغلىق ئۇسۇلدا ئاستا-ئاستا چەكلىدى (2A، B-رەسىم). سىناق قىلىنغان ئەڭ يۇقىرى قويۇقلۇقتا (125 mg/L)، L-ئورنىتىن ئەڭ يۇقىرى مىتسېلىيە ئۆسۈشىنى چەكلەش نىسبىتىنى (99.62 ± 0.27%؛ 2B-رەسىم) كۆرسەتتى، بۇ سىناق قىلىنغان ئەڭ يۇقىرى قويۇقلۇقتا (10 mg/L) سودا خاراكتېرلىك زەمبۇرۇغ دورىسى Rizolex-T غا باراۋەر (توختاش نىسبىتى 99.45 ± 0.39%؛ 2C-رەسىم)، بۇ ئوخشاش ئۈنۈمنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.
2-رەسىم. L-ئورنىتىننىڭ Sclerotinia sclerotiorum غا قارشى سىناق نەيچىسىدىكى باكتېرىيەگە قارشى تۇرۇش ئاكتىپلىقى. (A) سودا خاراكتېرلىك زەمبۇرۇغقا قارشى Rizolex-T (10 mg/L) بىلەن S. sclerotiorum غا قارشى ھەر خىل قويۇقلۇقتىكى L-ئورنىتىننىڭ باكتېرىيەگە قارشى تۇرۇش ئاكتىپلىقىنى سېلىشتۇرۇش. (B, C) ئايرىم-ئايرىم ھالدا ھەر خىل قويۇقلۇقتىكى L-ئورنىتىن (12.5، 25، 50، 75، 100 ۋە 125 mg/L) ياكى Rizolex-T (2، 4، 6، 8 ۋە 10 mg/L) بىلەن داۋالانغاندىن كېيىنكى S. sclerotiorum مىتسېليال ئۆسۈشىنىڭ چەكلىنىش نىسبىتى (%). قىممەتلەر بەش خىل بىئولوگىيىلىك تەكرارلىنىشنىڭ ئوتتۇرىچە قىممىتىنى كۆرسىتىدۇ (n = 5). ھەر خىل ھەرپلەر داۋالاش ئۇسۇللىرى ئوتتۇرىسىدىكى ستاتىستىكىلىق پەرقنى كۆرسىتىدۇ (p < 0.05). (D, E) ئايرىم-ئايرىم ھالدا L-ئورنىتىن ۋە سودا خاراكتېرلىك زەمبۇرۇغقا قارشى Rizolex-T نىڭ Probit مودېل رېگرېسسىيە ئانالىزى. probit مودېلىنىڭ رېگرېسسىيە سىزىقى كۆك رەڭلىك پۈتۈن سىزىق، ئىشەنچلىك ئارىلىقى (%95) بولسا قىزىل سىزىق شەكلىدە كۆرسىتىلدى.
بۇنىڭدىن باشقا، probit رېگرېسسىيە ئانالىزى ئېلىپ بېرىلدى ۋە ماس كېلىدىغان جەدۋەللەر 1-جەدۋەل ۋە 2D، E رەسىملىرىدە كۆرسىتىلدى. قىسقىسى، L-ئورنىتىننىڭ قوبۇل قىلىنىدىغان يانتۇلۇق قىممىتى (y = 2.92x − 4.67) ۋە مۇناسىۋەتلىك مۇھىم ستاتىستىكىلار (Cox & Snell R2 = 0.3709, Nagelkerke R2 = 0.4998 ۋە p < 0.0001; 2D رەسىم) سودا خاراكتېرلىك زەمبۇرۇغقا قارشى دورى Rizolex-T غا سېلىشتۇرغاندا (y = 1.96x − 0.99, Cox & Snell R2 = 0.1242, Nagelkerke R2 = 0.1708 ۋە p < 0.0001) S. sclerotiorum غا قارشى زەمبۇرۇغقا قارشى تۇرۇش ئۈنۈمىنىڭ ئاشقانلىقىنى كۆرسەتتى (1-جەدۋەل).
