Nature.com غا كىرگىنىڭىزگە رەھمەت. سىز ئىشلىتىۋاتقان تور كۆرگۈچ نۇسخىسىدا CSS نى قوللاش چەكلىك. ئەڭ ياخشى تەجرىبە ئۈچۈن، يېڭىلانغان تور كۆرگۈچ ئىشلىتىشىڭىزنى (ياكى Internet Explorer دا ماسلىشىشچانلىق ھالىتىنى ئېتىۋېتىشىڭىزنى) تەۋسىيە قىلىمىز. بۇ ئارىلىقتا، داۋاملىق قوللاشنى كاپالەتلەندۈرۈش ئۈچۈن، تور بېكەتنى ئۇسلۇب ۋە JavaScriptسىز كۆرسىتىمىز.
يۇقىرى يۈكلەش مىقدارىغا ئىگە ئىنسۇلىن نانو زەررىچىلىرى (NPs) ھەر خىل دورا شەكلىدە ئوخشىمىغان قوللىنىشچانلىقلارغا ئېرىشتى. بۇ ئەسەرنىڭ مەقسىتى توڭلىتىش ۋە پۈركۈش ئارقىلىق قۇرۇتۇش جەريانلىرىنىڭ ئىنسۇلىن قوشۇلغان خىتوسان نانو زەررىچىلىرىنىڭ قۇرۇلمىسىغا بولغان تەسىرىنى باھالاش، بۇنىڭدا ماننىتول توڭلىتىش قوغدىغۇچىسى سۈپىتىدە ئىشلىتىلىدۇ ياكى ئىشلىتىلمەيدۇ. بىز يەنە بۇ نانو زەررىچىلىرىنى قايتا ئېرىتىش ئارقىلىق ئۇلارنىڭ سۈپىتىنى باھالىدۇق. سۇسىزلاندۇرۇشتىن ئىلگىرى، خىتوسان/ناترىي ترىپولىفوسفات/ئىنسۇلىن ئۆزئارا باغلىنىشلىق نانو زەررىچىلىرىنىڭ زەررىچە چوڭلۇقى 318 نانومېتىر، PDI 0.18، قاپلاش ئۈنۈمى 99.4%، يۈكلەش نىسبىتى 25.01% بولۇپ ئەلالاشتۇرۇلدى. قايتا قۇرۇلغاندىن كېيىن، ماننىتول ئىشلەتمەي توڭلىتىش ئارقىلىق ئىشلەپچىقىرىلغان نانو زەررىچىلەردىن باشقا بارلىق نانو زەررىچىلەر شار شەكىللىك زەررىچە قۇرۇلمىسىنى ساقلاپ قالدى. ھەر ئىككى خىل پۈركۈش ئارقىلىق سۇسىزلاندۇرۇلغان ماننىتول تەركىبىدىكى نانو زەررىچىلەرگە سېلىشتۇرغاندا، ماننىتولسىز پۈركۈش ئارقىلىق قۇرۇتۇلغان نانو زەررىچىلىرىمۇ ئەڭ كىچىك ئوتتۇرىچە زەررىچە چوڭلۇقى (376 نانومېتىر) ۋە ئەڭ يۇقىرى يۈكلەش نىسبىتىنى كۆرسەتتى. تەركىبى (25.02%) ئوخشاش كاپسۇللاش نىسبىتى (98.7%) ۋە PDI (0.20) بىلەن قۇرۇتۇش ياكى توڭلىتىش ئۇسۇلى ئارقىلىق ھاسىل قىلىندى. ماننىتولسىز پۈركۈپ قۇرۇتۇش ئارقىلىق قۇرۇتۇلغان نانو زەررىچىلەر ئىنسۇلىننىڭ ئەڭ تېز قويۇپ بېرىلىشى ۋە ھۈجەيرىلەرنىڭ سۈمۈرۈلۈش ئۈنۈمىنىڭ ئەڭ يۇقىرى بولۇشىغا ئېلىپ كەلدى. بۇ تەتقىقات شۇنى كۆرسىتىپ بېرىدۇكى، پۈركۈپ قۇرۇتۇش ئەنئەنىۋى توڭلىتىش ئۇسۇلىغا سېلىشتۇرغاندا توڭلىتىشقا قارشى تۇرغۇچى ماددىلارغا ئېھتىياجلىق بولماي تۇرۇپ ئىنسۇلىن نانو زەررىچىلىرىنى سۇسىزلاندۇرالايدۇ، بۇنىڭ بىلەن يۈكلەش سىغىمى چوڭىيىدۇ، قوشۇمچە ماددىلارغا بولغان ئېھتىياج تۆۋەنلەيدۇ ۋە ئىشلىتىش تەننەرخى زور ئەۋزەللىككە ئىگە بولىدۇ.
1922-يىلى بايقالغاندىن بۇيان، ئىنسۇلىن ۋە ئۇنىڭ دورا تەييارلاش ئۇسۇللىرى 1-تىپلىق دىئابېت (T1DM) ۋە 2-تىپلىق دىئابېت (T1DM) بىمارلىرىنىڭ ھاياتىنى قۇتقۇزۇپ قالدى. قانداقلا بولمىسۇن، ئىنسۇلىن يۇقىرى مولېكۇلا ئېغىرلىقتىكى ئاقسىل بولۇش خۇسۇسىيىتى سەۋەبىدىن، ئاسانلا توپلىنىپ، ئاقسىل ئېرىتكۈچى ئېنزىملار تەرىپىدىن پارچىلىنىپ، تۇنجى قېتىملىق ئۆتۈش ئۈنۈمى بىلەن يوقىتىلىدۇ. 1-تىپلىق دىئابېت دەپ دىئاگنوز قويۇلغان كىشىلەر ئۆمرىنىڭ قالغان قىسمىدا ئىنسۇلىن ئوكۇلىغا موھتاج. دەسلەپتە 2-تىپلىق دىئابېت دەپ دىئاگنوز قويۇلغان نۇرغۇن بىمارلار ئۇزۇن مۇددەتلىك ئىنسۇلىن ئوكۇلىغا موھتاج. كۈندىلىك ئىنسۇلىن ئوكۇلى بۇ كىشىلەر ئۈچۈن كۈندىلىك ئاغرىق ۋە راھەتسىزلىكنىڭ ئېغىر مەنبەسى بولۇپ، روھىي ساغلاملىققا سەلبىي تەسىر كۆرسىتىدۇ. نەتىجىدە، ئېغىز ئارقىلىق ئىنسۇلىن بېرىش قاتارلىق ئازراق راھەتسىزلىك پەيدا قىلىدىغان باشقا ئىنسۇلىن ئىشلىتىش شەكىللىرى كەڭ كۆلەمدە تەتقىق قىلىنىۋاتىدۇ. چۈنكى ئۇلار دۇنيا مىقياسىدا تەخمىنەن 5 مىليارد دىئابېت كېسىلىگە گىرىپتار بولغان ئادەمنىڭ تۇرمۇش سۈپىتىنى ئەسلىگە كەلتۈرۈش ئىقتىدارىغا ئىگە.
نانو زەررىچە تېخنىكىسى ئېغىزدىن ئىنسۇلىن قوبۇل قىلىش سىناقلىرىدا زور ئىلگىرىلەشلەرنى قولغا كەلتۈردى4،6،7. بۇ تېخنىكا ئىنسۇلىننى ئۈنۈملۈك قاپلاپ، ئۇنىڭ پارچىلىنىشىدىن ساقلايدۇ، بۇنىڭ بىلەن بەدەننىڭ مەلۇم ئورۇنلىرىغا نىشانلىق يەتكۈزۈلىدۇ. قانداقلا بولمىسۇن، نانو زەررىچە فورمۇلاسىنى ئىشلىتىشنىڭ بىر قانچە چەكلىمىسى بار، ئاساسلىقى زەررىچە سۇسپېنزىيەسىنىڭ مۇقىملىقى مەسىلىسى سەۋەبىدىن. ساقلاش جەريانىدا بەزى يىغىلىشلار يۈز بېرىشى مۇمكىن، بۇ ئىنسۇلىن قاچىلانغان نانو زەررىچىلەرنىڭ بىئولوگىيىلىك ئىشلىتىلىشچانلىقىنى تۆۋەنلىتىدۇ8. بۇنىڭدىن باشقا، ئىنسۇلىن نانو زەررىچىلىرىنىڭ (NPs) مۇقىملىقىغا كاپالەتلىك قىلىش ئۈچۈن نانو زەررىچىلەر ۋە ئىنسۇلىننىڭ پولىمېر ماترىتسىسىنىڭ خىمىيىلىك مۇقىملىقىنىمۇ ئويلىشىش كېرەك. ھازىر، توڭلىتىپ قۇرۇتۇش تېخنىكىسى ساقلاش جەريانىدا كېرەكسىز ئۆزگىرىشلەرنىڭ ئالدىنى ئېلىش بىلەن بىرگە مۇقىم NPs ھاسىل قىلىشنىڭ ئالتۇن ئۆلچىمى9.
قانداقلا بولمىسۇن، توڭلىتىپ قۇرۇتۇش ئۈچۈن، مۇز كىرىستاللىرىنىڭ مېخانىكىلىق بېسىمىنىڭ تەسىرىگە ئۇچرايدىغان NP لارنىڭ شار شەكىللىك قۇرۇلمىسىنىڭ تەسىرىگە ئۇچرىشىنىڭ ئالدىنى ئېلىش ئۈچۈن توڭلىتىشقا قارشى تۇرغۇچى ماددىلارنى قوشۇش كېرەك. بۇ، توڭلىتىشقا قارشى تۇرغۇچى ماددا ئېغىرلىق نىسبىتىنىڭ كۆپ قىسمىنى ئىگىلەيدىغان بولغاچقا، لىئوفىللاشتۇرۇلغاندىن كېيىن ئىنسۇلىن نانو زەررىچىلىرىنىڭ يۈكىنى كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە ئازايتىدۇ. شۇڭلاشقا، ئىنسۇلىننىڭ داۋالاش مەزگىلىگە يېتىش ئۈچۈن كۆپ مىقداردا قۇرۇق نانو زەررىچىلەرگە ئېھتىياجلىق بولغاچقا، ئىشلەپچىقىرىلغان ئىنسۇلىن NP لىرى كۆپىنچە قۇرۇق پاراشوك فورمۇلالىرىنى، مەسىلەن ئېغىزدىن ئىچىلىدىغان تابلېتكا ۋە ئېغىزدىن ئىچىلىدىغان پىلاستىنكىلارنى ئىشلەپچىقىرىشقا ماس كەلمەيدۇ.
پۈركۈپ قۇرۇتۇش دورىگەرلىك سانائىتىدە سۇيۇق باسقۇچلاردىن قۇرۇق پاراشوك ئىشلەپچىقىرىشنىڭ داڭلىق ۋە ئەرزان سانائەت كۆلىمىدىكى جەريانى10،11. زەررىچە شەكىللىنىش جەريانىنى كونترول قىلىش بىر قانچە بىئولوگىيىلىك ئاكتىپ بىرىكمىلەرنى مۇۋاپىق قاپلاشقا يول قويىدۇ12،13. بۇنىڭدىن باشقا، ئۇ ئېغىزدىن ئىچىلىدىغان قاپلانغان ئاقسىللارنى تەييارلاشنىڭ ئۈنۈملۈك تېخنىكىسىغا ئايلاندى. پۈركۈپ قۇرۇتۇش جەريانىدا، سۇ ناھايىتى تېز پارغا ئايلىنىدۇ، بۇ زەررىچە يادروسىنىڭ تېمپېراتۇرىسىنى تۆۋەن تۇتۇشقا ياردەم بېرىدۇ11،14، بۇنىڭ بىلەن ئىسسىقلىققا سەزگۈر تەركىبلەرنى قاپلاشقا بولىدۇ. پۈركۈپ قۇرۇتۇشتىن بۇرۇن، قاپلاش ماتېرىيالى قاپلانغان تەركىبلەرنى ئۆز ئىچىگە ئالغان ئېرىتمە بىلەن تولۇق بىر خىل ھالەتكە كەلتۈرۈلۈشى كېرەك11،14. توڭلىتىپ قۇرۇتۇشتىن پەرقلىق ھالدا، پۈركۈپ قۇرۇتۇشتا قاپلاشتىن بۇرۇن بىر خىل ھالەتكە كەلتۈرۈش سۇسىزلىنىش جەريانىدا قاپلاش ئۈنۈمىنى ئۆستۈرىدۇ. پۈركۈپ قۇرۇتۇش قاپلاش جەريانى توڭلىتىشقا قارشى تۇرغۇچى ماددىلارنى تەلەپ قىلمىغاچقا، پۈركۈپ قۇرۇتۇش ئارقىلىق يۇقىرى يۈك مىقدارىغا ئىگە قۇرۇتۇلغان NP ئىشلەپچىقىرىشقا بولىدۇ.
بۇ تەتقىقات ئىئون گېلى ئۇسۇلى ئارقىلىق خىتوسان ۋە ناترىي ئۈچپولىفوسفاتنى ئۆزئارا باغلاش ئارقىلىق ئىنسۇلىن قاچىلانغان NP لارنى ئىشلەپچىقىرىشنى دوكلات قىلىدۇ. ئىئون گېلى مەلۇم شارائىتتا ئىككى ياكى ئۇنىڭدىن ئارتۇق ئىئون تۈرى ئوتتۇرىسىدىكى ئېلېكتروستاتىك ئۆز-ئارا تەسىر ئارقىلىق نانو زەررىچىلەرنى ئىشلەپچىقىرىشقا يول قويىدىغان بىر خىل تەييارلاش ئۇسۇلى. ئەڭ ياخشىلانغان خىتوسان/ناترىي ئۈچپولىفوسفات/ئىنسۇلىن ئۆزئارا باغلىنىشلىق نانو زەررىچىلەرنى سۇسىزلاندۇرۇش ئۈچۈن توڭلىتىپ قۇرۇتۇش ۋە پۈركۈپ قۇرۇتۇش تېخنىكىسى قوللىنىلدى. سۇسىزلاندۇرۇلغاندىن كېيىن، ئۇلارنىڭ شەكلى SEM ئارقىلىق تەھلىل قىلىندى. ئۇلارنىڭ قايتا بىرىكتۈرۈش ئىقتىدارى ئۇلارنىڭ چوڭ-كىچىكلىكىنىڭ تارقىلىشى، يۈزەكى زەررىچىسى، PDI، قاپلاش ئۈنۈمى ۋە يۈكلەش مىقدارىنى ئۆلچەش ئارقىلىق باھالاندى. ھەر خىل سۇسىزلاندۇرۇش ئۇسۇللىرى ئارقىلىق ھاسىل قىلىنغان قايتا ئېرىگەن نانو زەررىچىلەرنىڭ سۈپىتى يەنە ئۇلارنىڭ ئىنسۇلىننى قوغداش، قويۇپ بېرىش خۇسۇسىيىتى ۋە ھۈجەيرە قوبۇل قىلىش ئۈنۈمىنى سېلىشتۇرۇش ئارقىلىق باھالاندى.
ئارىلاشما ئېرىتمىنىڭ pH قىممىتى ۋە خىتوسان بىلەن ئىنسۇلىننىڭ نىسبىتى ئاخىرقى NP لارنىڭ زەررىچە چوڭلۇقى ۋە قاپلاش ئۈنۈمىگە (EE) تەسىر كۆرسىتىدىغان ئىككى مۇھىم ئامىل بولۇپ، ئۇلار ئىئونوتروپىك گېللىنىش جەريانىغا بىۋاسىتە تەسىر كۆرسىتىدۇ. ئارىلاشما ئېرىتمىنىڭ pH قىممىتى زەررىچە چوڭلۇقى ۋە قاپلاش ئۈنۈمى بىلەن زىچ مۇناسىۋەتلىك ئىكەنلىكى كۆرسىتىلدى (1a-رەسىم). 1a-رەسىمدە كۆرسىتىلگەندەك، pH قىممىتى 4.0 دىن 6.0 گىچە ئۆرلىگەندە، ئوتتۇرىچە زەررىچە چوڭلۇقى (nm) تۆۋەنلىگەن ۋە EE كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە ئاشقان، pH قىممىتى 6.5 گە ئۆرلىگەندە، ئوتتۇرىچە زەررىچە چوڭلۇقى ئېشىشقا باشلىغان ۋە EE ئۆزگەرمىگەن. خىتوسان بىلەن ئىنسۇلىننىڭ نىسبىتى ئاشقاندا، ئوتتۇرىچە زەررىچە چوڭلۇقىمۇ ئاشقان. بۇنىڭدىن باشقا، خىتوسان/ئىنسۇلىننىڭ ماسسا نىسبىتى 2.5:1 دىن (w/w) يۇقىرى بولغاندا نانو زەررىچىلەر تەييارلانغاندا EE دا ھېچقانداق ئۆزگىرىش كۆرۈلمىگەن (1b-رەسىم). شۇڭا، بۇ تەتقىقاتتا ئەڭ ياخشى تەييارلاش شارائىتى (pH قىممىتى 6.0، خىتوسان/ئىنسۇلىننىڭ ماسسا نىسبىتى 2.5:1) ئىنسۇلىن قاچىلانغان نانو زەررىچىلەرنى تېخىمۇ چوڭقۇر تەتقىق قىلىش ئۈچۈن تەييارلاشقا ئىشلىتىلدى. بۇ تەييارلاش شەرتى ئاستىدا، ئىنسۇلىن نانو زەررىچىلىرىنىڭ ئوتتۇرىچە زەررىچە چوڭلۇقى 318 نانومېتىر (1c-رەسىم)، PDI 0.18، كىرگۈزۈش ئۈنۈمى 99.4%، زېتا پوتېنسىيالى 9.8 mv ۋە ئىنسۇلىن يۈكلىنىشى 25.01% (m/m) بولدى. ئېلېكترونلۇق مىكروسكوپ (TEM) نەتىجىسىگە ئاساسلانغاندا، ئەلالاشتۇرۇلغان نانو زەررىچىلەر تەخمىنەن شار شەكىللىك ۋە ئايرىم بولۇپ، نىسبەتەن بىردەك چوڭلۇقتا ئىدى (1d-رەسىم).
ئىنسۇلىن نانو زەررىچىلىرىنىڭ پارامېتىرىنى ئەلالاشتۇرۇش: (a) خىتوسان ۋە ئىنسۇلىننىڭ 5:1 ماسسا نىسبىتىدە تەييارلانغان ئىنسۇلىن نانو زەررىچىلىرىنىڭ ئوتتۇرىچە دىئامېتىرى ۋە قاپلاش ئۈنۈمىگە (EE) pH قىممىتىنىڭ تەسىرى؛ (b) خىتوسان ۋە ئىنسۇلىننىڭ ماسسا نىسبىتىنىڭ ئىنسۇلىن NP لىرىنىڭ ئوتتۇرىچە دىئامېتىرى ۋە قاپلاش ئۈنۈمىگە (EE) تەسىرى (pH قىممىتى 6 دا تەييارلانغان); (c) ئەلالاشتۇرۇلغان ئىنسۇلىن نانو زەررىچىلىرىنىڭ زەررىچە چوڭلۇقىنىڭ تەقسىملىنىشى؛ (d) ئەلالاشتۇرۇلغان ئىنسۇلىن NP لىرىنىڭ TEM مىكروگرافىيىسى.
خىتوساننىڭ pKa قىممىتى 6.5 بولغان ئاجىز پولىئېلېكترولىت ئىكەنلىكى ھەممىگە مەلۇم. ئۇنىڭ ئاساسلىق ئامىنو گۇرۇپپىسى ھىدروگېن ئىئونلىرى تەرىپىدىن پروتونلاشتۇرۇلغانلىقى ئۈچۈن، ئۇ كىسلاتالىق مۇھىتتا مۇسبەت زەرەتلەنگەن15. شۇڭلاشقا، ئۇ كۆپىنچە مەنپىي زەرەتلەنگەن ماكرومولېكۇلالارنى قاپلاش ئۈچۈن توشۇغۇچى سۈپىتىدە ئىشلىتىلىدۇ. بۇ تەتقىقاتتا، خىتوسان ئىزوئېلېكتر نۇقتىسى 5.3 بولغان ئىنسۇلىننى قاپلاش ئۈچۈن ئىشلىتىلگەن. خىتوسان قاپلاش ماتېرىيالى سۈپىتىدە ئىشلىتىلگەنلىكى ئۈچۈن، ئۇنىڭ نىسبىتى ئاشقانسېرى، نانو زەررىچىلەرنىڭ سىرتقى قەۋىتىنىڭ قېلىنلىقى ماس ھالدا ئېشىپ، ئوتتۇرىچە زەررىچە چوڭلۇقىنىڭ چوڭىيىشىغا سەۋەب بولىدۇ. بۇنىڭدىن باشقا، خىتوساننىڭ يۇقىرى سەۋىيىسى تېخىمۇ كۆپ ئىنسۇلىننى قاپلىيالايدۇ. بىزنىڭ ئەھۋالىمىزدا، خىتوسان بىلەن ئىنسۇلىننىڭ نىسبىتى 2.5:1 گە يەتكەندە، EE ئەڭ يۇقىرى بولغان، نىسبەت داۋاملىق ئاشقاندا، EE دا كۆرۈنەرلىك ئۆزگىرىش بولمىغان.