1-جەدۋەل. S. sclerotiorum غا قارشى L-ئورنىتىن ۋە سودا خاراكتېرلىك «Rizolex-T» زەمبۇرۇغقا قارشى دورىسىنىڭ يېرىم ئەڭ يۇقىرى چەكلىمە قويۇقلۇقى (IC50) ۋە IC99 (mg/l) قىممىتى.
ئومۇمەن قىلىپ ئېيتقاندا، L-ئورنىتىن (250 مىللىگرام/لىتىر) داۋالانمىغان S. sclerotiorum يۇقۇملانغان ئۆسۈملۈكلەرگە سېلىشتۇرغاندا، داۋالانغان ئادەتتىكى لوبيا ئۆسۈملۈكلىرىدىكى ئاق موگۇنىڭ پەيدا بولۇشى ۋە ئېغىرلىق دەرىجىسىنى كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە تۆۋەنلىتىدۇ (كونترول؛ 3A-رەسىم). قىسقىسى، داۋالانمىغان يۇقۇملانغان كونترول ئۆسۈملۈكلىرىنىڭ كېسەللىك ئېغىرلىق دەرىجىسى تەدرىجىي ئاشقان بولسىمۇ (52.67 ± 1.53، 83.21 ± 2.61 ۋە 92.33 ± 3.06%)، L-ئورنىتىن داۋالاشتىن كېيىنكى 7، 14 ۋە 21-كۈنلەردە (dpt) تەجرىبە جەريانىدا كېسەللىك ئېغىرلىق دەرىجىسىنى (%) كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە تۆۋەنلىتىدۇ (8.97 ± 0.15، 18.00 ± 1.00 ۋە 26.36 ± 3.07). شۇنىڭغا ئوخشاش، S. sclerotiorum يۇقۇملانغان پۇرچاق ئۆسۈملۈكلىرىگە 250 mg/L L-ئورنىتىن بېرىلگەندە، كېسەللىكنىڭ ئىلگىرىلەش ئەگرى سىزىقى ئاستىدىكى كۆلەم (AUDPC) داۋالانمىغان كونترول گۇرۇپپىسىدىكى 1274.33 ± 33.13 دىن 281.03 ± 7.95 گىچە تۆۋەنلىگەن، بۇ مۇسبەت كونترول گۇرۇپپىسىدىكى 50 mg/L Rizolex-T زەمبۇرۇغقا قارشى دورىسىدىن (183.61 ± 7.71؛ 3B-رەسىم) سەل تۆۋەن. ئىككىنچى سىناقتىمۇ ئوخشاش يۈزلىنىش كۆزىتىلدى.
رەسىم 3. ئىسسىقخانا شارائىتىدا Sclerotinia sclerotiorum كەلتۈرۈپ چىقارغان ئادەتتىكى لوبيانىڭ ئاق چىرىش كېسىلىنىڭ تەرەققىياتىغا L-ئورنىتىننىڭ سىرتقى ئىشلىتىلىشىنىڭ تەسىرى. (A) 250 mg/L L-ئورنىتىن بىلەن داۋالانغاندىن كېيىنكى ئادەتتىكى لوبيانىڭ ئاق قېلىپىنىڭ كېسەللىك ئىلگىرىلەش ئەگرى سىزىقى. (B) L-ئورنىتىن بىلەن داۋالانغاندىن كېيىنكى ئادەتتىكى لوبيانىڭ ئاق قېلىپىنىڭ كېسەللىك ئىلگىرىلەش ئەگرى سىزىقى (AUDPC) ئاستىدىكى رايون. قىممەتلەر بەش بىئولوگىيىلىك تەكرارلىنىشنىڭ ئوتتۇرىچە قىممىتى ± SD نى كۆرسىتىدۇ (n = 5). ئوخشىمىغان ھەرپلەر داۋالاش ئۇسۇللىرى ئوتتۇرىسىدىكى ستاتىستىكىلىق جەھەتتىن مۇھىم پەرقلەرنى كۆرسىتىدۇ (p < 0.05).