خىتوسان بىلەن ئىنسۇلىننىڭ نىسبىتىدىن باشقا، pH قىممىتى NP لارنى تەييارلاشتا مۇھىم رول ئوينىدى. گان قاتارلىقلار 17 خىتوسان نانو زەررىچىلىرىنىڭ زەررىچە چوڭلۇقىغا pH نىڭ تەسىرىنى تەتقىق قىلدى. ئۇلار pH قىممىتى 6.0 گە يەتكۈچە زەررىچە چوڭلۇقىنىڭ ئۈزلۈكسىز تۆۋەنلەۋاتقانلىقىنى بايقىدى، ھەمدە pH قىممىتى 6.0 دىن يۇقىرى بولغاندا زەررىچە چوڭلۇقىنىڭ كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە ئاشقانلىقى كۆزىتىلدى، بۇ بىزنىڭ كۆزىتىشىمىزگە ماس كېلىدۇ. بۇ ھادىسە pH قىممىتىنىڭ ئېشىشىغا ئەگىشىپ، ئىنسۇلىن مولېكۇلاسىنىڭ مەنپىي يۈزەكى زەرەتكە ئىگە بولۇشى، شۇڭا خىتوسان/ناترىي ترىپولىفوسفات (TPP) بىرىكمىسى بىلەن ئېلېكتروستاتىك ئۆزئارا تەسىر كۆرسىتىشىگە پايدىلىق بولۇپ، زەررىچە چوڭلۇقى كىچىك ۋە EE يۇقىرى بولىدۇ. قانداقلا بولمىسۇن، pH قىممىتى 6.5 گە تەڭشەلگەندە، خىتوساندىكى ئامىنو گۇرۇپپىلىرى دېپروتونلىنىپ، خىتوساننىڭ قاتلىنىشىنى كەلتۈرۈپ چىقاردى. شۇڭا، يۇقىرى pH قىممىتى ئامىنو ئىئونلىرىنىڭ TPP ۋە ئىنسۇلىنغا بولغان تەسىرىنى ئازايتىدۇ، بۇنىڭ نەتىجىسىدە كېسىشمە باغلىنىش تۆۋەن، ئاخىرقى ئوتتۇرىچە زەررىچە چوڭ ۋە EE تۆۋەن بولىدۇ.
توڭلىتىپ قۇرۇتۇلغان ۋە پۈركۈپ قۇرۇتۇلغان NP لارنىڭ مورفولوگىيەلىك خۇسۇسىيەتلىرىنى تەھلىل قىلىش سۇسىزلاندۇرۇش ۋە پاراشوك ھاسىل قىلىش تېخنىكىسىنى تاللاشقا يېتەكچىلىك قىلالايدۇ. ئەڭ ياخشى ئۇسۇل دورا مۇقىملىقى، بىردەك زەررىچە شەكلى، يۇقىرى دورا يۈكى ۋە ئەسلى ئېرىتمىدە ياخشى ئېرىشچانلىقىنى تەمىنلىشى كېرەك. بۇ تەتقىقاتتا، ئىككى تېخنىكىنى تېخىمۇ ياخشى سېلىشتۇرۇش ئۈچۈن، سۇسىزلاندۇرۇش جەريانىدا %1 ماننىتول قوشۇلغان ياكى قوشۇلمىغان ئىنسۇلىن NP لىرى ئىشلىتىلدى. ماننىتول توڭلىتىپ قۇرۇتۇش ۋە پۈركۈپ قۇرۇتۇش ئۈچۈن ھەر خىل قۇرۇق پاراشوك فورمۇلالىرىدا چوڭايتىش دورىسى ياكى توڭلىتىش قوغدىغۇچىسى سۈپىتىدە ئىشلىتىلىدۇ. 2a-رەسىمدە كۆرسىتىلگەندەك، ماننىتولسىز لىئوفىللاشتۇرۇلغان ئىنسۇلىن نانو زەررىچىلىرى ئۈچۈن، سىكانىرلاش ئېلېكترون مىكروسكوپى (SEM) ئاستىدا چوڭ، تەرتىپسىز ۋە قوپال يۈزلۈك يۇقىرى تۆشۈكلۈك پاراشوك قۇرۇلمىسى كۆزىتىلدى. سۇسىزلاندۇرۇلغاندىن كېيىن پاراشوكتا ئاز ساندىكى ئايرىم زەررىچىلەر بايقالدى (2e-رەسىم). بۇ نەتىجىلەر كۆپىنچە NP لارنىڭ توڭلىتىش قوغدىغۇچىسىسىز توڭلىتىش جەريانىدا پارچىلىنىپ كەتكەنلىكىنى كۆرسەتتى. %1 ماننىتول قوشۇلغان توڭلىتىپ قۇرۇتۇلغان ۋە پۈركۈپ قۇرۇتۇلغان ئىنسۇلىن نانو زەررىچىلىرى ئۈچۈن، سىلىق يۈزلۈك شار شەكىللىك نانو زەررىچىلەر كۆزىتىلدى (رەسىم 1). 2b,d,f,h). ماننىتولسىز پۈركۈپ قۇرۇتۇلغان ئىنسۇلىن نانو زەررىچىلىرى شار شەكلىدە قالغان، ئەمما يۈزىدە چىرىش بار (2c-رەسىم). شار شەكىللىك ۋە چىرىش بار يۈزلەر تۆۋەندىكى قويۇپ بېرىش ھەرىكىتى ۋە ھۈجەيرە سۈمۈرۈش سىنىقىدا تېخىمۇ چوڭقۇر مۇھاكىمە قىلىنىدۇ. قۇرۇتۇلغان NP لارنىڭ كۆرۈنگەن كۆرۈنۈشىگە ئاساسەن، ماننىتولسىز پۈركۈپ قۇرۇتۇلغان NP لار ۋە ماننىتول بىلەن توڭلىتىپ قۇرۇتۇلغان ۋە پۈركۈپ قۇرۇتۇلغان NP لارنىڭ ھەر ئىككىسى نېپىز NP پاراشوكلىرىنى ھاسىل قىلغان (2f,g,h-رەسىم). زەررىچە يۈزلىرى ئارىسىدىكى يۈز كۆلىمى قانچە چوڭ بولسا، ئېرىشچانلىقى شۇنچە يۇقىرى بولىدۇ، شۇڭا قويۇپ بېرىش سۈرئىتىمۇ شۇنچە يۇقىرى بولىدۇ.
ھەر خىل قۇرۇتۇلغان ئىنسۇلىن NP لىرىنىڭ مورفولوگىيەسى: (a) ماننىتولسىز لىئوفىللاشتۇرۇلغان ئىنسۇلىن NP لىرىنىڭ SEM رەسىمى؛ (b) ماننىتول قوشۇلغان لىئوفىللاشتۇرۇلغان ئىنسۇلىن NP لىرىنىڭ SEM رەسىمى؛ (c) ماننىتولسىز پۈركۈپ قۇرۇتۇلغان ئىنسۇلىن NP لىرىنىڭ SEM رەسىمى؛ (d) ماننىتول بىلەن پۈركۈپ قۇرۇتۇلغان ئىنسۇلىن NP لىرىنىڭ SEM رەسىمى؛ (e) ماننىتولسىز لىئوفىللاشتۇرۇلغان ئىنسۇلىن NP پاراشوكىنىڭ رەسىمى؛ (f) ماننىتول قوشۇلغان لىئوفىللاشتۇرۇلغان ئىنسۇلىن NP لىرىنىڭ رەسىمى؛ (g) ماننىتولسىز پۈركۈپ قۇرۇتۇلغان ئىنسۇلىن NP پاراشوكىنىڭ رەسىمى؛ (h) ماننىتول قوشۇلغان پۈركۈپ قۇرۇتۇلغان ئىنسۇلىن NP پاراشوكىنىڭ رەسىمى.
توڭلىتىپ قۇرۇتۇش جەريانىدا، ماننىتول توڭلىتىشقا قارشى تۇرۇش رولىنى ئوينايدۇ، NP لارنى ئامورف شەكىلدە ساقلايدۇ ۋە مۇز كىرىستاللىرىنىڭ بۇزۇلۇشىنىڭ ئالدىنى ئالىدۇ19. ئەكسىچە، پۈركۈپ قۇرۇتۇش جەريانىدا توڭلىتىش باسقۇچى يوق. شۇڭا بۇ ئۇسۇلدا ماننىتول تەلەپ قىلىنمايدۇ. ئەمەلىيەتتە، ماننىتولسىز پۈركۈپ قۇرۇتۇلغان NP لار ئىلگىرى تەسۋىرلەنگەندەك تېخىمۇ ئىنچىكە NP لارنى ھاسىل قىلىدۇ. قانداقلا بولمىسۇن، ماننىتول پۈركۈپ قۇرۇتۇش جەريانىدا يەنىلا تولدۇرغۇچ رولىنى ئويناپ، NP لارغا تېخىمۇ شار شەكىللىك قۇرۇلما بېرىدۇ20 (2d-رەسىم)، بۇ بۇنداق قاپلانغان NP لارنىڭ بىردەك قويۇپ بېرىش خاراكتېرىگە ئېرىشىشكە ياردەم بېرىدۇ. بۇنىڭدىن باشقا، توڭلىتىپ قۇرۇتۇلغان ۋە پۈركۈپ قۇرۇتۇلغان ماننىتول تەركىبىدىكى ئىنسۇلىن NP لاردا بەزى چوڭ زەررىچىلەرنى بايقىغىلى بولىدىغانلىقى ئېنىق (2b، d-رەسىم)، بۇ ماننىتولنىڭ زەررىچە يادروسىدا قاپلانغان ئىنسۇلىن بىلەن بىرلىكتە توپلىنىشىدىن بولۇشى مۇمكىن. خىتوسان قەۋىتىگە. بۇ تەتقىقاتتا، سۇسىزلانغاندىن كېيىن شار شەكىللىك قۇرۇلمىنىڭ بۇزۇلمىغانلىقىغا كاپالەتلىك قىلىش ئۈچۈن، ماننىتول بىلەن خىتوساننىڭ نىسبىتى 5:1 دە ساقلانغانلىقىنى، شۇڭا كۆپ مىقداردىكى تولدۇرغۇچنىڭ قۇرۇتۇلغان NP لارنىڭ زەررىچە چوڭلۇقىنى چوڭايتقىلى بولىدىغانلىقىنى ئالاھىدە تىلغا ئېلىشقا ئەرزىيدۇ.