250 مىللىگرام/لىتىر L-ئورنىتىننى سىرتقى ئىشلىتىش 42 كۈندىن كېيىن ئۆسۈملۈكنىڭ ئېگىزلىكىنى (4A-رەسىم)، ھەر بىر ئۆسۈملۈكتىكى شاخ سانىنى (4B-رەسىم) ۋە ھەر بىر ئۆسۈملۈكتىكى يوپۇرماق سانىنى (4C-رەسىم) ئاستا-ئاستا ئاشۇردى. سودا خاراكتېرلىك زەمبۇرۇغقا قارشى دورى Rizolex-T (50 مىللىگرام/لىتىر) تەتقىق قىلىنغان بارلىق ئوزۇقلۇق پارامېتىرلىرىغا ئەڭ چوڭ تەسىر كۆرسەتكەن بولسىمۇ، 250 مىللىگرام/لىتىر L-ئورنىتىننى سىرتقى ئىشلىتىش داۋالانمىغان كونترول گۇرۇپپىسىغا سېلىشتۇرغاندا ئىككىنچى چوڭ تەسىرگە ئىگە بولدى (4A-C-رەسىملەر). يەنە بىر تەرەپتىن، L-ئورنىتىن بىلەن داۋالاش فوتوسىنتېز پىگمېنتلىرى خىلوروفىل a (4D-رەسىم) ۋە خىلوروفىل b (4E-رەسىم) نىڭ مىقدارىغا كۆرۈنەرلىك تەسىر كۆرسەتمىدى، ئەمما مەنپىي كونترول (0.44 ± 0.02 mg/g fr wt) ۋە مۇسبەت كونترول (0.46 ± 0.02 mg/g fr wt; 4F-رەسىم) بىلەن سېلىشتۇرغاندا، ئومۇمىي كاروتېنوئىد مىقدارىنى (0.56 ± 0.03 mg/g fr wt) ئازراق ئاشۇردى. ئومۇمەن قىلىپ ئېيتقاندا، بۇ نەتىجىلەر L-ئورنىتىننىڭ داۋالانغان پۇرچاق ئۆسۈملۈكلىرىگە ئۆسۈملۈك زەھەرلىك ئەمەسلىكىنى، ھەتتا ئۇلارنىڭ ئۆسۈشىنى قوزغىتىشى مۇمكىنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.
رەسىم 4. ئىسسىقخانا شارائىتىدا Sclerotinia sclerotiorum بىلەن يۇقۇملانغان لوبيا يوپۇرمىقىنىڭ ئۆسۈش ئالاھىدىلىكى ۋە فوتوسىنتېز پىگمېنتلىرىغا سىرتقى L-ئورنىتىن ئىشلىتىشنىڭ تەسىرى. (A) ئۆسۈملۈك ئېگىزلىكى (cm)، (B) ھەر بىر ئۆسۈملۈكتىكى شاخ سانى، (C) ھەر بىر ئۆسۈملۈكتىكى يوپۇرماق سانى، (D) خىلوروفىل a مىقدارى (mg g-1 fr wt)، (E) خىلوروفىل b مىقدارى (mg g-1 fr wt)، (F) ئومۇمىي كاروتىنوئىد مىقدارى (mg g-1 fr wt). قىممەتلەر بەش بىئولوگىيىلىك تەكرارلىنىشنىڭ ئوتتۇرىچە قىممىتى ± SD (n = 5). ئوخشىمىغان ھەرپلەر داۋالاش ئۇسۇللىرى ئوتتۇرىسىدىكى ستاتىستىكىلىق جەھەتتىن مۇھىم پەرقلەرنى كۆرسىتىدۇ (p < 0.05).