فوريېر ئۆزگەرتىش ئىنفىرا قىزىل نۇر ئاجىزلاشتۇرۇلغان ئومۇمىي ئەكس ئەكسىش (FTIR-ATR) سپېكتروسكوپىيەسى ئەركىن ئىنسۇلىن، خىتوسان، خىتوسان، TPP ۋە ئىنسۇلىننىڭ فىزىكىلىق ئارىلاشمىسىنى خاراكتېرلەندۈردى. بارلىق قۇرۇتۇلغان NP لار FTIR-ATR سپېكتروسكوپىيەسى ئارقىلىق خاراكتېرلەندۈرۈلدى. دىققەت قىلىشقا ئەرزىيدىغىنى شۇكى، ماننىتول بىلەن توڭلىتىپ قۇرۇتۇلغان كاپسۇللانغان NP لاردا ۋە ماننىتول بىلەن ۋە ماننىتولسىز پۈركۈپ قۇرۇتۇلغان NP لاردا 1641، 1543 ۋە 1412 cm-1 لىق بەلباغ كۈچلۈكلۈكى كۆزىتىلدى (3-رەسىم). ئىلگىرى خەۋەر قىلىنغاندەك، بۇ كۈچنىڭ ئېشىشى خىتوسان، TPP ۋە ئىنسۇلىن ئوتتۇرىسىدىكى كېسىشمە باغلىنىش بىلەن مۇناسىۋەتلىك. خىتوسان بىلەن ئىنسۇلىننىڭ ئۆزئارا تەسىرىنى تەكشۈرۈشتە، ئىنسۇلىن قاچىلانغان خىتوسان نانو زەررىچىلىرىنىڭ FTIR سپېكترىدا، خىتوسان بەلبېغى ئىنسۇلىن بىلەن قاپلىنىپ، كاربونىل كۈچلۈكلۈكى (1641 cm-1) ۋە ئامىن (1543 cm-1) بەلبېغىنىڭ ئېشىشىنى كۆرسەتتى. TPP نىڭ ئۈچ پولىفوسفات گۇرۇپپىلىرى خىتوساندىكى ئاممونىي گۇرۇپپىلىرى بىلەن باغلىنىدۇ، 1412 cm-1 دا بىر بەلباغ ھاسىل قىلىدۇ.
ئەركىن ئىنسۇلىن، خىتوسان، خىتوسان/TPP/ئىنسۇلىننىڭ فىزىكىلىق ئارىلاشمىسى ۋە ھەر خىل ئۇسۇللار بىلەن سۇسىزلاندۇرۇلغان NPs نىڭ FTIR-ATR سپېكتىرى.
بۇنىڭدىن باشقا، بۇ نەتىجىلەر SEM دا كۆرسىتىلگەن نەتىجىلەر بىلەن ماس كېلىدۇ، بۇ نەتىجىلەردە ماننىتول پۈركۈگەندە ۋە توڭلىتىپ قۇرۇتقاندا كاپسۇللانغان NP لارنىڭ پۈتۈنلۈكىنى ساقلىغانلىقى، ئەمما ماننىتول بولمىغاندا، پەقەت پۈركۈپ قۇرۇتۇش ئارقىلىقلا كاپسۇللانغان زەررىچىلەر ھاسىل بولغانلىقى كۆرسىتىلدى. ئەكسىچە، ماننىتولسىز توڭلىتىپ قۇرۇتۇلغان NP لارنىڭ FTIR-ATR سپېكتر نەتىجىسى خىتوسان، TPP ۋە ئىنسۇلىننىڭ فىزىكىلىق ئارىلاشمىسىغا ئىنتايىن ئوخشايدۇ. بۇ نەتىجە، ماننىتولسىز توڭلىتىپ قۇرۇتۇلغان NP لاردا خىتوسان، TPP ۋە ئىنسۇلىن ئوتتۇرىسىدىكى كېسىشمە باغلىنىشنىڭ يوقلۇقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. توڭلىتىپ قۇرۇتۇش جەريانىدا NP لارنىڭ قۇرۇلمىسى بۇزۇلغان، بۇنى SEM نەتىجىلىرىدىن كۆرۈۋالغىلى بولىدۇ (2a-رەسىم). سۇسىزلاندۇرۇلغان ئىنسۇلىن NP لارنىڭ مورفولوگىيەسى ۋە FTIR نەتىجىلىرىگە ئاساسلانغاندا، ماننىتولسىز NP لارنىڭ پارچىلىنىشى سەۋەبىدىن، پەقەت لىئوفىللاشتۇرۇلغان، پۈركۈپ قۇرۇتۇلغان ۋە ماننىتولسىز NP لار قايتا قۇرۇش تەجرىبىلىرى ۋە ماننىتولسىز NP لار ئۈچۈن ئىشلىتىلگەن. سۇسىزلىنىش. مۇزاكىرە قىلىڭ.
سۇسىزلاندۇرۇش ئۇزۇن مۇددەت ساقلاش ۋە باشقا فورمۇلالارغا قايتا ئىشلەش ئۈچۈن ئىشلىتىلىدۇ. قۇرۇق NP لارنىڭ ساقلانغاندىن كېيىن قايتا ھاسىل بولۇش ئىقتىدارى ئۇلارنى تابلېتكا ۋە پىلاستىنكا قاتارلىق ھەر خىل فورمۇلالاردا ئىشلىتىش ئۈچۈن ئىنتايىن مۇھىم. بىز ماننىتولسىز پۈركۈپ قۇرۇتۇلغان ئىنسۇلىن NP لارنىڭ ئوتتۇرىچە زەررىچە چوڭلۇقى قايتا ھاسىل قىلغاندىن كېيىن ئازراق ئاشقانلىقىنى بايقىدۇق. يەنە بىر تەرەپتىن، پۈركۈپ قۇرۇتۇلغان ۋە توڭلىتىپ قۇرۇتۇلغان ئىنسۇلىن نانو زەررىچىلىرىنىڭ زەررىچە چوڭلۇقى ماننىتول بىلەن كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە ئاشقان (1-جەدۋەل). بۇ تەتقىقاتتا بارلىق NP لارنى قايتا بىرىكتۈرگەندىن كېيىن PDI ۋە EE كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە ئۆزگەرمىگەن (p > 0.05) (1-جەدۋەل). بۇ نەتىجە زەررىچىلەرنىڭ كۆپىنچىسىنىڭ قايتا ئېرىتىلگەندىن كېيىنمۇ ساقلىنىپ قالغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. قانداقلا بولمىسۇن، ماننىتول قوشۇش لىئوفىللاشتۇرۇلغان ۋە پۈركۈپ قۇرۇتۇلغان ماننىتول نانو زەررىچىلىرىنىڭ ئىنسۇلىن يۈكىنى زور دەرىجىدە ئازايتتى (1-جەدۋەل). ئەكسىچە، ماننىتولسىز پۈركۈپ قۇرۇتۇلغان NP لارنىڭ ئىنسۇلىن يۈك مىقدارى ئىلگىرىكىدەك ساقلانغان (1-جەدۋەل).
دورا يەتكۈزۈش مەقسىتىدە ئىشلىتىلگەندە، نانو زەررىچىلەرنىڭ يۈكلىنىشى ناھايىتى مۇھىم ئىكەنلىكى مەلۇم. يۈكلىنىشى تۆۋەن بولغان NP لار ئۈچۈن، داۋالاش چېكىگە يېتىش ئۈچۈن ناھايىتى كۆپ مىقداردا ماتېرىيال تەلەپ قىلىنىدۇ. قانداقلا بولمىسۇن، بۇنداق يۇقىرى NP قويۇقلۇقىنىڭ يۇقىرى يېپىشقاقلىقى ئايرىم-ئايرىم ھالدا ئېغىزدىن ئىچىلىدىغان ۋە ئوكۇل قىلىنىدىغان فورمۇلالاردا قولايسىزلىق ۋە قىيىنچىلىقلارنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ 22. بۇنىڭدىن باشقا، ئىنسۇلىن NP لار يەنە تابلېتكا ۋە يېپىشقاق بىئو پىلاستىنكىلارنى ياساشقا ئىشلىتىلىدۇ 23، 24، بۇ تۆۋەن يۈكلىنىش سەۋىيىسىدە كۆپ مىقداردا NP ئىشلىتىشنى تەلەپ قىلىدۇ، بۇنىڭ نەتىجىسىدە ئېغىزدىن ئىچىلىدىغان چوڭ تابلېتكا ۋە قېلىن بىئو پىلاستىنكىلار پەيدا بولىدۇ. شۇڭا، ئىنسۇلىن يۈكى يۇقىرى بولغان قۇرۇتۇلغان NP لار ئىنتايىن پايدىلىق. بىزنىڭ نەتىجىلىرىمىز شۇنى كۆرسىتىپ بېرىدۇكى، ماننىتولسىز پۈركۈپ قۇرۇتۇلغان NP لارنىڭ يۇقىرى ئىنسۇلىن يۈكلىنىشى بۇ ئالماشتۇرۇش يەتكۈزۈش ئۇسۇللىرى ئۈچۈن نۇرغۇن جەلپ قىلارلىق ئەۋزەللىكلەرنى بېرەلەيدۇ.
بارلىق قۇرۇتۇلغان NP لار توڭلاتقۇدا ئۈچ ئاي ساقلانغان. SEM نەتىجىسىدە، ئۈچ ئايلىق ساقلاش جەريانىدا بارلىق قۇرۇتۇلغان NP لارنىڭ شەكلىدە روشەن ئۆزگىرىش بولمىغانلىقى كۆرسىتىلدى (4-رەسىم). سۇدا قايتا ئىشلەنگەندىن كېيىن، بارلىق NP لاردا EE نىڭ ئازراق تۆۋەنلىگەنلىكى ۋە ئۈچ ئايلىق ساقلاش مەزگىلىدە تەخمىنەن ئاز مىقداردا (~5%) ئىنسۇلىن قويۇپ بېرىلگەنلىكى كۆرسىتىلدى (2-جەدۋەل). قانداقلا بولمىسۇن، بارلىق نانو زەررىچىلەرنىڭ ئوتتۇرىچە زەررىچە چوڭلۇقى ئاشقان. ماننىتولسىز پۈركۈپ قۇرۇتۇلغان NP لارنىڭ زەررىچە چوڭلۇقى 525 نانومېتىرغا يەتكەن، ماننىتول بىلەن پۈركۈپ قۇرۇتۇلغان ۋە توڭلىتىپ قۇرۇتۇلغان NP لارنىڭ زەررىچە چوڭلۇقى ئايرىم-ئايرىم ھالدا 872 نانومېتىر ۋە 921 نانومېتىرغا يەتكەن (2-جەدۋەل).
ئۈچ ئاي ساقلانغان ھەر خىل قۇرۇتۇلغان ئىنسۇلىن NP لىرىنىڭ مورفولوگىيەسى: (a) ماننىتول قوشۇلغان لىئوفىللاشتۇرۇلغان ئىنسۇلىن NP لىرىنىڭ SEM سۈرىتى؛ (b) ماننىتولسىز پۈركۈپ قۇرۇتۇلغان ئىنسۇلىن نانو زەررىچىلىرىنىڭ SEM سۈرىتى؛ (c) ماننىتولسىز پۈركۈپ قۇرۇتۇلغان ئىنسۇلىن NP لىرىنىڭ SEM سۈرىتى.
ئۇنىڭدىن باشقا، ماننىتول بىلەن پۈركۈپ قۇرۇتۇلغان ۋە توڭلىتىپ قۇرۇتۇلغان قايتا ھاسىل قىلىنغان ئىنسۇلىن نانو زەررىچىلىرىدە چۆكمە كۆرۈلگەن (S2-رەسىم). بۇنىڭ سەۋەبى چوڭ زەررىچىلەرنىڭ سۇدا توغرا لەيلەپ قالماسلىقى بولۇشى مۇمكىن. يۇقىرىدىكى نەتىجىلەر پۈركۈپ قۇرۇتۇش تېخنىكىسىنىڭ ئىنسۇلىن نانو زەررىچىلىرىنى سۇسىزلىنىشتىن ساقلايدىغانلىقىنى ۋە ھېچقانداق تولدۇرغۇچ ياكى توڭلىتىش قوغدىغۇچىسىسىز يۇقىرى مىقداردىكى ئىنسۇلىن نانو زەررىچىلىرىگە ئېرىشكىلى بولىدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.
ئىنسۇلىننىڭ ساقلىنىشى سۇسىزلانغاندىن كېيىن ئىنزىملىق ھەزىم قىلىشقا قارشى تۇرۇش ئىقتىدارىنىڭ نامايان قىلىنىشى ئۈچۈن، pH قىممىتى = 2.5 بولغان مۇھىتتا پېپسىن، ترىپسىن ۋە α-خىموترىپسىن بىلەن سىناق قىلىندى. سۇسىزلانغان NP لارنىڭ ئىنسۇلىننىڭ ساقلىنىشى يېڭى تەييارلانغان NP لار بىلەن سېلىشتۇرۇلدى، ھەمدە ئەركىن ئىنسۇلىن مەنپىي كونترول سۈپىتىدە ئىشلىتىلدى. بۇ تەتقىقاتتا، ئەركىن ئىنسۇلىن ئۈچ خىل ئىنزىملىق داۋالاش ئۇسۇلىنىڭ ھەممىسىدە 4 سائەت ئىچىدە ئىنسۇلىننىڭ تېز چىقىرىلىشىنى كۆرسەتتى (5a-c-رەسىم). ئەكسىچە، ماننىتول بىلەن توڭلىتىپ قۇرۇتۇلغان NP لارنىڭ ۋە ماننىتول بىلەن ياكى ماننىتولسىز پۈركۈپ قۇرۇتۇلغان NP لارنىڭ ئىنسۇلىننىڭ چىقىرىلىشى سىنىقى بۇ NP لارنىڭ ئىنزىملىق ھەزىم قىلىشقا قارشى تۇرۇش جەھەتتە كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە يۇقىرى قوغداش ئۈنۈمىنى كۆرسەتتى، بۇ يېڭى تەييارلانغان ئىنسۇلىن NP لارغا ئوخشايدۇ (1-رەسىم). 5a-c). پېپسىن، ترىپسىن ۋە α-خىموترىپسىندىكى نانو زەررىچىلەرنىڭ ياردىمىدە، ئىنسۇلىننىڭ %50 تىن كۆپرەكى، %60 ​​تىن كۆپرەكى 4 سائەت ئىچىدە قوغدىلىشى مۇمكىن (5a-c-رەسىم). بۇ ئىنسۇلىننى قوغداش ئىقتىدارى قان ئايلىنىش سىستېمىسىغا ئىنسۇلىننىڭ سۈمۈرۈلۈشىنىڭ يۇقىرى بولۇش ئېھتىماللىقىنى ئاشۇرۇشى مۇمكىن25. بۇ نەتىجىلەر شۇنى كۆرسىتىپ بېرىدۇكى، ماننىتول بىلەن ياكى ماننىتولسىز پۈركۈپ قۇرۇتۇش ۋە ماننىتول بىلەن توڭلىتىپ قۇرۇتۇش سۇسىزلانغاندىن كېيىن NP نىڭ ئىنسۇلىننى قوغداش ئىقتىدارىنى ساقلاپ قالالايدۇ.
قۇرۇتۇلغان ئىنسۇلىن NP لارنىڭ قوغداش ۋە قويۇپ بېرىش خاراكتېرى: (a) پېپسىن ئېرىتمىسىدىكى ئىنسۇلىننى قوغداش؛ (b) تىرىپسىن ئېرىتمىسىدىكى ئىنسۇلىننى قوغداش؛ (c) α-خىموترىپسىن ئېرىتمىسى ئارقىلىق ئىنسۇلىننى قوغداش؛ (d) pH قىممىتى = 2.5 ئېرىتمىسىدىكى قۇرۇتۇلغان NP لارنىڭ قويۇپ بېرىش خاراكتېرى؛ (e) pH قىممىتى = 6.6 ئېرىتمىسىدىكى قۇرۇتۇلغان NP لارنىڭ قويۇپ بېرىش خاراكتېرى؛ (f) pH قىممىتى = 7.0 ئېرىتمىسىدىكى قۇرۇتۇلغان NP لارنىڭ قويۇپ بېرىش خاراكتېرى.
يېڭىدىن تەييارلانغان ۋە قايتا قۇرۇلغان قۇرۇق ئىنسۇلىن NPs 37 سېلسىيە گرادۇستا ھەر خىل بۇففېرلارغا (pH = 2.5، 6.6، 7.0) قۇيۇلدى، بۇ ئارقىلىق ئاشقازان، ئون ئىككى بارماق ئۈچەي ۋە يۇقىرى ئۈچەينىڭ pH مۇھىتىنى تەقلىد قىلىپ، ئىنسۇلىننىڭ ئىنسۇلىنغا قارشىلىق كۆرسىتىشىگە بولغان تەسىرىنى تەكشۈرۈلدى. ھەر خىل مۇھىتتىكى قويۇپ بېرىش ھەرىكىتى. ئاشقازان-ئۈچەي يولىنىڭ پارچىسى. pH قىممىتى = 2.5 بولغاندا، ئىنسۇلىن قاچىلانغان NPs ۋە ئېرىگەن قۇرۇق ئىنسۇلىن NPs دەسلەپكى بىر سائەت ئىچىدە دەسلەپكى قېتىم پارتىلاپ قويۇپ بېرىلگەن، ئاندىن كېيىنكى 5 سائەت ئىچىدە ئاستا قويۇپ بېرىلگەن (5d-رەسىم). بۇ باشلىنىشتىكى تېز قويۇپ بېرىش، زەررىچىنىڭ ئىچكى قۇرۇلمىسىدا تولۇق ھەرىكەتسىزلەنمىگەن ئاقسىل مولېكۇلاسىنىڭ تېز يۈزەكى دېسوربىيەلىنىشىنىڭ نەتىجىسى بولۇشى مۇمكىن. pH قىممىتى = 6.5 بولغاندا، ئىنسۇلىن قاچىلانغان NPs ۋە قايتا قۇرۇلغان قۇرۇق ئىنسۇلىن NPs سىناق ئېرىتمىسىنىڭ pH قىممىتى NPs تەييارلىغان ئېرىتمىسىنىڭ pH قىممىتىگە ئوخشاش بولغاچقا، 6 سائەت ئىچىدە سىلىق ۋە ئاستا قويۇپ بېرىلگەن (5e-رەسىم). pH قىممىتى = 7 بولغاندا، NPs تۇراقسىز بولۇپ، دەسلەپكى ئىككى سائەت ئىچىدە دېگۈدەك پۈتۈنلەي پارچىلىنىپ كەتكەن (5f-رەسىم). بۇنىڭ سەۋەبى، يۇقىرى pH قىممىتىدە خىتوساننىڭ دېپروتونلىنىشى يۈز بېرىدۇ، بۇ پولىمېر تورىنىڭ ئازراق زىچلىشىشى ۋە قاچىلانغان ئىنسۇلىننىڭ قويۇپ بېرىلىشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ.
ئۇنىڭدىن باشقا، ماننىتولسىز پۈركۈپ قۇرۇتۇلغان ئىنسۇلىن NP لىرى باشقا قۇرۇتۇلغان NP لارغا قارىغاندا تېزراق قويۇپ بېرىلىش نىسبىتىنى كۆرسەتتى (5d-f-رەسىم). ئىلگىرى تەسۋىرلەنگەندەك، ماننىتولسىز قۇرۇتۇلغان قايتا ياسالغان ئىنسۇلىن NP لىرى ئەڭ كىچىك زەررىچە چوڭلۇقىنى كۆرسەتتى. كىچىك زەررىچىلەر چوڭراق يۈزە كۆلىمىنى تەمىنلەيدۇ، شۇڭا ئالاقىدار دورىلارنىڭ كۆپىنچىسى زەررىچە يۈزىدە ياكى ئۇنىڭغا يېقىن جايدا بولىدۇ، بۇنىڭ نەتىجىسىدە دورىنىڭ تېز قويۇپ بېرىلىشىگە ئېرىشىدۇ26.
NP لارنىڭ ھۈجەيرە زەھەرلىكلىكى MTT سىنىقى ئارقىلىق تەكشۈرۈلدى. S4-رەسىمدە كۆرسىتىلگەندەك، بارلىق قۇرۇتۇلغان NP لارنىڭ 50-500 μg/ml قويۇقلۇقتا ھۈجەيرە ھاياتىي كۈچىگە كۆرۈنەرلىك تەسىر كۆرسەتمىگەنلىكى بايقالغان، بۇ بارلىق قۇرۇتۇلغان NP لارنىڭ داۋالىنىش مەزگىلىگە بىخەتەر ئىشلىتىشكە بولىدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.