ئاكتىپ ئوكسىگېن تۈرلىرىنىڭ (ROS؛ ۋودورود پېروكسىد [H2O2] شەكلىدە ئىپادىلىنىدۇ) ۋە ئەركىن رادىكاللارنىڭ (سۇپېرئوكسىد ئانيونلىرى [O2•−] شەكلىدە ئىپادىلىنىدۇ) ئورنىدا گىستوخىمىيىلىك ئورنىتىلىشى، L-ئورنىتىن (250 mg/L) سىرتقى ئىشلىتىشنىڭ H2O2 (96.05 ± 5.33 nmol.g−1 FW؛ 5A-رەسىم) ۋە O2•− (32.69 ± 8.56 nmol.g−1 FW؛ 5B-رەسىم) نىڭ توپلىنىشىنى داۋالانمىغان يۇقۇملانغان ئۆسۈملۈكلەر (ئايرىم-ئايرىم ھالدا 173.31 ± 12.06 ۋە 149.35 ± 7.94 nmol.g−1 FW) ۋە 50 mg/L سودا زەمبۇرۇغقا قارشى دورىسى Rizolex-T بىلەن داۋالانغان ئۆسۈملۈكلەر (ئايرىم-ئايرىم ھالدا 170.12 ± 9.50 ۋە 157.00 ± 7.81 nmol.g−1 fr wt) بىلەن سېلىشتۇرغاندا كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە ئازايتقانلىقىنى كۆرسەتتى. 72 سائەتتە. hpt ئاستىدا يۇقىرى مىقداردا H2O2 ۋە O2•− توپلانغان (5A، B-رەسىم). شۇنىڭغا ئوخشاش، TCA ئاساسلىق مالوندىئالدېھىد (MDA) سىنىقى S. sclerotiorum يۇقۇملانغان پۇرچاق ئۆسۈملۈكلىرىنىڭ يوپۇرمىقىدا يۇقىرى مىقداردا MDA توپلىغانلىقىنى كۆرسەتتى (113.48 ± 10.02 nmol.g fr wt) (5C-رەسىم). قانداقلا بولمىسۇن، L-ئورنىتىننىڭ سىرتقى ئىشلىتىلىشى ماي پېروكسىدلىنىشىنى كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە تۆۋەنلىتىدۇ، بۇنى داۋالانغان ئۆسۈملۈكلەردە MDA مىقدارىنىڭ تۆۋەنلىشى (33.08 ± 4.00 nmol.g fr wt) كۆرسىتىپ بېرىدۇ.
رەسىم 5. پارنىك شارائىتىدا يۇقۇملانغاندىن كېيىنكى 72 سائەت ئىچىدە S. sclerotiorum بىلەن يۇقۇملانغان لوبيا يوپۇرمىقىدىكى ئوكسىدلىنىش سترېسىنىڭ ئاساسلىق بەلگىلىرى ۋە ئېنزىمسىز ئوكسىدلىنىشقا قارشى تۇرۇش مۇداپىئە مېخانىزمىغا سىرتقى L-ئورنىتىن ئىشلىتىشنىڭ تەسىرى. (A) 72 ئات كۈچىدە ۋودورود پېروكسىد (H2O2; nmol g−1 FW)، (B) 72 ئات كۈچىدە سۇپېرئوكسىد ئانيون (O2•−; nmol g−1 FW)، (C) 72 ئات كۈچىدە مالوندىئالدېھىد (MDA; nmol g−1 FW)، (D) 72 ئات كۈچىدە ئومۇمىي ئېرىيدىغان فېنوللار (mg GAE g−1 FW)، (E) 72 ئات كۈچىدە ئومۇمىي ئېرىيدىغان فلاۋونوئىدلار (mg RE g−1 FW)، (F) 72 ئات كۈچىدە ئومۇمىي ئەركىن ئامىنو كىسلاتالار (mg g−1 FW)، ۋە (G) 72 ئات كۈچىدە پرولىن مىقدارى (mg g−1 FW). قىممەتلەر 5 بىئولوگىيىلىك تەكرارلىنىشنىڭ ئوتتۇرىچە قىممىتى ± ئۆلچەملىك چەتنىشىش (ئوتتۇرىچە قىممەت ± SD) نى كۆرسىتىدۇ (n = 5). ھەرپلەر داۋالاش ئۇسۇللىرى ئوتتۇرىسىدىكى ستاتىستىكىلىق جەھەتتىن مۇھىم پەرقلەرنى كۆرسىتىدۇ (p < 0.05).