جىگەر ئىنسۇلىننىڭ فىزىئولوگىيىلىك رولىنى ئىجرا قىلىدىغان ئاساسلىق ئەزا. HepG2 ھۈجەيرىلىرى ئادەتتە سىناق نەيچىسىدىكى جىگەر ھۈجەيرىسىنىڭ قوبۇل قىلىش مودېلى سۈپىتىدە ئىشلىتىلىدىغان ئىنسان جىگەر تومۇر ھۈجەيرە لىنىيىسى. بۇ يەردە، HepG2 ھۈجەيرىلىرى توڭلىتىپ قۇرۇتۇش ۋە پۈركۈپ قۇرۇتۇش ئۇسۇللىرى ئارقىلىق قۇرۇتۇلغان NP لارنىڭ ھۈجەيرە قوبۇل قىلىشىنى باھالاش ئۈچۈن ئىشلىتىلدى. 25 μg/mL قويۇقلۇقتىكى ئەركىن FITC ئىنسۇلىن بىلەن بىر قانچە سائەت ئىنكۇباتسىيە قىلغاندىن كېيىن، ئېقىم سىتومېتىرىيەسى ۋە كۆرۈش ئارقىلىق كونفوكال لازېرلىق سىكانىرلاش ئارقىلىق ھۈجەيرە قوبۇل قىلىشى، يېڭى تەييارلانغان FITC ئىنسۇلىن قاچىلانغان NP لار ۋە تەڭ قويۇقلۇقتىكى قۇرۇتۇلغان FITC ئىنسۇلىن قاچىلانغان NP لار مىقدار مىكروسكوپى (CLSM) كۆزىتىشى ئېلىپ بېرىلدى. ماننىتولسىز لىئوفىللاشتۇرۇلغان NP لار سۇسىزلىنىش جەريانىدا ۋەيران بولدى ۋە بۇ سىناقتا باھالانمىدى. يېڭى تەييارلانغان ئىنسۇلىن قاچىلانغان NP لار، ماننىتول بىلەن لىئوفىللاشتۇرۇلغان NP لار ۋە ماننىتول قوشۇلغان ۋە بولمىغان پۈركۈپ قۇرۇتۇلغان NP لارنىڭ ھۈجەيرە ئىچىدىكى فلۇئورېسسېنسىيە كۈچلۈكلۈكى (6a-رەسىم) 4.3 بولدى، ئەركىن بولغانلارغا قارىغاندا 2.6، 2.4 ۋە 4.1 ھەسسە يۇقىرى. ئايرىم-ئايرىم ھالدا FITC-ئىنسۇلىن گۇرۇپپىسى (رەسىم 6b). بۇ نەتىجىلەر، ئاساسلىقى تەتقىقاتتا ھاسىل بولغان ئىنسۇلىن قاچىلانغان نانو زەررىچىلەرنىڭ كىچىكلىكى سەۋەبىدىن، كاپسۇللانغان ئىنسۇلىننىڭ ھۈجەيرە سۈمۈرۈشىدە ئەركىن ئىنسۇلىنغا قارىغاندا كۈچلۈكرەك ئىكەنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.
يېڭى تەييارلانغان NPs ۋە قۇرۇتۇلغان NPs بىلەن 4 سائەت ئىنكۇباتسىيەدىن كېيىن HepG2 ھۈجەيرىسىنىڭ سۈمۈرۈلۈشى: (a) HepG2 ھۈجەيرىلىرىنىڭ FITC-ئىنسۇلىن سۈمۈرۈلۈشىنىڭ تەقسىملىنىشى. (b) ئېقىن سىتومېتىرىيەسى ئارقىلىق تەھلىل قىلىنغان فلۇئورېسسېنسىيە كۈچلۈكلۈكىنىڭ گېئومېتىرىيەلىك ئوتتۇرىچە قىممىتى (n = 3)، ئەركىن ئىنسۇلىن بىلەن سېلىشتۇرغاندا *P < 0.05.
شۇنىڭغا ئوخشاش، CLSM رەسىملىرى شۇنى كۆرسەتتىكى، يېڭى تەييارلانغان FITC ئىنسۇلىن قاچىلانغان NPs ۋە FITC ئىنسۇلىن قاچىلانغان پۈركۈپ قۇرۇتۇلغان NPs (ماننىتولسىز) نىڭ FITC فلۇئورېسسېنسىيە كۈچلۈكلۈكى باشقا ئەۋرىشكىلەرگە قارىغاندا كۆپ كۈچلۈك ئىدى (6a-رەسىم). بۇنىڭدىن باشقا، ماننىتول قوشۇلغاندا، ئېرىتمىنىڭ يۇقىرى يېپىشقاقلىقى ھۈجەيرىلەرنىڭ سۈمۈرۈلۈشىگە قارشى تۇرۇش كۈچىنى ئاشۇرۇپ، ئىنسۇلىننىڭ كۆپىيىشىنى ئازايتتى. بۇ نەتىجىلەر ماننىتولسىز پۈركۈپ قۇرۇتۇلغان NPs نىڭ ھۈجەيرە سۈمۈرۈش ئۈنۈمى ئەڭ يۇقىرى ئىكەنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ، چۈنكى ئۇلارنىڭ زەررىچە چوڭلۇقى قايتا ئېرىتىلگەندىن كېيىن توڭلىتىلغان قۇرۇتۇلغان NPs دىن كىچىكرەك بولدى.
خىتوسان (ئوتتۇرىچە مولېكۇلا ئېغىرلىقى 100 KDa، %75-85 دېئاتسېتىللانغان) Sigma-Aldrich دىن سېتىۋېلىندى. (Oakville، Ontario، كانادا). ناترىي ترىپولىفوسفات (TPP) VWR دىن سېتىۋېلىندى (Radnor، پېنسىلۋانىيە، ئامېرىكا). بۇ تەتقىقاتتا ئىشلىتىلگەن رېكومبىنات ئىنسان ئىنسۇلىنى Fisher Scientific دىن (Waltham، MA، ئامېرىكا) سېتىۋېلىندى. فلۇئورېسسېئىن ئىزوتىئوسىئانات (FITC) بىلەن بەلگە قويۇلغان ئىنسان ئىنسۇلىنى ۋە 4′،6-دىئامىدىنو-2-فېنىلىندول دىھىدروخلورىد (DAPI) Sigma-Aldrich دىن سېتىۋېلىندى. (Oakville، Ontario، كانادا). HepG2 ھۈجەيرە لىنىيىسى ATCC دىن (Manassas، ۋىرگىنىيە، ئامېرىكا) ئېلىندى. باشقا بارلىق رېئاگېنتلار ئانالىز ياكى خروماتوگرافىيە دەرىجىسىدە ئىدى.
1 مىللىگرام/مىللىلىتىر CS ئېرىتمىسىنى %0.1 ئاتسېتىك كىسلاتا قوشۇلغان قوش قاينىتىلغان سۇدا (DD سۈيى) ئېرىتىپ تەييارلاڭ. TPP ۋە ئىنسۇلىننىڭ 1 مىللىگرام/مىللىلىتىر ئېرىتمىسىنى ئايرىم-ئايرىم ھالدا DD سۈيى ۋە %0.1 ئاتسېتىك كىسلاتادا ئېرىتىپ تەييارلاڭ. ئالدىن ئېمۇلسىيە پولىترون PCU-2-110 يۇقىرى سۈرئەتلىك گوموگېنلاشتۇرغۇچ (Brinkmann Ind. Westbury, NY, USA) بىلەن تەييارلاندى. تەييارلاش جەريانى تۆۋەندىكىچە: ئالدى بىلەن، 4 مىللىلىتىر ئىنسۇلىن ئېرىتمىسىگە 2 مىللىلىتىر TPP ئېرىتمىسى قوشۇلىدۇ، ئارىلاشما 30 مىنۇت ئارىلاشتۇرۇلۇپ تولۇق ئارىلاشتۇرۇلىدۇ. ئاندىن، ئارىلاشما ئېرىتمە يۇقىرى سۈرئەتلىك ئارىلاشتۇرۇش (10،000 ئايلىنىش/مىنۇت) ئاستىدا ئوكۇل ئارقىلىق CS ئېرىتمىسىگە تامچىلاپ قوشۇلىدۇ. ئارىلاشمىلار مۇز سۇيۇقلۇقىدا 30 مىنۇت يۇقىرى سۈرئەتلىك ئارىلاشتۇرۇش (15،000 ئايلىنىش/مىنۇت) ئاستىدا ساقلىنىدۇ، ھەمدە كېسىشمە ئىنسۇلىن NP لىرىنى ئېلىش ئۈچۈن بەلگىلىك pH قىممىتىگە تەڭشەلىدۇ. ئىنسۇلىن NP لىرىنىڭ زەررىچە چوڭلۇقىنى تېخىمۇ گوموگېنلاشتۇرۇش ۋە كىچىكلىتىش ئۈچۈن، ئۇلار... زوند تىپلىق ئاۋاز دولقۇنى ئۈسكۈنىسى (UP 200ST, Hielscher Ultrasonics, Teltow, گېرمانىيە) ئارقىلىق مۇز مۇنچىسىدا قوشۇمچە 30 مىنۇت ئاۋاز دولقۇنى بىلەن تەكشۈرۈلدى.
ئىنسۇلىن NPS نى 25 سېلسىيە گرادۇستا DD سۈيىدە سۇيۇلدۇرۇش ئارقىلىق دىنامىك نۇر چېچىلىش (DLS) ئۆلچەش ئۇسۇلى ئارقىلىق Z-ئوتتۇرىچە دىئامېتىر، كۆپ دىسپېرسلىق كۆرسەتكۈچى (PDI) ۋە زېتا پوتېنسىيالى سىناق قىلىندى. مورفولوگىيە ۋە چوڭلۇق تەقسىملىنىشى Hitachi H7600 ئېلېكترونلۇق مىكروسكوپ (TEM) (Hitachi، توكيو، ياپونىيە) ئارقىلىق خاراكتېرلەندۈرۈلدى، ۋە رەسىملەر كېيىن Hitachi رەسىم يۇمشاق دېتالى (Hitachi، توكيو، ياپونىيە) ئارقىلىق تەھلىل قىلىندى. ئىنسۇلىن NP لىرىنىڭ كاپسۇللاشتۇرۇش ئۈنۈمى (EE) ۋە يۈكلەش سىغىمى (LC) نى باھالاش ئۈچۈن، NP لار مولېكۇلا ئېغىرلىقى چەكلىمىسى 100 kDa بولغان ئۇلترا سۈزۈش تۇرۇبىسىغا قۇيۇلدى ۋە 500 xg دا 30 مىنۇت مەركەزدىن قاچۇرۇلدى. سۈزگۈچتىكى كاپسۇلسىز ئىنسۇلىن تۆت نومۇرلۇق پومپىدىن تەركىب تاپقان Agilent 1100 يۈرۈشلۈك HPLC سىستېمىسى (Agilent، سانتا كلارا، كالىفورنىيە، ئامېرىكا) ئارقىلىق مىقدارلاشتۇرۇلدى. ئاپتوماتىك ئۈلگە ئېلىش ئۈسكۈنىسى، ئىسسىتقۇچ ۋە DAD دېتېكتورى. ئىنسۇلىن C18 ئىستون (Zorbax، 3.5 μm، 4.6 mm × 150 mm، Agilent، ئامېرىكا) ئارقىلىق ئانالىز قىلىندى ۋە 214 nm دا بايقالدى. ھەرىكەتچان باسقۇچ ئاتسېتونىترىل ۋە سۇ بولۇپ، تەركىبىدە %0.1 TFA بار، گرادىيېنت نىسبىتى 10/90 دىن 100/0 گىچە بولۇپ، 10 مىنۇت ئىشلىدى. ھەرىكەتچان باسقۇچ 1.0 ml/min ئېقىم سۈرئىتىدە پومپىلاندى. ئىستون تېمپېراتۇرىسى 20 °C غا تەڭشەلدى. (1) ۋە (2) تەڭلىمىلەرنى ئىشلىتىپ EE ۋە LC نىڭ نىسبىتىنى ھېسابلاڭ.
ئىنسۇلىن NP نى ئەلالاشتۇرۇش ئۈچۈن 2.0 دىن 4.0 گىچە بولغان ھەر خىل CS/ئىنسۇلىن نىسبىتى سىناق قىلىندى. تەييارلاش جەريانىدا ھەر خىل مىقداردىكى CS ئېرىتمىسى قوشۇلدى، ئىنسۇلىن/TPP ئارىلاشمىسى مۇقىم ساقلاندى. بارلىق ئېرىتمىلەرنى (ئىنسۇلىن، TPP ۋە CS) قوشقاندىن كېيىن ئارىلاشمىنىڭ pH قىممىتىنى ئېھتىيات بىلەن كونترول قىلىش ئارقىلىق ئىنسۇلىن NP لىرى 4.0 دىن 6.5 گىچە بولغان pH قىممىتى دائىرىسىدە تەييارلاندى. ئىنسۇلىن NP لىرىنىڭ شەكىللىنىشىنى ئەلالاشتۇرۇش ئۈچۈن، ئىنسۇلىن نانو زەررىچىلىرىنىڭ EE ۋە زەررىچە چوڭلۇقى ھەر خىل pH قىممىتى ۋە CS/ئىنسۇلىن ماسسا نىسبىتىدە باھالاندى.
ئەلالاشتۇرۇلغان ئىنسۇلىن NPs ئاليۇمىن قاچىغا قويۇلۇپ، ئۈستىگە بىر قىسىم لېنتا بىلەن چىڭىتىلغان توقۇلما قەغەز يېپىلدى. كېيىن، بۇرالغان قاچىلار تەخسە قۇرۇتقۇچ ئورنىتىلغان Labconco FreeZone توڭلاتقۇ قۇرۇتقۇچقا (Labconco, Kansas City, MO, USA) سېلىندى. قۇرۇق ئىنسۇلىن NPs ئېلىش ئۈچۈن تېمپېراتۇرا ۋە ۋاكۇئۇم بېسىمى -10 سېلسىيە گرادۇس، دەسلەپكى 2 سائەتتە 0.350 Torr، قالغان 24 سائەتتە 0 سېلسىيە گرادۇس ۋە 0.120 Torr قىلىپ تەڭشەلدى.
كاپسۇللانغان ئىنسۇلىن ئىشلەپچىقىرىش ئۈچۈن Buchi كىچىك پۈركۈش قۇرۇتقۇچ B-290 (BÜCHI، Flawil، شىۋىتسارىيە) ئىشلىتىلگەن. تاللانغان قۇرۇتۇش پارامېتىرلىرى: تېمپېراتۇرا 100 سېلسىيە گرادۇس، يەم ئېقىمى 3 لىتىر/مىنۇت ۋە گاز ئېقىمى 4 لىتىر/مىنۇت.
سۇسىزلىنىشتىن ئىلگىرى ۋە كېيىن ئىنسۇلىن NP لىرى FTIR-ATR سپېكتروسكوپىيەسى ئارقىلىق خاراكتېرلەندى. سۇسىزلانغان نانو زەررىچىلەر، شۇنداقلا ئەركىن ئىنسۇلىن ۋە خىتوسان ئۇنىۋېرسال ATR ئەۋرىشكە ئېلىش ئۈسكۈنىسى (PerkinElmer، Waltham، ماسساچۇسېتس، ئامېرىكا) بىلەن تەمىنلەنگەن Spectrum 100 FTIR سپېكتروفوتومېتىرى (PerkinElmer، Waltham، ماسساچۇسېتس، ئامېرىكا) ئارقىلىق تەھلىل قىلىندى. سىگنال ئوتتۇرىچە قىممىتى 4000-600 cm2 چاستوتا دائىرىسىدە 4 cm2 ئېنىقلىقتا 16 قېتىم سكانلاش ئارقىلىق ئېلىندى.
قۇرۇق ئىنسۇلىن NP لارنىڭ مورفولوگىيەسى Helios NanoLab 650 مەركەزلەشكەن ئىئون نۇرى سىكانىرلاش ئېلېكترون مىكروسكوپى (FIB-SEM) (FEI، Hillsboro، Oregon، ئامېرىكا) تەرىپىدىن تارتىلغان توڭلىتىپ قۇرۇتۇلغان ۋە پۈركۈپ قۇرۇتۇلغان ئىنسۇلىن NP لارنىڭ SEM رەسىملىرى ئارقىلىق باھالاندى. ئىشلىتىلگەن ئاساسلىق پارامېتىر 5 keV توك بېسىمى ۋە 30 mA توك كۈچى ئىدى.
بارلىق سۇسىزلاندۇرۇلغان ئىنسۇلىن NPs dd سۈيىدە قايتا ئېرىتىلدى. زەررىچە چوڭلۇقى، PDI، EE ۋە LC سۇسىزلاندۇرۇلغاندىن كېيىن سۈپىتىنى باھالاش ئۈچۈن ئىلگىرى تىلغا ئېلىنغان ئۇسۇل ئارقىلىق قايتا سىناق قىلىندى. ئانگىدروئىنسۇلىن NPs نىڭ مۇقىملىقىمۇ ئۇزۇن مۇددەت ساقلانغاندىن كېيىن NPs نىڭ خۇسۇسىيىتىنى سىناق قىلىش ئارقىلىق ئۆلچەندى. بۇ تەتقىقاتتا، سۇسىزلاندۇرۇلغاندىن كېيىنكى بارلىق NPs توڭلاتقۇدا ئۈچ ئاي ساقلاندى. ئۈچ ئاي ساقلانغاندىن كېيىن، NPs مورفولوگىيەلىك زەررىچە چوڭلۇقى، PDI، EE ۋە LC جەھەتتىن سىناق قىلىندى.
سۇسىزلانغاندىن كېيىن، ئىنسۇلىننىڭ NP لارنى قوغداشتىكى ئۈنۈمىنى باھالاش ئۈچۈن، 5 مىللىلىتىر قايتا ياسالغان NP نى 45 مىللىلىتىرلىق ئاشقازان سۇيۇقلۇقى (pH 1.2، تەركىبىدە 1% پېپسىن بار)، ئۈچەي سۇيۇقلۇقى (pH 6.8، تەركىبىدە 1% تىرىپسىن بار) ياكى خىموترىپسىن ئېرىتمىسى (100 g/mL، فوسفات بۇفېرىدا، pH 7.8) غا ئېرىتىڭ. ئۇلار 37 سېلسىيە گرادۇستا 100 ئايلىنىش سۈرئىتى بىلەن ئىنكۇباتسىيە قىلىندى. 500 μL ئېرىتمە ھەر خىل ۋاقىت نۇقتىلىرىدا يىغىۋېلىندى ۋە ئىنسۇلىننىڭ قويۇقلۇقى HPLC ئارقىلىق بېكىتىلدى.
يېڭى تەييارلانغان ۋە سۇسىزلاندۇرۇلغان ئىنسۇلىن NP لارنىڭ سىناق نەيچىسىدە قويۇپ بېرىش خۇسۇسىيىتى دىئالىز خالتىسى ئۇسۇلى (مولېكۇلا ئېغىرلىقى چەكلىمىسى 100 kDa، Spectra Por Inc.) ئارقىلىق سىناق قىلىندى. يېڭى تەييارلانغان ۋە قايتا قۇرۇلغان قۇرۇق NP لار ئايرىم-ئايرىم ھالدا pH قىممىتى 2.5، pH 6.6 ۋە pH 7.0 (0.1 M فوسفات-بۇفېرلىق تۇز ئېرىتمىسى، PBS) سۇيۇقلۇقلىرىدا دىئالىز قىلىنىپ، ئاشقازان، ئون ئىككى بارماق ئۈچەي ۋە يۇقىرى ئۈچەينىڭ pH مۇھىتىنى تەقلىد قىلدى. بارلىق ئەۋرىشكىلەر 37 سېلسىيە گرادۇستا ئۈزلۈكسىز چايقىلىپ، 200 ئايلىنىش/مىنۇت سۈرئەت بىلەن ئىنكۇباتسىيە قىلىندى. 5 مىللىلىتىرلىق دىئالىز خالتىسىنىڭ سىرتىدىكى سۇيۇقلۇقنى تۆۋەندىكى ۋاقىتلاردا سۈمۈرۈڭ: 0.5، 1، 2، 3، 4 ۋە 6 سائەت، ۋە دەرھال يېڭى دىئالىزات بىلەن تولدۇرۇڭ. سۇيۇقلۇقتىكى ئىنسۇلىن بۇلغىنىشى HPLC ئارقىلىق ئانالىز قىلىندى، ھەمدە نانو زەررىچىلەردىن ئىنسۇلىننىڭ قويۇپ بېرىش سۈرئىتى قويۇپ بېرىلگەن ئەركىن ئىنسۇلىننىڭ نانو زەررىچىلەرگە ئورالغان ئومۇمىي ئىنسۇلىنغا بولغان نىسبىتىدىن ھېسابلىنىدۇ. (3-تەڭلىمە).
ئىنسان جىگەر راكى ھۈجەيرە لىنىيىسى HepG2 ھۈجەيرىلىرى دىئامېتىرى 60 مىللىمېتىر كېلىدىغان قاچىلاردا %10 ھامىلە كالا قان زەردابى، 100 IU/mL پېنىتسىللىن ۋە 100 μg/mL سترېپتومىتسىن29 نى ئۆز ئىچىگە ئالغان Dulbecco نىڭ ئۆزگەرتىلگەن بۈركۈت ئوتتۇرا ماددىسى (DMEM) ئارقىلىق ئۆستۈرۈلدى. مەدەنىيەتلەر 37 سېلسىيە گرادۇستا، %95 نىسپىي نەملىكتە ۋە %5 CO2 دا ساقلاندى. سۈمۈرۈش سىنىقى ئۈچۈن، HepG2 ھۈجەيرىلىرى 1 × 105 ھۈجەيرە/ml دا 8 قۇدۇقلۇق Nunc Lab-Tek كامېرالىق سىيرىلما سىستېمىسىغا (Thermo Fisher, NY, USA) ئۇرۇقلاندۇرۇلدى. ھۈجەيرە زەھەرلىكلىكىنى سىناق قىلىش ئۈچۈن، ئۇلار 96 قۇدۇقلۇق تاختىلارغا (Corning, NY, USA) 5 × 104 ھۈجەيرە/ml زىچلىقتا ئۇرۇقلاندۇرۇلدى.
MTT سىنىقى يېڭى تەييارلانغان ۋە سۇسىزلاندۇرۇلغان ئىنسۇلىن NPs30 نىڭ سىتوتوزوكلىقىنى باھالاشتا ئىشلىتىلدى. HepG2 ھۈجەيرىلىرى 96 ئۆڭكۈرلۈك تاختىلارغا 5 × 104 ھۈجەيرە/mL زىچلىقتا ئۇرۇقلاندۇرۇلۇپ، سىناق قىلىشتىن 7 كۈن بۇرۇن يېتىشتۈرۈلدى. ئىنسۇلىن NPs يېتىشتۈرۈش مۇھىتىدا ھەر خىل قويۇقلۇقتا (50 دىن 500 μg/mL غىچە) سۇيۇلدۇرۇلۇپ، ئاندىن ھۈجەيرىلەرگە بېرىلدى. 24 سائەتلىك يېتىشتۈرۈشتىن كېيىن، ھۈجەيرىلەر PBS بىلەن 3 قېتىم يۇيۇلدى ۋە 0.5 mg/mL MTT بار مۇھىتتا يەنە 4 سائەت يېتىشتۈرۈلدى. سىتوتوزوكلىقى Tecan infinite M200 pro سپېكتروفوتومېتىر تاختىسى ئوقۇغۇچ (Tecan, Männedorf, شىۋىتسارىيە) ئارقىلىق سېرىق تېترازولىي MTT نىڭ 570 nm دا بىنەپشە فورمازانغا ئېنزىملىق قايتۇرۇلۇشىنى ئۆلچەش ئارقىلىق باھالاندى.
NP لارنىڭ ھۈجەيرە قوبۇل قىلىش ئۈنۈمى كونفوكال لازېرلىق سىكانىرلاش مىكروسكوپى ۋە ئېقىم سىتومېتىرىيەسى ئانالىزى ئارقىلىق سىناق قىلىندى. Nunc Lab-Tek كامېرالىق سىيرىلما سىستېمىسىنىڭ ھەر بىر قۇدۇقى ئەركىن FITC-ئىنسۇلىن، FITC-ئىنسۇلىن قاچىلانغان NP بىلەن بىر تەرەپ قىلىندى ۋە ئوخشاش قويۇقلۇقتا 25 μg/mL قۇرۇتۇلغان FITC-ئىنسۇلىن NP لارنى قايتا قۇرۇتۇلۇپ، 4 سائەت ئىنكۇباتسىيە قىلىندى. ھۈجەيرىلەر PBS بىلەن 3 قېتىم يۇيۇلۇپ، %4 پارافورمالدېھىد بىلەن بېكىتىلدى. يادرولار 4′,6-دىئامىدىنو-2-فېنىلىندول (DAPI) بىلەن بوялدى. Olympus FV1000 لازېرلىق سىكانىرلاش/ئىككى فوتونلۇق كونفوكاللىق مىكروسكوپ (Olympus, Shinjuku City, توكيو, ياپونىيە) ئارقىلىق ئىنسۇلىننىڭ ئورنى كۆزىتىلدى. ئېقىم سىتومېتىرىيەسى ئانالىزى ئۈچۈن، ئوخشاش قويۇقلۇقتىكى 10 μg/mL ئەركىن FITC-ئىنسۇلىن، FITC-ئىنسۇلىن قاچىلانغان NP لار ۋە قايتا ئېرىتىلگەن قۇرۇتۇلغان FITC-ئىنسۇلىن NPs 96 ئۆڭكۈرلۈك تەخسىلەرگە HepG2 ھۈجەيرىلىرى ئۇرۇقلۇق قىلىنىپ، 4 سائەت ئىنكۇباتسىيە قىلىندى. 4 سائەت ئىنكۇباتسىيەدىن كېيىن، ھۈجەيرىلەر ئېلىۋېتىلىپ، FBS بىلەن 3 قېتىم يۇيۇلدى. ھەر بىر ئەۋرىشكە 5 × 104 ھۈجەيرە BD LSR II ئېقىم سىتومېتىرى (BD، Franklin Lakes، New Jersey، ئامېرىكا) ئارقىلىق ئانالىز قىلىندى.
بارلىق قىممەتلەر ئوتتۇرىچە قىممەت ± ئۆلچەملىك چەتنىش شەكلىدە ئىپادىلىنىدۇ. بارلىق گۇرۇپپىلار ئوتتۇرىسىدىكى سېلىشتۇرمىلار IBM SPSS Statistics 26 for Mac (IBM, Endicott, نيۇ-يورك، ئامېرىكا) تەرىپىدىن بىر تەرەپلىمە ANOVA ياكى t-سىناق ئارقىلىق باھالانغان بولۇپ، p < 0.05 ستاتىستىكىلىق جەھەتتىن مۇھىم دەپ قارالغان.
بۇ تەتقىقات پۈركۈپ قۇرۇتۇشنىڭ ئۆز-ئارا باغلىنىشلىق خىتوسان/TPP/ئىنسۇلىن نانو زەررىچىلىرىنى سۇسىزلاندۇرۇشتىكى ئەۋرىشىمچانلىقى ۋە ئىقتىدارىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ، بۇ ئۇسۇل ئۆلچەملىك توڭلىتىش-قۇرۇتۇش ئۇسۇللىرىغا سېلىشتۇرغاندا تېخىمۇ ياخشى قايتا قۇرۇشقا ئېرىشىدۇ، بۇ ئۇسۇللار چوڭايتىش دورىسى ياكى توڭلىتىش قۇۋۋىتىنى ئىشلىتىپ، يۇقىرى يۈك كۆتۈرۈش ئىقتىدارىغا ئىگە. ئەڭ ياخشىلانغان ئىنسۇلىن نانو زەررىچىلىرى ئوتتۇرىچە زەررىچە چوڭلۇقى 318 نانومېتىر، قاپلاش ئۈنۈمى 99.4% بولغان. سۇسىزلاندۇرۇلغاندىن كېيىنكى SEM ۋە FTIR نەتىجىلىرى شۇنى كۆرسەتتىكى، شار شەكىللىك قۇرۇلما پەقەت ماننىتول قوشۇلغان ۋە ماننىتولسىز ۋە لىئوفىللاشتۇرۇلغان پۈركۈپ قۇرۇتۇلغان NP لاردا ساقلانغان، ئەمما ماننىتولسىز لىئوفىللاشتۇرۇلغان NP لار سۇسىزلاندۇرۇش جەريانىدا پارچىلانغان. قايتا قۇرۇش ئىقتىدارى سىنىقىدا، ماننىتولسىز پۈركۈپ قۇرۇتۇلغان ئىنسۇلىن نانو زەررىچىلىرى ئەڭ كىچىك ئوتتۇرىچە زەررىچە چوڭلۇقى ۋە قايتا قۇرۇشتا ئەڭ يۇقىرى يۈكلىنىشنى كۆرسەتتى. بۇ سۇسىزلاندۇرۇلغان NP لارنىڭ ھەممىسىنىڭ قويۇپ بېرىش خۇسۇسىيىتى ئۇلارنىڭ pH قىممىتى = 2.5 ۋە pH قىممىتى = 7 بولغان ئېرىتمىلەردە تېز قويۇپ بېرىلىدىغانلىقىنى، pH قىممىتى = 6.5 بولغان ئېرىتمىلەردە ناھايىتى مۇقىم ئىكەنلىكىنى كۆرسەتتى. باشقا قايتا ئېرىتكۈچىلەرگە سېلىشتۇرغاندا. سۇسىزلاندۇرۇلغان NPs، ماننىتولسىز پۈركۈپ قۇرۇتۇلغان NPs ئەڭ تېز قويۇپ بېرىلىش نەتىجىسىنى كۆرسەتتى. بۇ نەتىجە ھۈجەيرە سۈمۈرۈش سىنىقىدا كۆزىتىلگەن نەتىجە بىلەن ماس كېلىدۇ، چۈنكى ماننىتولسىز پۈركۈپ قۇرۇتۇلغان NPs يېڭى تەييارلانغان NPs نىڭ ھۈجەيرە سۈمۈرۈش ئۈنۈمىنى دېگۈدەك تولۇق ساقلاپ قالغان. بۇ نەتىجىلەر ماننىتولسىز پۈركۈپ قۇرۇتۇش ئارقىلىق تەييارلانغان قۇرۇق ئىنسۇلىن نانو زەررىچىلىرىنىڭ ئېغىزدىن ئىچىلىدىغان تابلېتكا ياكى بىئو چاپلاش پىلاستىنكىسى قاتارلىق باشقا سۇسىز دورا شەكىللىرىگە تېخىمۇ ماس كېلىدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.
ئەقلىي مۈلۈك مەسىلىسى سەۋەبىدىن، نۆۋەتتىكى تەتقىقات جەريانىدا ھاسىل قىلىنغان ۋە/ياكى تەھلىل قىلىنغان سانلىق مەلۇماتلار ئاممىۋىي ئاشكارىلانمىغان، ئەمما مۇۋاپىق تەلەپ بويىچە ئايرىم ئاپتورلاردىن ئېرىشكىلى بولىدۇ.
كاگان، A. 2-تىپلىق دىئابېت: ئىجتىمائىي ۋە ئىلمىي كېلىپ چىقىشى، داۋالاش جەھەتتىكى قىيىنچىلىقلىرى ۋە بىمارلار ۋە باشقىلارغا بولغان تەسىرى. (McFarlane, 2009).
سىڭ، AP، گۇئو، ي.، سىڭ، ئا.، شيې، ۋ. ۋە جياڭ، پ. ئىنسۇلىننى قاپلاش ئۇسۇلىنىڭ تەرەققىياتى: ھازىر ئېغىزدىن ئىچىشكە بولامدۇ؟ J. Pharmacy.bio-pharmacy.reservoir.1، 74–92 (2019).
Wong, CY, Al-Salami, H. & Dass, CR دىئابىت كېسىلىنى داۋالاشتا ئېغىزدىن ئىچىلىدىغان ئىنسۇلىن قوشۇلغان لىپوسوما يەتكۈزۈش سىستېمىسىدىكى يېقىنقى ئىلگىرىلەشلەر. Interpretation. J. Pharmacy. 549, 201–217 (2018).